Gía trị kỳ vọng:

II. Định lượng Amylase:

6. Gía trị kỳ vọng:

Người lớn dưới 65 tuổi: < 200mg/dl (< 2.3 mmol/l) Người lớn trên 65 tuổi: < 365mg/dl (<3.7 mmol/l) 7. Biện luận:

Xem xét kết hợp với nồng độộ̣ Cholesterol:

33

Cholesterol Triglycerol Cholesterol Cholesterol Triglycerides Riêng với TG:

Nồng độộ̣ mg/dL Nồng đợộ̣ mmol/L Gỉai thích

34

< 150

150 – 199 200 – 499

> 500

Các trường ảnh hưởng đến nồng độộ̣ của TG: Tăng nồng độộ̣ TG:

o Tăng nguyên phát: tăng lipid huyết gia đình

o Tăng thứ phát: ăn nhiều mỡ, xơ gan do rượu, đái tháo đường, viêm tuỵ, viêm gan,…

o Glycerid tăng kéo dài tiềm ẩn nguy cơ bệnh tim mạch và thường do lipase (thành mạch máu) o Sinh lý: thai kỳ

o Chế độộ̣ ăn: rượu và chế độộ̣ ăn nhiều chất béo

35

o Thuốc: Estrogen; tamoxifen; glucocorticoids; ức chế protease; ức chế beta không chọn lọc; propofol; isotretinoin; mộộ̣t số thuốc chống loạn thần (clozapine, olanzapine); tacrolimus; sirolimus; cyclosporine; bexarotene; all-trans retinoic acid; L-asparaginase; interferon-α

AI. Định lượng

Cholesterol: Tổng quát:

Cholesterol là steroid chính trong cơ thể, là lipid khơng tan trong máu, đồng thời đóng vai trị quan trọng trong hoạt đợộ̣ng của tế bào sợi thần kinh, trong việc sản xuất mộộ̣t số hormone

Cholesterol + protein = phức hợp lipoprotein

1. Chylomicron ở ruộộ̣t theo bạch mạch và tĩnh mạch cửa 2. Sau đó là VLDL ở gan

3. Nhờ LPL phân cắt tạo IDL 4. Tiếp theo là LDL

5. Cuối cùng cùng là HDL

36

Trong đó, gồm 2 loại:

LDL + ApoB  vận chuyển Cholesterol từ gan đến tế bào ngoại biên: Cholesterol xấu HDL + ApoA  vận chuyển Cholesterol dư từ ngoại biên về gan: Cholesterol tốt Nguồn gốc:

Nộộ̣i sinh: tự tổng hợp từ nhiều cơ quan như mô mỡ, tuyến thượng thận và chủ yếu ở gan Mộộ̣t phần vận chuyển tới tế bào ngoại biên nhờ lipoprotein như VDLD, IDL, LDL Mộộ̣t phần vận chuyển tới mật xuống ruộộ̣t

Ngoại sinh: vận chuyển từ ruộộ̣t đến gan nhờ chylomicron

37

 Gan là cơ quan duy nhất ester hoá cholesterol

Phân bố: Tự do: 25 – 40% Este hoá: 60 – 75%

Trị số bình thường < 200 mg/dl và ở VN là 185 ± 23 mg/dl  Ước tính nguy cơ mắc bệnh tim mạch

1. Nguyên tắc:

 Phương pháp enzyme so màu

Các loại enzyme chính Cholesterol oxidase, Cholesterol esterase, Peroxidase

Dung dịch màu cuối cùng: 4-(p-Benzoquinone-monoimino)-phenazone có màu đỏ Các phương trình cụ thể:

→

Cholesterolesters + H2O Cholesterol esterase Cholesterol + Axit béo  Tách Cholesterol ra khỏi Cholesterolesters

→

Cholesterol + O2Cholesterol oxidase Cholest-4-en-3-one + H2O2

38

→

2 H2O2 + 4-aminoantipirine + Phenol Peroxidase 4-(p-Benzoquinone-monoimino)-phenazone + 4 H 2. Thuốc thử: 1 2 3 4 5 6 7 8 3. Tiến hành:

Chuẩn bị 3 ống nghiệm: ống đo, ống trắng, ống chuẩn

39

Kỹ thuật

Thuốc thử R

Huyết thanh (EDTA/Heparin)

Dung dịch chuẩn

Các yếu tố khác: Bước sóng: 500nm, 546nm Nhiệt đợộ̣: 25°C hoặc 37°C

Phép đo: so với ống trắng thuốc thử (RBL).

