2. Đặc điểm hoá học
2.2.Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao (HPTLC)
Các bước tiến hành:
- Chuan bi dich cham sắc ký: theo 3 cách: ♦♦♦ Cách 1: Dịch chiết trong methanol.
Tiến hành: Cho khoảng lg bột dược liệu vào ống nghiệm to, thêm 10ml methanol, đun cách thuỷ đến sôi. Lọc qua giấy lọc đã thấm ướt methanol thu được dịch chiết cần thiết.
Thành phần: Toàn bộ các thành phần trong dược liệu. ❖ Cách 2: Dịch chiết trong chloroform [18].
Tiến hành: Lấy khoảng 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 50ml, thêm 15ml acid H2S04 IN. Đun trực tiếp trên nguồn nhiệt đến sôi. Lọc nóng qua một lớp bông mỏng vào bình gạn dung tích 60ml, làm nguội dịch lọc. Thêm 5ml ether ethylic, lắc nhẹ. Gạn lấy lớp ether ethylic. Bốc hơi cẩn thận đến gần khô. Hoà tan cắn trong chloroform. Dùng dung dịch này đê chấm sắc ký.
Thành phần: nghiên cứu sự có mặt của các hợp chất anthranoid. ❖ Cách 3: Hoà tan tinh thể vi thăng hoa.
Tiến hành: Vi thăng hoa bột dược liệu như phần định tính anthranoid. Dùng dung môi Methanol để hoà tan các tinh thể, được dịch để chấm sắc ký.
Thành phần: Các hợp chất trong dược liệu có khả năng thăng hoa.
Chat hag phu: Bản mỏng tráng sẩn Silicagen 60 GF254 (MERCK).
Cham dich chiết: Sử dụng máy CAMAG-Linomat 5, phần mềm WINCATS.
Duns môi khai triển: ethyl acetat - chloroform (1:4).
Hiên vết: soi u v , dung dịch KOH 10% trong cồn.
Cỉuip ảnỊv hệ thống CAMAG reprostar3 kết hợp với phần mềm WINCATS. Kết quả:
cTrang 29>: Rf X 100 và đặc điểm của các vết cho bởi các sắc đồ.
Quy ước: Cường độ vết: +++ = rõ; ++ = Trung bình;+ = yếu; - = không có hoặc không rõ, Rf= RfxlOO;
cTrang 30>: Hình ảnh sắc đồ dưới các ánh sáng bước sóng khác nhau (Hình 11, 12, 13) với thứ tự vết (kèm theo quy ước viết tắt và cách chuẩn bị dịch chấm):
1. Dịch chiết thân nhàu núi trong methanol (Thân Mt/Me, cách 1). 2. Dịch chiết thân nhàu trong methanol (Thân Mc/Me, cách 1).
3. Dịch hoà tan tinh thể vi thăng hoa lá nhàu núi (VTH lá Mt, cách 3). 4. Dịch chiết lá nhàu núi (Lá Mt/Me, cách 1).
5. Dịch hoà tan tinh thể vi thăng hoa quả nhàu núi (VTHQuả Mt, cách 3). 6. Dịch chiết quả nhàu núi trong methanol (Quả Mt/Me, cách 1).
7. Dịch chiết quả nhàu trong methanol (Quả Mc/Me, cách 1).
8. Dịch hoà tan tinh thể vi thăng hoa cành nhàu núi (VTHcành Mt,cách 3). 9. Dịch chiết cành nhàu núi trong methanol (Cành Mt/Me, cách 1).
10. Dịch hoà tan tinh thể vi thăng hoa vỏ thân nhàu núi (VTHVthMt, cách 3) 11. Dịch chiết vỏ thân cành nhàu núi trong methanol (Vth Mt/Me, cách 1). 12. Dịch chiết thân nhàu núi trong chloroform (Thân Mt/Clo, cách 2). 13. Dịch chiết thân nhàu trong chloroform (Thân Mc/Clo, cách 2). 14. Dịch hoà tan tinh thể vi thăng hoa quả nhàu (VTH quả Mc, cách3) 15. Dịch chiết thân nhàu núi trong chloroform (Quả Mt/Clo, cách 2). 16. Dịch chiết quả nhàu trong chloroform (Quả Mc/Clo, cách 2).
Stt Dịch CÓ thuốc thử 254nm 366nm 1 Mt/MeThân Rf 9 15 69 78 9 15 33 45 55 69 Vết + ++ - - - - ++ ++ + + - ++ + + - ++ 2 Mc/MeThân Rf 9 15 27 45 55 69 9 15 27 33 45 55 69 78 9 15 27 33 45 55 69 69 Vết + ++ +++ +++ - +++ ++ + ++ + +++ + +++ ++ ++ + + + +++ + ++ ++ ++ 3 VTH lá Rf 15 27 69 78 27 33 45 69 78 Mt Vết - ++ ++ ++ ++ - - ++ ++ + + + 4 Lá Rf 15 48 69 9 69 78 9 15 27 30 33 45 55 69 MƯMe Vết - ++ - - - ++ - ++ ++ - - - - ++ ++ ++ + + + ++ +++ +++ +++ R VTHQuả Rf 15 27 69 78 27 33 45 69 78 Mt Vết - ++ ++ ++ ++ - - ++ ++ + + + 6 Quả Rf 15 48 69 9 69 78 9 15 27 30 33 45 55 69 Mt/Me Vết - ++ - - ++ - ++ ++ - - - - ++ ++ ++ + + + ++ +++ +++ +++ 7 Quả Rf 9 33 15 27 33 78 9 33 Mc/Me Vết + - - ++ - - - - - + + +++ - - - + ++ - - - +++ - - - 8 VTH Rf 15 27 69 78 27 33 45 69 78 cành Mt Vết - ++ ++ ++ ++ - - ++ ++ + + + 9 Cành Rf 9 15 69 78 9 15 33 45 55 69 Mt/Me Vết - - - - - - - - + ++ - - - - ++ ++ + + ++ + + - ++ 10 VTHVth Rf 15 27 69 78 27 33 45 69 78 Mt Vết - ++ ++ ++ ++ - - ++ ++ + + + q vth Rf 9 15 69 78 9 15 33 45 55 69 Mt/Me Vết + ++ - - - - ++ ++ + + ++ + + - ++ 12 Thân Rf 9 15 25 33 45 55 69 9 15 25 33 45 55 69 78 9 27 33 55 69 Mt/ Clo Vết ++ ++ +++ ++ ++ +++ ++ - ++ ++ +++ + + ++ ++ + - ++ +++ ++ ++ - 13 Thân Rf 9 15 33 9 15 25 33 45 55 69 78 9 27 33 55 Mc/Clo Vết + ++ - ++ - - - - - ++ ++ +++ + ++ + ++ + - ++ +++ ++ - - 14 VTH Rf 27 9 15 25 9 27 33 45 55 69 quả Me Vết - - +++ - - - - - - ++ ++ - - - - - + - ++ +++ + + - + 15 Quả Rf 15 25 62 69 9 15 33
Hình 12 : sắc ký đồ dưới ánh sáng 254nm
Hình 13 : sắc ký đồ dưới ánh sáng 366nm
2, 3 fit T í 7- g 9 AO 41 42. 4 ò AS~ 46