CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.3. Kết quả nghiên cứu về độc tính và tác dụng sinh học
3.3.3. Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm loét dạ dày
3.3.3.1. Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm loét dạ dày của cao tồn phần
Thí nghiệm được tiến hành như mục 2.2.3.4 và thu được kết quả nghiên cứu như sau:
Bảng 3.31. Tỷ lệ chuột có lt sau thắt mơn vị
Lô nghiên cứu n Tỷ lệ chuột có lt
Lơ 1: Chứng sinh lý 10 0/10 Lô 2: Lô chứng bệnh 10 10/10 Lô 3: Ranitidin 10 9/10 Lơ 4: Mẫu cao tồn phần liều 50 mg/kg 10 10/10 Lơ 5: Mẫu cao tồn phần liều 150 mg/kg 10 9/10 Lơ 6: Mẫu cao tồn phần liều 450 mg/kg 10 10/10
p > 0,05 so với lô chứng bệnh (test khi bình phương)
Kết quả nghiên cứu ở Bảng 3.31 cho thấy:
- Lô chứng sinh lý: chuột khơng có hình ảnh lt ở dạ dày.
- Lô chứng bệnh và lơ dùng mẫu cao tồn phần liều 50 mg/kg và liều 450 mg/kg có tỷ lệ chuột bị loét dạ dày sau thắt môn vị là 100%, lơ dùng ranitidin và mẫu cao tồn phần liều 150 mg/kg tỷ lệ chuột có lt sau thắt mơn vị là 90%. Khơng có sự khác biệt về tỷ lệ chuột bị loét giữa các lô uống mẫu nghiên cứu khi so với lô chứng bệnh (p>0,05).
Bảng 3.32. Ảnh hưởng của mẫu cao toàn phần đến mức độ nặng của tổn thương loét
Lô nghiên cứu Loét nông (%) Loét sâu (%) Loét thủng (%) Lô 1: Chứng sinh lý 0 0 0 Lô 2: Lô chứng bệnh 86,36 13,84 0 Lô 3: Ranitidin 96,77 3,23 0 Lô 4: Mẫu cao tổng liều 50 mg/kg 87,50 12,50 0 Lô 5: Mẫu cao tổng liều 150 mg/kg 93,62 6,38 0 Lô 6: Mẫu cao tổng liều 450 mg/kg 90,91 9,09 0
Bảng 3.32 cho thấy tỷ lệ % loét nông, loét sâu, loét thủng ở mỗi lô thông qua
đếm số điểm loét và cho điểm các điểm lt, từ đó tính tỷ lệ phần trăm.
- Lô chứng bệnh: tỷ lệ tổn thương loét sâu (13,64%) cao nhất trong 5 lơ có tiến hành thắt mơn vị dạ dày. Tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt ở lô chứng bệnh là 86,36%.
- Lơ uống ranitidin: mức độ tổn thương lt có sự cải thiện hơn so với lô chứng bệnh với giảm tỷ lệ tổn thương loét sâu (3,23%), tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt là 96,77%.
- Lơ uống mẫu cao tồn phần ở hai mức liều (150 và 450 mg/kg) có sự cải thiện mức độ loét hơn so với lô chứng bệnh: giảm tỷ lệ tổn thương loét sâu (9,09%; 6,38%) và gia tăng tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt (90,91%; 93,62%)
- Lô uống mẫu cao tồn phần liều 50 mg/kg chưa có sự cải thiện mức độ tổn thương loét so với lô chứng bệnh.
Bảng 3.33. Ảnh hưởng của mẫu cao tồn phần đến điểm số lt trung bình, chỉ số lt
Lơ nghiên cứu n Điểm số loét trung
bình Chỉ số loét UI
Lô 2: Lô chứng bệnh 10 7,50 2,17 15,10 3,87 Lô 3: Ranitidin 10 3,20 1,93*** 7,20 3,77*** Lô 4: Mẫu cao toàn phần
liều 50 mg/kg 10 7,03 1,98* 13,24 3,67* Lô 5: Mẫu cao toàn phần
liều 150 mg/kg 10 5,00 1,89* 10,60 3,62* Lô 6: Mẫu cao toàn phần
liều 450 mg/kg 10 3,60 1,84*** 7,90 3,31***
*p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 so với lô chứng bệnh (Kiểm định ANOVA một chiều, hậu kiểm LSD )
Kết quả nghiên cứu ở Bảng 3.33 cho thấy:
- Ranitidin làm giảm điểm số loét trung bình và chỉ số lt so với lơ chứng bệnh. Sự khác biệt là có ý nghĩa thống kê (p <0,001).