Yêu cầu 1 ống trắng thuốc thử cho mỗi thử nghiệm. Khi mở thuốc thử ra, tránh để bị nhiễm bẩn.

Bảo quản thuốc thử đã mở: +18°C đến +22°C: 28 ngày

40

 Trộộ̣n và ủ trong 10 phút ở 25oC hoặc 5 phút ở 37oC. o độộ̣ hấp thụ của ống đo (Ađo) và ống chuẩn (Achuẩn) so với ống trắng (ARBL) ở bước sóng 500nm trong vịng 5 đến 60 phút

4. Khoảng tuyến tính:

Tuyến tính khi nồng đợộ̣ Cholesterol đạt từ 4 – 750 mg/dl

 Các mẫu có nồng đợộ̣ cao hơn phải được pha lỗng 1/2 với nước muối sinh lý (0,9%), đo lại, nhân kết quả với 3 5. Tính tốn:

Mg/dl  mmol/l. Hệ số 0.026 Mmol/l  mg/dl. Hệ số: 38.66 Với: δA(S) = A(mẫu đo) – A(thuốc thử R)

δA(chuẩn) = A(dd cholesterol) – A(thuốc thử R) Theo hệ số

546 nm 500nm

Theo ống chuẩn:

Nồng độộ̣ Cholesterol = 200 x

δA củamẫu đo δA mẫu chuẩn (mg/dl)

41

6.Gía trị tham khảo: Bìnhthường: < 220 mg/dl thường: < 220 mg/dl

Nguy cơ vừa: > 220 mg/dl hay 5,7 mmol/l Nguy cơ cao: > 260 mg/dl hay 6,7 mmol/l 7.Biện luận:

 Đánh giá nguy cơ bệnh tim mạch

< 200 mg/dl (<5,17 mmol/l)  Ở người bình thường khơng có nguy cơ xơ vữa đợộ̣ng mạch

Từ 200-240 mg/dl (5,17 -6,2 mmol/l)  Đây là giới hạn cao (nguy cơ vừa) cần chú ý đối với bệnh mạch vành 240 mg/dl (>6,2 mmol/l)  Nguy cơ cao bị bệnh độộ̣ng mạch vành.

Cholesterol máu giảm hiếm gặp, trong trường hợp cholesterol toàn phần thấp < 2,0 mmol/l là dấu hiệu của suy giảm chuyển hoá tế bào gan.

Yếu tố tăng giảm Cholesterol:

Tăng nguyên phát: tăng cholesterol huyết gia đình Tăng thứ phát: suy giáp, thận hư, đái tháo đường,…

42

Khi nồng đợộ̣ cao q 250 mg/dl thì có nguy cơ mắc bệnh mạch vành. (Khi tỉ số Cholesterol toàn phần so với HDL dưới 4 thì ít nguy cơ mắc bệnh mạch vành)

Chế độộ̣ ăn: dùng nhiều chất béo no như thịt đỏ, ác loại sữa, kem, bơ, phomai, bánh ngọt, gan và các loại nợộ̣i tạng đợộ̣ng vật, các món chiên rán như khoai tây chiên, gà rán hoặc các loại thực phẩm chế biến từ bơ ca cao,chocolate...

Thói quen hút thuốc, lười vận độộ̣ng Ảnh hưởng của thuốc

Do tuổi tác: phụ nữ sau tuổi mãn kinh sẽ tăng cao nồng đợộ̣ Cholesterol III. Định lượng LDL-C: Tổng qt Trị số bình thường: LDL-C: < 130mg/dl HDL-C: < 40mg/dl Có nồng đợộ̣ các thành phần khác nhau

LDL tỉ lệ thuận với nguy cơ mắc bệnh mạch vành và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh  Chẩn đoán nguy cơ mắc bệnh tim mạch

