2. Đặc điểm hoá học
2.1. Định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ có trong dược liệu
Tiến hành phản ứng định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ với các dược liệu: Quả, thân, lá, vỏ thân của cây Nhàu núi và quả, thân, lá của cây Nhàu.
Anthranoid:
- Phản ứng Borntraeger:
Lấy khoảng 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml acid H2S04 IN. Đun cách thuỷ sôi 15 phút. Lọc nóng qua một lớp bông mỏng vào bình gạn dung tích 100ml, làm nguội dịch lọc. Thêm 5ml ether ethylic, lắc nhẹ. Gạn lấy lớp ether ethylic làm phản ứng.
Lấy lml dịch chiết ether ethylic cho vào ống nghiệm, thêm lml dung dịch NaOH 10%. Lắc nhẹ. Lớp nước sẽ có màu đỏ sim khi dịch chiết chứa hợp chất anthranoid.
Kết quả:
Lớp nước màu đỏ sim với tất cả các dược liệu nghiên cứu.
- Vi thăng hoa: Cho một ít bột dược liệu vào một nút chai bằng kim loại. Đưa lên trên ngọn lửa đèn cồn có cách lưới amiăng, để một lúc cho bay hết hơi nước. Đậy lên một phiến kính mặt trên có để một ít bông thấm nước. Để khoảng 5-10 phút, lấy ra, quan sát dưới kính hiển vi (vật kính số 10) thấy các tinh thể anthranoid hình kim màu vàng.
Kết quả:
Quan sát thấy tinh thể hình kim màu vàng với: tất cả các dược liệu thực nghiệm.
Sơ bộ kết luận: Có anthranoid trong các dược liệu nghiên cứu.
Đinh tính Alcaloid
Cho 5,00g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thấm ẩm dược liệu bằng H2S04 5%, sau 15 phút thêm 30ml H2S04 5%, lắc 10-15 phút, để 24 giờ. Lọc lấy dịch chiết acid qua giấy lọc để làm phản ứng định tính với các thuốc thử chung của Alcaloid:
Ông 1: 2-3 giọt thuốc thử Mayer, xuất hiện tủa trắng.
Ống 2: 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff, thấy xuất hiện tủa đỏ. Ống 3: 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat, thấy xuất hiện tủa da cam. Với cả 3 loại thuốc thử đều cho kết quả sau:
Phản ứng dương tính với: quả, lá Nhàu; quả, lá Nhàu núi. Phản ứng âm tính với: thân Nhàu; thân, vỏ thân Nhàu núi
Sơ bộ kết luận: Lá, quả cây Nhàu, Nhàu núi có chứa alcaloiđ. Thân Nhàu, thân, vỏ thân Nhàu núi không có alcaloid.
Đinh tính Glycosỉd tim
Cho lOg dược liệu vào bình nón 250ml, thêm 100ml nước lắc đều ngâm qua đêm, lọc bỏ bã, thêm vào dịch lọc dung dịch chì acetat 10% cho đến khi tủa hết chất nhầy, nhựa, để lắng, lọc loại chì acetat thừa bằng Na2S04 30%. Đến khi dịch lọc không tủa với Na2S04 nữa, lọc lấy cho vào bình gạn. Chiết glycosid tim bằng 25ml chloroform (chia 3 lần: 10ml, 10ml, 5ml). Lắc kỹ, để lắng, gạn lấy lớp dung môi, loại nước bằng bông. Cho dịch chiết vào 3 ống nghiệm nhỏ, đem cô cách thuỷ đến khô. cắn thu được dùng để làm các phản ứng:
- Phản ứng Baljet:
Cho vào ống nghiệm chứa cắn lml ethanol 90°, lắc đều cho cắn được hoà tan hết, thêm thuốc thử Baljet mới pha (1 phần dd acid picric 1 % và 9 phần dung dịch NaOH 10%) cho đến khi xuất hiện màu đỏ cam.
- Phản ứng Liebermann:
Cho vào ống nghiệm chứa cắn khoảng 0,5ml anhydrid acetic lắc đều cho tan hết cắn, đặt nghiêng ống 45°, thêm 0,5ml ddH2S04 đặc theo thành ống nghiệm để dịch lỏng trong ống nghiệm được chia làm hai lớp: ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng xuất hiện vòng tím đỏ.