- Lơ uống cao tồn phần liều 50 mg/kg/ngày không làm giảm điểm số loét và chỉ số loét có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh.
- Lơ uống cao tồn phần liều 150 mg/kg/ngày làm giảm đáng kể điểm số loét trung bình và chỉ số loét so với lô chứng bệnh với mức ý nghĩa quan sát được p< 0,05.
- Lơ uống mẫu cao tồn phần liều 450 mg/kg/ngày làm giảm điểm số loét trung bình và chỉ số loét so với lô chứng bệnh với mức ý nghĩa quan sát được p< 0,001.
Bảng 3.34. Ảnh hưởng của mẫu cao tồn phần đến thể tích dịch vị, độ acid tự do, độ acid toàn phần và pH
Lơ nghiên cứu Thể tích dịch vị (mL) Độ acid tự do (meq/l) Độ acid toàn phần (meq/l) pH Lô 2: Lô chứng bệnh 4,40 1,29 14,87 4,09 30,08 7,70 2,46 0,77 Lô 3: Ranitidin 3,17 0,77* 10,54 2,81* 26,30 7,31 3,82 0,56*** Lô 4: Mẫu cao toàn
phần liều 50 mg/kg 3,32 1,09 20,62 5,43 44,77 8,53 2,91 0,85 Lơ 5: Mẫu cao tồn
phần liều 150 mg/kg 3,78 0,63 11,03 2,60* 22,93 5,01* 3,93 1,07** Lơ 6: Mẫu cao tồn
phần liều 450 mg/kg 3,01 1,00* 13,72 3,15 28,73 4,82 3,46 0,62**
*p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 so với lô chứng bệnh (T-test Student)
Kết quả nghiên cứu ở Bảng 3.34 cho thấy:
- Ranitidin liều 50 mg/kg làm giảm có ý nghĩa thống kê thể tích dịch vị, độ acid tự do, làm tăng pH so với lô chứng bệnh (p< 0,05 và p< 0,001)
- Mẫu cao toàn phần liều 50 mg/kg/ngày không làm thay đổi đáng kể thể tích dịch vị, độ acid tự do, độ acid tồn phần, pH dịch dạ dày có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh (p > 0,05).
- Mẫu cao tồn phần với liều 150 mg/kg/ngày có tác dụng làm giảm độ acid tự do, độ acid tồn phần, đồng thời làm tăng pH so với lơ chứng bệnh (p < 0,05 và p < 0,01). Ngoài ra, với liều 150 mg/kg/ngày cao tồn phần có xu hướng làm giảm thể tích dịch vị so với lơ chứng bệnh, tuy nhiên sự khác biệt là chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05).
- Mẫu cao toàn phần liều 450 mg/kg/ngày làm giảm đáng kể thể tích dịch vị, đồng thời làm tăng pH dịch dạ dày có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh (p < 0,05; p < 0,01). Mẫu cao toàn phần 450 mg/kg chưa làm giảm độ acid tự do và độ acid tồn phần so với lơ chứng bệnh (p > 0,05).
