- ĐM đùi:
2.3.2.Phơng pháp định lợng các thông số sinh hoá
- Xét nghiệm gluco máu theo phơng pháp enzym so màu trên máy phân tích tự động Hitachi 912 giá trị bình thờng: 3,9 - 6,4 mmol/l.
- Xét nghiệm Lipid đợc tiến hành theo phơng pháp enzym so màu trên máy phân tích tự động Hitachi 912, gồm:
+ Định lợng cholesterol toàn phần; giá trị bình thờng: 3,9 - 5,2 mmol/l.
+ Định lợng triglycerid; giá trị bình thờng: 0,46 - 1,88 mmol/l. + Định lợng HDL-C; giá trị bình thờng: > 0,9 mmol/l.
+ LDL-C: giá trị bình thờng: < 3,4 mmol/l.
- Xét nghiệm MAN thực hiện trên máy Hitachi 912 theo nguyên tắc miễn dịch đo độ đục (đã nói phần tổng quát). Kết quả > 20 - 200 μg/24h đợc coi là dơng tính.
- Xét nghiệm HbA1C: theo nguyên tắc miễn dịch trên máy Hitachi 912 giá trị bình thờng: < 6,5% đo trớc và sau điều trị ĐTĐ.
- Xét nghiệm Creatinin huyết thanh theo kỹ thuật phân tích đo quang dựa vào phản ứng Jaffe.
Các xét nghiệm đặc biệt:
1. Xét nghiệm MAN : Đợc thực hiện trên máy Hitachi 912 theo nguyên lý miễn dịch do độ đục.
Nguyên lý : Kháng thể kháng Albumin trong thuốc thử phản
ứng với kháng nguyên trong bệnh phẩm tạo sản phẩm làm đục môi trờng phản ứng và đợc đo bởi phép đo quang. Mật độ quang của sản phẩm tạo thành tỷ lệ với nồng độ albumin có trong bệnh phẩm.
Tính toán : Khi có kết quả microalbumin niệu (mg/l), dựa vào
số lợng nớc tiểu thu đợc tính mức bài xuất microalbumin niệu (μg/phút) theo công thức : Y : = X x V x 100/144.
Trong đó : - Y : microalbumin niệu (μg/phút) - X : microalbumin niệu (mg/l) - V : Thể tích nớc tiểu 24 giờ
Tiêu chuẩn đánh giá :
- MAN (-) khi lợng albumin < 20 μg/phút - MAN (+) khi lợng albumin từ 20-200 μg/phút
2. Phơng pháp định lợng homocysteine.
Thực hiện trên máy Axsym của Abbott
Nguyên lý:
Miễn dịch cạnh tranh, dùng kỹ thuật huỳnh quang phân cực (fluorescence polarization immunoassay- FPIA). Toàn bộ homocystein trong
huyết thanh (bao gồm dạng tự do và dạng liên kết) đợc chuyển thành Hcy tự do dới tác dụng của dithiothreitol (DDT), sau đó chuyển thành S-adenosyl- L- Homocystein (SAH) nhờ enzyme SAH hydrolase. Kháng thể kháng SAH đơn dòng có nguồn gốc từ chuột đợc đánh dấu huỳnh quang sẽ cạnh tranh với SảHtong huyết thanh vị trí kết hợp đặc hiệu kháng nguyên - kháng thể. Nồng độ tHcy trong mẫu bệnh phẩm tỷ lệ nghịch với cờng độ ánh sáng huỳnh quang phân cực.
* Thuốc thử: Kit thuốc thử của Abbott (Mỹ) gồm 4 lọ chứa: - S-adenosyl-L-cystein đánh dấu huỳnh quang trong đệ phosphate. - S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase trong đệm phosphate.
- Kháng thể kháng SAH đơn dòng nguồn gốc từ chuột trong đệm phosphat - DTT và adenosine trong acid nitric.
* Chuẩn Hcy: Gồm 6 mức: - Chuẩn A: nồng độ 0,0 μmol/l - Chuẩn B: nồng độ 2,5 μmol/l - Chuẩn C: nồng độ 5,0 μmol/l - Chuẩn D: nồng độ 10,0 μmol/l - Chuẩn E: nồng độ 20,0 μmol/l - Chuẩn F: nồng độ 50,0 μmol/l Huyết thanh kiểm tra: Gồm 3 mức;
- Mức thấp: giá trị trung bình là 7.0 μmol/l (5,25-8,75 μmol/l) - Mức trung bình: giá trị trung bình là 12.5 μmol/l (10.0-15.0 μmol/l) - Mức cao: giá trị trung bình là: 25.0 μmol/l (20.0-30.0 μmol/l)
Tiến hành:
Cài đặt các thông số xét nghiệm, các giá trị của huyết thanh chuẩn, huyết thanh kiểm tra theo chơng trình máy Axsym.
Chuẩn máy và chạy huyết thanh kiểm tra.
Huyết thanh sau khi tan đông, trộn đều đợc đa vào máy chạy tự động. Quá trình thực hiện xét nghiệm gồm 2 bớc :
- Bớc 1 : Bệnh phẩm và thuốc thử đợc phân phốitự động vào các ngăn của Reaction vessel (RV) để chuyển đổi thành SAH. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Bớc 2 : là quá trình cạnh tranh tạo phức hợp kháng nguyên-kháng thể đặc hiệu. Cờng độ ánh sáng huỳnh quang phân ccụđợc do nhờ hệ thống quang học FPIA.