Cho vào ống nghiệm chứa cắn lml ethanol 90°, lắc đều cho tan hết cắn thêm 1 giọt thuốc thử Natri nitroprusiat 0,5% và 2 giọt dd Na()H10%, lắc đều: xuất hiện màu đỏ nhưng chóng mất.
Kết quả: Phản ứng âm tính với các dược liệu thực nghiệm.
Sơ bộ kết luận: không có glycosid tim trong dược liệu nghiên cứu.
Đinh tính Tanin
Cho 2g bột dược liệu vào bình nón dung tích 50ml, thêm 20 ml nước cất đun sôi trong 10 phút, lọc qua giấy lọc, lấy dịch lọc làm các phản ứng sau:
Ống 1: lml dịch lọc thêm 1 giọt dd FeCl3 5%, xuất hiện màu xanh đen.
/v' ?
Ong 2: lml dịch lọc thêm vài giọt dd đồng acetatl0% cho tủa. Ống 3: lml dịch lọc thêm vài giọt dd chì acetat 10% cho tủa bông. Ống 4: lml dịch lọc thêm lml dd gelatin 1% cho tủa bông trắng.
Kết quả:
Quả, thân, vỏ thân Nhàu núi cho phản ứng âm tính vói thuốc thử là dung dịch FeCl3 5%.
Các trường hợp còn lại đều cho phản ứng dương tính. Sơ bộ kết luận: Có Tanin trong các dược liệu nghiên cứu.
Đinh tính Saponin
Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho khoảng 0,lg bột dược liệu vào ống nghiệm to dài khoảng 16cm, thêm 5ml nước, đun sôi nhẹ, lọc vào ống nghiệm rồi lắc nhẹ trong 5 phút theo dọc chiều ống. Để yên quan sát hiện tượng tạo bọt, thấy có cột bọt bền sau khi ngừng lắc 15 phút ở dịch chiết quả, lá, thân Nhàu và quả, lá Nhàu núi.
Sơ bộ kết luận: quả, lá, thân Nhàu và quả, lá Nhàu núi có chứa saponin.
Đinh tính đường khử
Cho lml dịch chiết nước như phần định tính tanin vào ống nghiệm, thêm 4 giọt thuốc thử Fehling A và 4 giọt thuốc thử Fehling B đun sôi cách thuỷ 5 phút. Quan sát thấy xuất hiện tủa đỏ gạch (phản ứng dương tính) với quả, lá
của cây Nhàu, Nhàu núi; phản ứng âm tính với thân Nhàu, thân, vỏ thân Nhàu núi.
Sơ bộ kết luận: có đường khử trong lá, quả cây Nhàu và Nhàu núi.
Đinh tính acid hữu cơ
Cho lml dịch chiết nước như phần định tính tanin vào ống nghiệm, thêm vài hạt tinh thể Natri cacbonat. Quan sát thấy có bọt khí nổi lên với quả, Nhàu; quả Nhàu núi.
Sơ bộ kết luận: quả Nhàu, quả Nhàu núi có chứa acid hữu cơ.
Đinh tính chất béo
Lấy 5g dược liệu cho vào bình nón có nút mài dung tích 50ml cho thêm 40ml ether dầu hoả ngâm qua đêm, lọc, nhỏ một giọt dịch chiết ether dầu hoả lên giấy lọc, hơ nóng để bay hơi hết ether dầu hoả. Quan sát, thấy có vết mờ trên giấy lọc với dịch chiết quả Nhàu và Nhàu núi.
Sơ bộ kết luận: quả Nhàu, quả Nhàu núi có chất béo.
Đinh tính Caroten
Cho vào ống nghiệm 5ml dịch chiết như phần định tính chất béo đem bốc hơi tới khô cắn thu được thêm 2 giọt H2S04 đậm đặc, không thấy xuất hiện màu xanh lá với tất cả các dược liệu làm thực nghiệm.
Sơ bộ kết luận: Trong dược liệu nghiên cứu không có Caroten.
Đinh tính Coumarin
Cho 5g bột dược liệu vào cốc có mỏ dung tích 100ml, thêm 50ml ethanol 96° đun cách thuỷ sôi trong 2 phút, lọc qua giấy lọc, lấy dịch chiết cồn để thử các phản ứng sau:
- Phản ứng mở đóng vòng lacton
Cho vào hai ống nghịêm nhỏ mỗi ống lml dịch chiết, thêm vào ống (1) 0,5ml dung dịch NaOH 10%, ống (2) để nguyên. Đun cả hai ống đến sôi, để nguội, thấy ống (1) có màu vàng đậm, ống (2) trong. Thêm vào cả hai ống mỗi ống 2ml nước cất, lắc đều, thấycả hai ống nghiệm đều trong suốt. Acid hoá ống (1) bằng vài giọt HC1 đặc thấy dung dịch trong suốt.
