Bột chitosan có khối lượng (tỷ lệ) theo bảng 2.1, được cho vào dung dịch acid acetic và khuấy trên máy khuấy từ ở nhiệt độ 40-50 oC trong vòng 3 giờ, tạo dung dịch chitosan hồ tan hồn tồn. Sau đó, tinh bột biến tính có khối lượng (tỷ lệ) theo bảng 2.1 được trộn vào dung dịch và khuấy đều trên máy khuấy từ ở nhiệt độ 90-100oC đến khi tất cả tinh bột chuyển sang dạng hồ tinh bột, tiếp tục khuấy hỗn hợp thêm 3 giờ hoặc 7 giờ
thể chỉ có thể khuấy ở tốc độ thấp). Gel được bơm vào xylanh và được bơm dung dịch chứa NaOH 0,25M và Na2SO4 0,375M hoặc trong dung dịch Ethanol 2M và NaOH 0,7M và được ngâm 8 giờ để tạo dạng viên đông tụ và tạo ổn định cho các viên kết tủa. Sau đó, các kết tủa chitosan-tinh bột sẽ được rửa với nước cất nhiều lần đến khi đạt được pH trung tính và loại bỏ hồn tồn lượng muối dư thừa. Các mẫu sau khi rửa sạch sẽ được đông lạnh ở nhiệt độ -40oC trước khi được sấy thăng hoa và thu thành phẩm cuối cùng. Các mẫu được bảo quản trong bình hút ẩm để tránh hư hại.
Với giá thể có hydroxyapatite, HA sẽ được siêu âm với 30ml dung dịch acid acetic 1% (v/v) trong vịng 30 phút, sau đó bột chitosan có khối lượng (tỷ lệ) theo bảng 2.1 sẽ được cho vào dung dịch acid acetic đã được phân tán HA và khuấy trên máy khuấy từ ở nhiệt độ 40-50oC trong vòng 3 giờ, tiếp theo giá thể sẽ được tiếp tục chế tạo theo quy trình giá thể khơng có HA.
2.2.2 Các khảo sát ảnh hưởng đến tính chất cơ lý của giá thể
2.2.2.1 Khảo sát tỷ lệ khối lượng thành phần chitosan/tinh bột
Bảng 2. 1 Bảng tỷ lệ khối lượng chitosan/tinh bột trong 30ml dung dịch và ký hiệu Chitosan (g) Tinh bột (g) Tổng khối lượng (g) Tỷ lệ CS/TB 0,90 0,600 1,5 6/4 0,825 0,675 1,5 5,5/4,5 0,75 0,750 1,5 5/5 0,675 0,825 1,5 4,5/5,5 0,60 0,900 1,5 4/6
Tỷ lệ tinh bột và chitosan được thay đổi theo bảng 2.1 và được khảo sát với dung dịch đông tụ là NaOH-Na2SO4 và NaOH-Ethanol với thời gian khuấy 6 giờ và 10 giờ để xác định được tỷ lệ và phù hợp dựa trên cơ tính, độ phân huỷ, độ trương và độ rỗng.
2.2.2.2 Khảo sát sự ảnh hưởng của dung dịch đơng tụ đến tính chất cơ lý của giá thể
Tỷ lệ tinh bột và chitosan thay đổi theo bảng 2.1 với tổng thời gian khuấy 6 giờ. Sau đó, hỗn hợp chitosan/tinh bột được nhỏ từng giọt to vào 2 dung dịch tạo đông tụ khác nhau
gồm dung dich NaOH-Na2SO4 và dung dịch NaOH- Ethanol nhằm khảo sát để tạo kết tủa. Các viên kết tủa được lưu trong dung dịch này trong vòng 8 giờ. Mục tiêu của khảo sát này là nhằm lựa chọn được dung dịch để chế tạo giá thể kết tủa tốt về cơ tính, độ trương, độ rỗng, độ phân huỷ của giá thể.