Bảng 3.35. Hình ảnh đại thể, vi thể dạ dày chuột ở mỗi lô Lô chứng sinh lý Lô chứng sinh lý
Trên các mảnh cắt thấy niêm mạc dạ dày bao gồm vùng biểu mô không tuyến và biểu mô tuyến. Vùng biểu mô khơng tuyến có cấu trúc và hình thái trong giới hạn bình thường. Vùng biểu mơ tuyến thấy các tuyến trong mơ đệm rõ cấu trúc, có hình thái và cấu trúc trong giới hạn bình thường. Khơng thấy xâm nhập viêm. Mơ dạ dày trong giới hạn bình thường
Chuột # 03, nhuộm HEx40 Chuột # 04, nhuộm HE x 40 Chuột # 08, nhuộm Hex40
Lô chứng bệnh
Trên các mảnh cắt thấy dạ dày có những ổ loét mất lớp niêm mạc chỉ còn lại tuyến, vùng dưới niêm mạc có nhều chỗ giãn rộng, ít huyết quản.
Chuột # 12, nhuộm HE x 40 Chuột # 13, nhuộm HE x 40 Chuột # 19, nhuộm HE x 40
Lô ranitidin
Cấu trúc dạ dày bình thường, một số vùng có q sản lớp biểu mơ tuyến. Phần hạ niêm mạc bình thường, có ít tế bào viêm, nhiều huyết quản.
Lơ mẫu cao tồn phần liều 50 mg/kg
Dạ dày có ổ loét sâu gần sát cơ niêm, hạ niêm mạc có vùng lỏng lẻo, nhiều tế bào viêm, nhiều huyết quản.
Chuột #35, nhuộm HE x 40 Chuột #34, nhuộm HE x 40 Chuột #37, nhuộm HE x 40
Lơ mẫu cao tồn phần liều 150 mg/kg
Trên các mảnh cắt thấy niêm mạc dạ dày bao gồm vùng biểu mô không tuyến và biểu mô tuyến. Vùng biểu mơ khơng tuyến có cấu trúc và hình thái trong giới hạn bình thường. Vùng biểu mơ tuyến thấy các tuyến trong mơ đệm rõ cấu trúc, có hình thái và cấu trúc trong giới hạn bình thường. Mơ đệm tăng nhẹ bạch cầu đa nhân trung tính. Mơ dạ dày trong giới hạn bình thường, tăng nhẹ bạch cầu đa nhân trung tính.
Chuột #49, nhuộm HE x 40 Chuột # 50, nhuộm HE x 40 Chuột # 47, nhuộm HE x 40
Lơ mẫu cao tồn phần liều 450 mg/kg
Trên các mảnh cắt thấy niêm mạc dạ dày bao gồm vùng biểu mô không tuyến và biểu mô tuyến. Vùng biểu mô không tuyến có cấu trúc và hình thái trong giới hạn bình thường. Vùng biểu mơ tuyến thấy các tuyến trong mơ đệm rõ cấu trúc, có hình thái và cấu trúc trong giới hạn bình thường. Khơng thấy xâm nhập viêm. Mơ dạ dày trong giới hạn bình thường.
3.3.3.2. Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm loét dạ dày của các cao phân đoạn.
Các cao phân đoạn n-hexan, ethyl acetat và nước của lá Xăng xê được đánh giá tác dụng trên loét dạ dày trên mơ hình thắt mơn vị trên chuột cống trắng (Shay) thu được kết quả nghiên cứu như sau:
Bảng 3.36. Tỷ lệ chuột có lt sau thắt mơn vị
Lơ nghiên cứu n Tỷ lệ chuột có lt
Lơ 1: Chứng sinh lý 10 0/10 Lô 2: Lô chứng bệnh 10 10/10 Lô 3: Ranitidin 10 9/10 Lô 4: Mẫu cao n-hexan liều 50 mg/kg 10 10/10 Lô 5: Mẫu cao ethyl acetat liều 50 mg/kg 10 10/10 Lô 6: Mẫu cao nước liều 100 mg/kg 10 10/10
p > 0,05 so với lơ chứng bệnh (test khi bình phương)
Kết quả nghiên cứu ở Bảng 3.36 cho thấy:
- Lơ chứng sinh lý: chuột khơng có hình ảnh lt.
- Lơ chứng bệnh và các lô dùng mẫu thử cao phân đoạn n-hexan, ethyl acetat và nước có tỷ lệ chuột bị loét dạ dày sau thắt môn vị là 100%, lô dùng ranitidin tỷ lệ chuột có loét sau thắt mơn vị là 90%. Khơng có sự khác biệt về tỷ lệ chuột bị loét giữa các lô uống mẫu nghiên cứu khi so với lô chứng bệnh (p > 0,05).
