2. Đặc điểm hoá học
2.3. Định lượng anthranoid
Chịẽt xuất:
Cân chính xác 0,5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 250ml có lắp sinh hàn hồi lưu. Thêm 7,5ml acid acetic băng. Đun sôi trên bếp điện có lưới amiăng. Sau khi để nguội thêm vào bình (qua ống sinh hàn ngược) 30ml ether ethylic. Đun sôi 15phút trên nồi cách thuỷ. Làm nguội dịch chiết. Gạn hỗn hợp ether-acid quả phễu có giấy lọc gấp nhỏ vào bình gạn 100ml. Bột trong bình cung với giấy vừa lọc được đun hồi lưu tiếp tục với 20ml ether ethylic trong 10 phút. Gạn dịch chiết qua phễu có giấy lọc vào bình gạn trên. Rửa bình và giấy lọc với 10 ml ether ethylic.
Làm ỵhản ứng' màu:
Cho từ từ vào bình gạn có chứa dịch chiết ether 15ml dung dịch NaOH 40%. Lắc nhẹ (làm lạnh dưới vòi nước nếu cần). Thêm vào bình gạn 25ml dung dịch NaOH 5% có chứa 2% amoniac. Lắc đều. Gạn lớp nước có màu đỏ sim vào bình định mức 100,0 ml. Tiếp tục lắc lớp ether với dung dịch NaOH 5% có chứa 2% amoniac đến khi lớp nước không còn có màu. Thêm dung dịch NaOH 5% có chứa 2% amoniac vào bình định mức đến đủ 100,0 ml. Rót dung dịch ra cốc có mỏ dung tích 200ml rồi đặt lên nồi cách thuỷ đun sôi trong 20 phút. Để nguội cho lại vào bình định mức. Thêm dung dịch NaOH 5% có chứa 2% amoniac cho đủ 100,0 ml.
tìo mát đô auaníi:
Đo mật độ quang trên máy ƯV-VIS HEẰ.IOS vói bước sóng Ả= 455 nm. Song song có dung dịch làm chứng:
Hoá chất:
Acid acetic băng 7,5m l(l).
Dung dịch NaOH 40% 15ml (2).
Dung dịch NaOH 5% có chứa 2% amoniac vđ 100,0 ml (3). Mẫu chứng 1: (1) + (2) + (3).
Đồ thị chuẩn được thành lập từ dung dịch Cobalt clorid. Cách tiến hành:
Cân chính xác 5,000g Cobalt clorid tinh khiết. Hoà tan bằng nước cất trong cốc thuỷ tinh có mỏ. Dung dịch chuyển vào bình định mức 100,0ml. Tráng cốc bằng nước cất chuyển vào bình định mức trên. Thêm nước cho tói vạch.
Pha loãng dung dịch Cobalt clorid thu được bằng nước cất để có các nồng độ từ 0,2-5%. Đo mật độ quang của cácdung dịch này. Thành lập đồ thị chuẩn với trục tung là mật độ quang đã đo được, trục hoành là nồng độ mg% của các dẫn chất anthraquinon tương ứng: theo quy ước mật độ quang của dung dịch Cobalt clorid 1% bằng mật độ quang của dung dịch 0,36mg 1,8 dihydroxy anthraquinon trong 100,0ml dung dịch kiềm amoniac.
Dung dịch mẫu chứng: nước cất.
Kết quả:
Quy ước: Ccb (g%)= Nồng độ dung dịch C o d 2 g/100ml. Can (mg%) = Nồng độ mg% dẫn chất anthranoid. D = Mật độ quang đo được.
Qb (8%) 0,2 0,5 0,8 1 1,5 2 2,5 3 4 5 0 Q> (mg%) 0,07 0,18 0,29 036 0,54 0,72 0,90 1,08 1,44 1,80 0 D 0,045 0,058 0,113 0,117 0,155 0,225 0,245 031 0,431 0,524 0
(D) 0,6 y = 28,297x + 0,0122 0,5 R2 = 0,9943y S 0,4 0,3 0,2 0,1 n Ã^ mg% 0,00% 0,50% 1,00% 1,50% 2,00% Từ đó, ta có : y = 28,297x + 0,0122 Tính kết quả:
Hàm lượng % dẫn chất anthranoid trong dược liệu được tính theo công
y_ CxVxk
thưc: Ị ữ ^rxiOxỢOO-/*) Aov
C: nồng độ mg% của dẫn chất anthranoid đọc được trên đồ thị. V: thể tích ban đầu của dịch chiết.
