PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.2. Kết quả PCR phát hiện gen Ty-3 kháng virus xoăn vàng lá và gen chắn chậm rin
4.2.1. Kết quả PCR phát hiện gen Ty-3 kháng virus xoăn vàng lá
Việc phát hiện các mẫu giống mang gen kháng bệnh xoăn vàng lá có ý nghĩa rất quan trọng ựối với việc tạo giống cà chua kháng virus xoăn vàng lá. Trong nghiên cứu này, chúng tơi đã tiến hành kiểm tra khả năng chứa gen kháng virus xoăn vàng lá Ty-3 trong tập đồn mẫu giống cà chua bằng cặp mồi P6-25F2/R5.
Cặp mồi P6-25F2/R5, ựược thiết kế dựa trên RFLP marker FER, là cặp mồi ựặc hiệu ựể phát hiện gen Ty-3. Theo Ji và cộng sự (2007e), sản phẩm PCR với cặp
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ
59
mồi P6-25-F2/R5 là một đoạn 450 bp ở các dịng giống kháng mang gen Ty-3 bắt
nguồn từ LA2779, một đoạn 630bp ở các dịng giống kháng bắt nguồn từ LA1932, một ựoạn 660 bp ở các dòng giống kháng bắt nguồn từ LA1969 và một ựoạn 320 bp ở các dòng giống mang alen ty-3 từ S. lycopersicum. Cặp mồi này cũng cho
phép phát hiện dễ dàng các cây lai dị hợp tử mang các alen tương ứng.
Hình 4.3. Ảnh điện di sản phẩm PCR gen Ty-3 bằng cặp mồi P6-25F2/R5
Giếng 1: 100 bp DNA lađer; Giếng 2: 157; Giếng 3: 154; Giếng 4: 18; Giếng 5: 28; Giếng 6: 41; Giếng 7: 71; Giếng 8: 73; Giếng 9: 79; Giếng 10: 80; Giếng 11: 82; Giếng 12: 110; Giếng 13: 111; Giếng 14: ựối chứng âm (nước cất).
Kết quả tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi P6-25F2/R5 (hình 4.3) cho thấy chỉ có 2 mẫu giống có vạch khuếch đại với kắch thước 450 bp là 157 và 754. Tất cả các mẫu giống còn lại đều chỉ có một vạch với kắch thước 320 bp. đối chứng âm khơng có vạch khuếch đại, chứng tỏ phản ứng PCR khơng bị ảnh hưởng của thành phần và nồng độ các hố chất tham giạ Kết quả này cho thấy kắch thước các vạch băng được khuếch ựại bởi cặp mồi P6-25F2/R5 là ựúng như báo cáo của Ji và cộng sự (2007c).
Từ kết quả này có thể đưa ra nhận định rằng trong số 51 mẫu giống cà chua nghiên cứu ựã phát hiện ựược 2 mẫu giống mang gen Ty-3 là 154 và 157. Các mẫu giống cịn lại đều không phát hiện thấy gen Ty-3. So sánh kết quả phát hiện gen
kháng Ty-3 với kết quả điều tra tình hình nhiễm bệnh xoăn vàng lá trên ựồng ruộng cho thấy cả 154 và 157 ựều kháng tốt trên ựồng ruộng với chỉ số bệnh là 0.
4.2.2. Kết quả phát hiện gen chắn chậm rin
500 400 300
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ
60
Kết quả phát hiện gen chắn chậm rin bằng kỹ thuật PCR sử dụng cặp mồi C43F/R (Vrebalov và cộng sự, 2002) cho thấy chỉ có 3 mẫu giống có vạch băng
ựược khuếch ựại với kắch thước 1500 bp là 59, 76 và 111, ựối chứng âm và các giếng khác không có vạch khuếch đạị Kết quả này cho thấy kắch thước các vạch băng ựược khuếch ựại là ựúng như báo cáo của Vrebalov và cộng sự (2002).
Như vậy, nghiên cứu ựã phát hiện ựược 3 mẫu giống mang gen rin là 59, 76 và 111 bằng phản ứng PCR. Các mẫu giống này tiếp tục ựược ựánh giá kiểu hình chắn chậm của quả ựể có hướng sử dụng hợp lý ựối với từng giống.
Hình 4.4. Ảnh ựiện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi C43F/R phát hiện gen rin
Giếng 1: 250 bp DNA lađer; Giếng 2: 59; Giếng 3: 76; Giếng 4: 111; Giếng 5: 28; Giếng 6: 117; Giếng 7: 71; Giếng 8: 73; Giếng 9: 79; Giếng 10: nước cất