Bảng 3.37. Ảnh hưởng của các mẫu cao phân đoạn đến mức độ nặng của tổn thương loét
Lô nghiên cứu Loét nông, loét bề mặt (%) Loét sâu (%) Loét thủng (%) Lô 1: Chứng sinh lý 0 0 0 Lô 2: Lô chứng bệnh 72,46 27,54 0 Lô 3: Ranitidin 93,18 6,82 0 Lô 4: Mẫu cao n-hexan 50 mg/kg 87,50 12,50 0 Lô 5: Mẫu cao ethyl acetat liều 50 mg/kg 88,68 11,32 0 Lô 6: Mẫu cao nước liều 100 mg/kg 71,19 28,81 0
Nhận xét: Kết quả Bảng 3.37 cho thấy:
Lô chứng bệnh: tỷ lệ tổn thương loét sâu là 27,54% và tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt là 72,46%.
- Lơ uống ranitidin: mức độ tổn thương lt có sự cải thiện hơn so với lô chứng bệnh với giảm tỷ lệ tổn thương loét sâu (6,82%), tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt là 93,18%.
- Các lô uống mẫu cao n-hexan 50 mg/kg, mẫu ethyl acetat 50 mg/kg cũng có sự cải thiện mức độ loét hơn so với lô chứng bệnh: giảm tỷ lệ tổn thương loét sâu (11,32%; 12,20%) và gia tăng tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt (88,68%; 87,8%).
- Lô uống mẫu cao nước 100 mg/kg chưa cải thiện mức độ tổn thương so với lô chứng bệnh.
Bảng 3.38. Ảnh hưởng của các mẫu cao phân đoạn đến điểm số loét
Lô nghiên cứu n Điểm số lt
trung bình Chỉ số lt (UI) Lơ 2: Lô chứng bệnh 10 8,80 1,93 16,70 2,91
Lô 3: Ranitidin 10 4,70 2,06** 10,00 3,93**
Lô 4: Cao n-hexan liều 50 mg/kg 10 5,90 2,13* 12,20 4,08
Lô 5: Cao ethyl acetat liều 50 mg/kg 10 4,60 1,90** 9,70 3,59**
Lô 6: Cao nước liều 100 mg/kg 10 7,60 2,22 14,50 3,69
*p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 so với lô chứng bệnh (Kiểm định Anova một chiều, hậu kiểm LSD)
Kết quả nghiên cứu ở Bảng 3.38 cho thấy: điểm số loét trung bình và chỉ số
loét là khác nhau giữa các nhóm nghiên cứu. Trong đó:
- Ranitidin 50 mg/kg và mẫu thử ethyl acetat liều 50 mg/kg làm giảm điểm số lt trung bình và chỉ số lt so với lơ chứng bệnh. Sự khác biệt là có ý nghĩa thống kê (p < 0,01).
- Mẫu cao n-hexan liều 50 mg/kg làm giảm điểm số lt trung bình có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh (p < 0,05) và có xu hướng làm giảm chỉ số loét so với lô chứng bệnh tuy nhiên sự khác biệt là chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05).
- Mẫu cao nước có xu hướng giảm điểm số lt trung bình và chỉ số loét nhưng chưa có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh (p > 0,05).
