Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Thời gian nghiên cứu
Từ tháng 7/2018 đến tháng 9/2019.
2.2.2. Địa điểm nghiên cứu
Trung tâm Tư vấn Di truyền, Bệnh viện Đại học Y Hà Nội.
2.2.3. Cỡ mẫu và cách chọn mẫu
Để nghiên cứu tối ưu nồng độ thạch, lam kính và nồng độ các hóa chất
n=Z1−∝/2
2 1−P
∈2P
Trong đó: 1- α/2 = 0,95; ε = 0,10
P = 95% (độ chính xác của quy trình tham chiếu). n: số lần thực nghiệm cần thực hiện.
Kết quả n = 21. Để tăng độ chính xác, chúng tơi lấy cỡ mẫu gấp đơi và làm trịn thành 50.
Để xác định độ nhạy, độ đặc hiệu và so sánh tương đương giữa bộ xét
nghiệm tự pha chế và bộ xét nghiệm thương mại, chúng tơi sử dụng cơng thức tính cỡ mẫu: n=Z (1−α 2) 2 x p(1−p) (εp)2
Trong đó: Z(1-α/2): hệ số tin cậy (với độ tin cậy 95% thì Z = 1,96).
p: Theo nghiên cứu của Duran E. H (2002) thì tỉ lệ đứt gãy DNA tinh trùng cao > 30% là p = 25% [52].
ε: chọn là 0,2 Tính được n = 147.
Chúng tôi lấy cỡ mẫu nghiên cứu là 300 để tăng độ chính xác.
Cách chọn mẫu: chọn mẫu ngẫu nhiên thuận tiện.
2.2.4. Thiết kế nghiên cứu
Nghiên cứu mô tả cắt ngang.
Ghi nhận và xử lý kết quả Xét nghiệm đứt gãy DNA tinh trùng bằng kit tự pha Xét nghiệm đứt gãy DNA tinh trùng bằng
kit thương mại 300 mẫu tinh dịch
Hồn thiện quy trình pha chế xét nghiệm đứt gãy DNA tinh trùng
50 mẫu tinh dịch
Tối ưu hóa thạch agarose
Tối ưu hóa lam kính
Tối ưu hóa nồng độ dung dịch biến tính và ly giải
Xác định độ nhạy, độ đặc hiệu của bộ xét nghiệm
So sánh tương đương giữa 2 bộ kit tự pha và thương mại
Hình 2.1. Sơ đồ các bước tiến hành nghiên cứu.