3. đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1. Phương pháp nghiên cứu
Chọn mẫu ựiều tra: Nghiên cứu ựược thực hiện tại 4 trại nuôi lợn rừng bán tự nhiên thuộc huyện Tam Dương, tỉnh Vĩnh Phúc
- điều tra tình hình chăn nuôi lợn của các trang trại theo phương pháp hồi cứu qua các năm: 2008, 2009, 2010.
- điều tra tình hình chăn nuôi lợn rừng của các trang trại theo phương pháp thu thập số liệu thông tin và trực tiếp phỏng vấn các chủ trang trại.
- Tìm hiểu tình hình nhiễm kắ sinh trùng ở ựàn lợn rừng nuôi bán tự nhiên ở một số trang trại huyện Tam Dương, tỉnh Vĩnh Phúc qua phương pháp ựiều tra dịch tễ học, mô tả theo phương pháp cắt ngang.
Lấy mẫu ựiều tra theo công thức sau:
n = (1,96)2 2(1 ) d P xP − n: Số lợn cần nghiên cứu P: Tỉ lệ ước ựoán
d: Sai số ước lượng với ựộ chắnh xác mong muốn là 95%
- Với tỉ lệ ước ựoán lợn nhiễm kắ sinh trùng là 78%. độ tin cậy 95%, ựộ chắnh xác mong muốn là 95%. Sai số ước lượng là 0,05%
- Theo công thức trên số lượng lợn cần xét nghiệm phân tìm kắ sinh trùng là 263,69 con -> làm tròn thành 270 con lợn, phân ựều cho 4 trại -> có số lượng lợn cần kiểm tra ở mỗi trại là 67-68 con. Trong ựó số lợn mổ khám tìm nội kắ sinh trùng ở mỗi trại là 10 con (mục ựắch thu thập kắ sinh trùng ựể xác ựịnh loài). Vì vậy số lượng lợn xét nghiệm phân tìm trứng, noãn nang kắ sinh trùng là 57-58 lợn trên một trại.
- Thu thập, bảo quản và ựịnh loại ngoại kắ sinh trùng dựa theo nguồn tài liệu của Trịnh Văn Thịnh (1963).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 33 - Thu thập nội kắ sinh trùng ở lợn theo phương pháp mổ khám toàn diện của viện sỹ K.I Skrjabin (1944). Kắ sinh trùng thu ựược, ựược ựịnh loại tới loài theo khóa ựịnh loài của Phan Thế Việt, Nguyễn Thị Kỳ, Nguyễn Thị Lê (1977).
- Phương pháp làm tiêu bản sán lá
+ Tiêu bản tươi: Ngâm nước lã ựể sán chết tự nhiên, rửa và ép giữa 2 phiến kắnh, ựặt trong ựĩa lồng có nút mài có cồn 700, sau chuyển sang ống nghiệm có cồn 700 và ghi nhãn.
+ Tiêu bản nhuộm (nhuộm bằng thuốc nhuộm cacmin): sán rửa sạch bằng vòi nước chảy chậm, nhuộm cacmin trong vài phút ựến 1 giờ. Sau nhuộm rửa sạch sán bằng nước lã, sau qua các giai ựoạn rút nước ở sán bằng cồn với các nồng ựộ từ thấp tới cao (500, 600, 700, 850 và 960). Sau ựó vớt sán ra thấm khô, ựặt lên phiến kắnh gắn nhựa Canada và ựề nhãn.
- Phương pháp làm tiêu bản giun tròn
+ Tiêu bản tươi: rửa sạch trong nước lã (hoặc nước sinh lý) trước khi ngâm trong cồn 700
+ Tiêu bản nhuộm: không cần nhuộm, có thể làm trong suốt bằng axit lactic 50%, cho giun lên phiến kắnh rồi nhỏ 1 giọt axit lactic 50% lên, ựậy lá kắnh lại, soi dưới kắnh hiển vi.
- Lấy mẫu phân xét nghiệm trứng kắ sinh trùng theo phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên ựơn giản.
Mỗi mẫu lấy từ 15-20g phân lợn mới bài xuất, ựựng vào túi nilon, cột chặt bằng vòng chun. Trên túi nilon ghi ký hiệu M1, M2, M3,Ầ Mẫu phân lấy xong ựem về thắ nghiệm trong ngày. Ở sổ ghi chép tương ứng với các mẫu M1, M2, M3,Ầ ghi các chỉ tiêu: Tên chủ trang trại, nhóm lợn.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 34 - Xét nghiệm phân tìm trứng ký sinh trùng theo phương pháp Fullebon tìm trứng giun tròn, sán dây, noãn nang kắ sinh trùng. Phương pháp gạn rửa sa lắng tìm trứng sán lá, ựốt sán dây. Cách tiến hành như sau:
+ Phương pháp gạn rửa sa lắng: Dùng panh lấy 1 mẫu phân khoảng 10g cho vào cốc nhựa, sau ựó cho nước sạch vào. Dùng ựũa thuỷ tinh khuấy tan trong nước, lọc qua phễu lọc sang cốc thứ hai. Tiến hành ựổ bỏ cặn trong phễu ựi, cho thêm nước sạch vào cốc ựể yên từ 5-10 phút ựể trứng bị lắng xuống ựáy cốc, làm như vậy 3 -4 lần cho ựến khi nước phắa trên trong suốt, ựổ nước ựi, giữ lại cặn cho vào hộp lồng và ựưa lên kắnh hiển vi quan sát tìm trứng sán lá bằng vật kắnh 10X.
+ Phương pháp phù nổi (Fullebon): Lấy một mẫu phân khoảng 5g cho vào cốc, cho một lượng nước muối bão hoà gấp 5 -10 lần thể tắch mẫu phân. Dùng ựũa thuỷ tinh khuấy mạnh cho phân tan hoàn toàn trong dung dịch rồi lọc qua lưới lọc sang bình thứ hai có ựáy rộng cổ hẹp. Cho thêm nước muối bão hoà ựể dung dịch chuyển lên tiết diện nhỏ nhất của bình. để yên dung dịch từ 15 Ờ 20 phút sau ựó dùng vòng vớt vớt lớp váng trên bề mặt ựưa lên phiến kắnh sạch dàn mỏng và soi lên kắnh hiển vi tìm trứng giun sán.
- định loại trứng kắ sinh trùng theo khóa ựịnh loại của Mỏnig (theo Trịnh Văn Thịnh (1963)).