K: hệ số pha loãng của dung dịch. a: khối lượng dược liệu tính bằng gam.
h: độ ẩm phần trăm của dược liệu được xác định bằng máy )
Ghi chú:
Kết quả thu được từ phương pháp trên là phản ánh lượng anthranoid toàn phần bao gồm dạng tự do, dạng glycosid, dạng oxy hoá và dạng khử.
- Khi định lượng dạng tự do, bỏ qua quá trình thuỷ phân với acid acetic.
- Khi định lượng dạng oxy hoá, bỏ qua quá trình đun nóng 20 phút trước khi so màu.
- Kết quả dạng khử được tính từ mật độ quang của hiệu số 2 lần đo trước và sau khi đun nóng.
- Nồng độ dạng glycosid là hiệu số giữa nồng độ phần trăm dạng anthranoid toàn phần và dạng tự do.
Kết quả định lượng được thể hiện ở các bảng sau: Quy ước: STT = Lần định lượng;
M (g) = Khối lượng dược liệu (gam). D = Mật độ quang;
c = Nồng độ mg%.
X = Hàm lượng % dẫn chất anthranoid. TB = Giá trị trung bình các lần định lượng.
Bảng 1: Hàm lượng dẫn chất anthranoid dạng oxy hoá, dạng khử và dạng toàn phần trong quả Nhàu Morinda citrifolia L.
STT M(g) Dctdl D* Qxh Qh X%oxh x%tp x%kh
1 0,501 0,27 035 0,07 7,68 9,77 2,11 1,75 2,23 0,48 2 0,503 0,28 0,35 0,07 7,91 10,00 2,11 1,79 2,27 0,48 3 0,514 029 0,36 0,07 8,11 10,14 2,05 1,80 225 0,46
TB 1,78 2,25 0,47
Như vậy, hàm lượng anthranoid trong quả nhàu Morỉnda citrifolia L. là: Dạng oxy hoá ~ 1,78 mg%.
Dạng khử ~ 0,47 mg%. Dạng toàn phần ~ 2,25 mg%
Bảng 2: Hàm lượng dẫn chất anthranoid dạng oxy hoá, dạng khử và dạng toàn phần trong quả nhàu núi.
STT M(g) Du Q*h Qh X%oxh x%tp x%khử
1 0,505 0,2 028 0,08 5,53 7,88 2,36 1,18 1,68 0,50 2 0,492 0,18 0,27 0,09 5,13 7,57 2,45 1,12 1,65 0 3 3 0,503 0,19 0,27 0,09 533 7,74 2,42 1,14 1,65 0,52
TB 1,15 1,66 0,52
Hàm lượng anthranoid trong quả nhàu núi chiếm: Dạng oxy hoá ~ 1,15 mg%.
Dạng khử ~ 0,52 mg%. Dạng toàn phần ~ 1,66 mg%
Bảng 3: Hàm lượng dẫn chất anthranoid dạng aglycon và glycosid trong quả nhàu Morinda citrifolia L.,
STT M (g) Dtd ctd x % td x % g l
1 0,531 0,05 1,40 0,30 1,95
2 0,542 0,05 1,48 0,31 1,94
3 0,504 0,05 1,29 0,29 1,96
TB 0,30 1,95
Trong quả nhàu Morinda citrifolia L. có hàm lượng anthranoid là: - Dạng tự do ~ 0,30 mg%.
- Dạng glycosid ~ 1,95 mg%.
Bảng 4: Hàm lượng dẫn chất anthranoid dạng aglycon glycosid trong quả núi
STT M(g) Dtd Ctd x% td x% gl
1 0,507 0,04 1,17 0,25 1,41
2 0,504 0,039 1,12 0,24 1,42
3 0,513 0,045 1,29 0,27 1,39
TB 0,25 1,41
Trong quả nhàu núi hàm lượng anthranoid là: - Dạng tự do ~ 0,25 mg%.
- Dạng glycosid ~ 1,41 mg%.