- Phản ứng Diazo hoá
Cho vào ống nghiệm nhỏ lml dịch chiết, thêm vào đó 2ml NaOH 10% đun sôi rồi để nguội, thêm vài giọt thuốc thử Diazo mới pha (hoà tan 0,9 g acid sunfanilic trong 9ml HC1 đậm đặc, đun nóng, thêm nước vừa đủ 100ml. Lấy 10ml dung dịch ngâm trong nước đá rồi cho thêmlOml dd dịch NaN02 4,5% cũng vừa ngâm trong nước đá. Lắc đều rồi giữ ở nhiệt độ 0°c, dung dịch pha xong dùng ngay). Dung dịch có màu đỏ gạch.
- Vi thăng hoa
Cho một ít bột dược liệu vào một nút chai bằng kim loại. Đưa lên trên ngọn lửa đèn cồn có cách lưới amiăng, để một lúc cho bay hết hơi nước. Đậy lên một phiến kính mặt trên có để một ít bông thấm nước. Để khoảng 2 phút, lấy ra, để nguội, nhỏ một giọt KI 10% lên phiến kính. Quan sát dưới kính hiển vi thấy các tinh thể hình kim màu nâu hoặc tím.
Kết quả: Phản ứng âm tính với tất cả các dược liệu làm thực nghiệm. Sơ bộ kết luận: Dược liệu nghiên cứu không có Coumarin.
Đinh tính flavonoid
Cho 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml ethanol 90° Đem đun sôi cách thuỷ trong vòng 3 phút, lọc nóng, đem cô cách thuỷ dịch lọc còn 10ml, dịch này để thử các phản ứng sau:
- Phản ứng Cyanidin: Cho 2ml dịch vào một ống nghiệm, thêm 2-3 hạt Mg kim loại, sau đó nhỏ từng giọt HC1 đậm đặc. Dung dịch sủi bọt, sau vài phút màu dung dịch chuyển từ vàng sang hồng. Phản ứng âm tính với các dựơc liệu thực nghiệm.
- Phản ứng với kiềm: Nhỏ một giọt dịch chiết lên mảnh giấy lọc, hơ qua ngọn đèn cồn đến khô, quan sát dưới ánh sáng thường thấy có màu vàng nhạt, sau đó hơ lên miệng lọ amoniac đặc thấy màu vàng của vết dịch chiết tăng lên rõ rệt với dịch chiết quả, thân, lá Nhàu, quả, lá Nhàu núi.
- Phản ứng với FeCl3: Cho vào ống nghiệm 5 ml dịch chiết, thêm vào đó 2-3 giọt dd FeCl3 5%, thấy xuất hiện màu xanh đen với dịch chiết quả, thân, lá Nhàu, quả, lá Nhàu núi.
Sơ bộ kết luận: Trong dược liệu nghiên cứu không có flavonoid.
Đinh tính steroid
Lấy lg bột dược liệu cho vào ống nghiệm to. Thêm 5 ml CHCI3. Đun sôi cách thuỷ 15 phút. Gạn lấy dịch vào một ống nghiệm khác.
Phản ứng Liebermann: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết, cô dịch chiết tới cắn. Cho vào cắn 0,5 ml anhydrid acetic. Lắc đều cho tan hết cắn. Đặt ống nghiệm nghiêng 45° rồi cho thêm đồng lượng acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm để dịch lỏng trong ống nghiệm chia thành 2 lớp ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng. Thấy xuất hiện 1 vòng tím đỏ ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng, lắc nhẹ ống nghiệm, lófp chất lỏng phía trên có màu xanh lá.
Phản ứng Salkopski: Cho vào ống nghiệm nhỏ 2ml cloroform, nghiêng ống nghiệm 45°, thêm từ từ lml H2S04 đặc theo thành ống nghiệm, thấy xuất hiện vòng đỏ thẫm ở bề mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng.
Dược liệu thực nghiệm đều cho kết quả âm tính với cả 2 phản ứng. Sơ bộ kết luận: trong dược liệu nghiên cứu không có steroid.