PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.2. Thí nghiệm 2: so sánh 2 phƣơng pháp nuôi cấy tế bào ống dẫn trứng
Sau khi thu nhận tế bào biểu mô ống dẫn trứng, nuôi cấy theo 2 phƣơng pháp: sử dụng lá kính (lamelle) và khơng sử dụng lá kính. Kết quả xuất hiện cấu trúc “bóng nƣớc” (vesicle - like) đƣợc trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Sự xuất hiện cấu trúc “bóng nƣớc” của 2 phƣơng pháp ni cấy
Phƣơng pháp Số đĩa có xuất hiện “bóng nƣớc” Số đĩa khơng có xuất hiện “bóng nƣớc” Tỉ lệ % đĩa có xuất hiện “bóng nƣớc” p Sử dụng lá kính 2 5 28,6 0,0021 Khơng sử dụng lá kính 0 7 0
Hình 4.1 Cấu trúc “bóng nƣớc” (mũi tên) sau 3 ngày ni cấy (x 400)
Bảng 4.1 cho thấy phƣơng pháp nuôi cấy tế bào biểu mô ống dẫn trứng sử dụng lá kính và phƣơng pháp khơng sử dụng lá kính có sự khác biệt rất ý nghĩa (p < 0,01) khi xét chỉ tiêu có hay khơng có sự xuất hiện của cấu trúc “bóng nƣớc” mà Xu và ctv (1992) đã mơ tả. Cấu trúc “bóng nƣớc” bắt đầu xuất hiện vào ngày thứ 3 ni cấy (hình 4.1) giống nhƣ kết quả mà Xu và ctv (1992) đã ghi nhận.
Nhƣ vậy, tỉ lệ đĩa nuôi cấy đạt chỉ tiêu đánh giá của phƣơng pháp có sử dụng lá kính (28,6%) cao hơn phƣơng pháp khơng sử dụng lá kính (0%). Những mảnh tế bào biểu mơ đƣợc lá kính cố định sẽ giảm dao động trong quá trình di chuyển và quan sát đĩa dƣới kính hiển vi, do đó lá kính có thể đóng vai trị nhƣ một giá đỡ tế bào. Hơn nữa, trọng lực lá kính sẽ tạo áp lực bề mặt giúp một số tế bào tiếp xúc với đĩa có khả năng bám tốt hơn.
Để chứng minh cho sự tồn tại của tế bào ống dẫn trứng chó gắn liền với sự xuất hiện cấu trúc “bóng nƣớc”, đĩa có xuất hiện cấu trúc “bóng nƣớc” đƣợc nhuộm trypan blue vào ngày thứ 14 nuôi cấy. Kết quả nhuộm cho thấy: bên cạnh những tế bào chết trong đĩa vẫn còn những tế bào có khả năng tồn tại (hình 4.2) và tỉ lệ tế bào sống trung bình là 44%.
Hình 4.2 Tế bào sống (mũi tên) và tế bào chết (trong vòng tròn) (x 200)
quản và phản ứng hoạt hóa tinh trùng 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
Trước hoạt hố Sau hoạt hoá
0 giờ 24 giờ
Thời gian bảo quản
48 giờ