Bảng 3.39. Ảnh hưởng của các mẫu cao phân đoạn đến thể tích dịch vị, độ acid tự do, độ acid toàn phần và pH dịch vị
Lơ nghiên cứu (n = 10) Thể tích dịch vị (mL) Độ acid tự do (meq/L) Độ acid toàn phần (meq/L) pH Lô 2: Lô chứng bệnh 3,77 0,97 21,53 4,81 50,73 7,25 2,52 0,83 Lô 3: Ranitidin 1,43 0,28*** 17,33 3,20* 47,00 12,86 3,25 0,49*
Lô 4: Cao n-hexan
liều 50 mg/kg 1,34 0,40*** 20,12 5,91 41,83 11,07* 3,04 0,67
Lô 5: Cao ethyl
acetat liều 50 mg/kg 0,97 0,49*** 18,63 5,05 40,87 9,16* 3,38 0,85*
Lô 6: Cao nước liều
100 mg/kg 2,94 0,81 22,56 5,38 46,02 7,77 2,97 0,88
*p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 so với lô chứng bệnh (T-test Student)
Kết quả nghiên cứu ở Bảng 3.39 cho thấy:
- Ranitidin liều 50 mg/kg làm giảm có ý nghĩa thống kê thể tích dịch vị, độ acid tự do và làm tăng pH so với lô chứng bệnh (p < 0,001 và p < 0,05)
- Mẫu cao n-hexan liều 50 mg/kg/ngày làm giảm đáng kể thể tích dịch vị, độ acid tồn phần so với lô chứng bệnh (p < 0,001 và p < 0,05) và có xu hướng làm giảm độ acid tự do, tăng pH dịch vị so với lô chứng bệnh, tuy nhiên sự khác biệt là chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05)
- Mẫu cao ethyl acetat liều 50 mg/kg/ngày làm giảm có ý nghĩa thống kê thể tích dịch vị, độ acid tồn phần và làm tăng pH so với lô chứng bệnh (p < 0,001 và p < 0,05), đồng thời có xu hướng làm giảm độ acid tự do so với lô chứng bệnh, tuy nhiên sự khác biệt là chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05)
- Mẫu cao nước liều 100 mg/kg/ngày không làm thay đổi đáng kể thể tích dịch vị, độ acid tự do, độ acid tồn phần, pH dịch dạ dày có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh (p > 0,05).
Bảng 3.40. Hình ảnh đại thể, vi thể dạ dày chuột ở mỗi lô Lô chứng sinh lý Lô chứng sinh lý
Vùng biểu mơ có các tuyến trong mơ đệm rõ cấu trúc, có hình thái và cấu trúc trong giới hạn bình thường. Khơng thấy xâm nhập viêm. Mơ dạ dày có cấu trúc bình thường.
Chuột # 04, nhuộm HE x 40 Chuột # 03, nhuộm HE x 40 Chuột # 08, nhuộm HE x 40
Lô chứng bệnh: Trên các mảnh cắt thấy dạ dày có những ổ loét mất lớp niêm mạc chỉ cịn lại tuyến, vùng dưới niêm mạc có
nhều chỗ giãn rộng, ít huyết quản.
Chuột # 12, nhuộm HE x 40 Chuột # 13, nhuộm HE x 40 Chuột # 19, nhuộm HE x 40
Lô ranitidin: Cấu trúc dạ dày bình thường, một số vùng có q sản lớp biểu mơ tuyến. Phần hạ niêm mạc bình thường, có ít tế
bào viêm, nhiều huyết quản.
Lô mẫu cao n-hexan liều 50 mg/kg
Cấu trúc dạ dày bình thường, ít ổ viêm xơ từ dưới cơ niêm, một số vùng quá sản tuyến, hạ niêm mạc có nhiều huyết quản.
Chuột #43, nhuộm HE x 40 Chuột #44, nhuộm HE x 40 Chuột #43, nhuộm HE x 40
Lô mẫu cao ethyl acetat liều 50 mg/kg
Mơ dạ dày có cấu trúc trong giới hạn bình thường. Mơ dạ dày có ổ viêm xơ nhẹ từ dưới cơ niêm. Cấu trúc dạ dày có một số vùng quá sản tuyến.
Chuột # 55, nhuộm HE x 40 Chuột # 59, nhuộm HE x 40 Chuột # 52, nhuộm HE x 40
Lô mẫu cao nước liều 100 mg/kg: Dạ dày có ổ loét sâu, các vùng mất các lớp tuyến và niêm mạc sát cơ niêm tạo ổ loét lớn.
Lớp hạ niêm mạc có nhiều vùng lỏng lẻo, rải rác có nhiều tế bào viêm.