1. Nguyên tắc:

43

 Phương pháp enzyme so màu qua ly tâm Dung dịch gây kết tủa LDL-C: Natri citrate Phần nổi bao gồm: HDL, Chylomicron và VLDL 2. Thuốc thử:

Dung dịch đệm đơn:

Haparin 0.68 g/l tương ứng với 100IU/l

Natri Citrate 0.064 mol/l

Chất ổn định 3. Tiến hành:

Dung dịch chuẩn lần này vẫn là Cholesterol 200mg/dl Các yếu tố khác:

Bước sóng: 500 nm, 546 nm

Nhiệt đợộ̣ giữ phần kết tủa ở 20 đến 25 đợộ̣ C Có 2 bước:

Bước 1: Kết tủa:

44

o Thuốc thử kết tủa LDL: 1000 o Huyết thanh: 100

 Trộộ̣n đều và ủ trong 10 phút ở 18 độộ̣ C đến 22 độộ̣ C. Đem ly tâm trong 15 phút với tốc đợộ̣ 4000 vịng trên phút. Xác định nồng độộ̣

C của supernatant (phần nổi lên sau ly tâm) trong 1 giờ kể từ sau ly tâm Bước 2: Định lượng LDL-C:

o Thuốc thử C: 1000 μl o Supernatant: 100 μl

 Trộộ̣n đều và ủ trong 10 phút ở 25 độộ̣ C hoặc 5 phút ở 37 độộ̣ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(RBL)

4.Tính tốn: Với hệ số Factor:

Đợộ̣ dài bước sóng 546 nm

500nm Với ống chuẩn:

45

δA củamẫu đo

Nồng độộ̣ LDL-C = 200 x δA mẫu chuẩn (mg/dl)  Để tính HDL-C sau khi tìm được nồng đợộ̣ LDL-C ta dùng công thức Friedewald:

LDL-C = Tổng lượng Cholesterol – (HDL-C - TG

5 ¿ (mg/dl)

LDL-C = Tổng lượng Cholesterol – (HDL-C - TG

2.2 ¿ (mmol/l)

 Không áp dụng công thức khi TG > 4.5 mmol/l (> 400 mg/dl)

5. Gía trị tham khảo:

Bình thường: thấp hơn 150 mg/dl

Nguy cơ vừa: hơn 150 mg/dl hoặc 3.9 mmol/l Nguy cơ cao: hơn 190 mg/dl hoặc 4.9 mmol/l 6. Biện luận:

LDL-C tỉ lệ thuận với tần số chết do bệnh mạch vành và nếu có các yếu tố nguy cơ thì LDL-C cần giảm xuống dưới 130 mg/dL Đối với HDL-C thì giá trị bình thường là trên 35 mg/dL và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh mạch vành

 Lưu ý: khi đã có đủ các trị số của bệnh nhân sau đo lương nếu trị số của Cholesterol và TG bình thường nhưng ngược lại LDL- C lại cao hay HDL-C q thấp thì cần lưu ý vì đây có thể là dấu hiệu của bệnh xơ vữa độộ̣ng mạch

46

V. Định lượng HDL-C:1. Nguyên tắc: 1. Nguyên tắc:

 Phương pháp enzyme so màu qua ly tâm Dung dịch gây kết tủa HDL-C: MgCl2 2. Thuốc thử:

Dung dịch đệm đơn:

Phosphotungstic Acid 0.55 mmol/l

MgCl2 25 mmol/l

Các yếu tố khác: Bước sóng: 546 nm

Nhiệt độộ̣ giữ phần kết tủa ở 25 đến 37 đợộ̣ C Có 2 bước:

Bước 1: Kết tủa:

Thuốc thử kết tủa HDL: 1000 μl (macro), 200 μl (semi micro) Huyết thanh: 500 μl (macro), 200 μl (semi micro)

47

 Trộộ̣n đều, ủ trong 10 phút ở nhiệt đợộ̣ phịng, trọn lại và đem ly tâm trong 5 phút ở 10000g (10 phút ở 4000 g). Sau khi ly tâm tách phần nổi lên từ phần kết tủa trong 1 giờ và xác định nồng độộ̣ Cholesterol.Bước 2: Định lượng LDL-C:

Bước 2: Xác định nồng độộ̣:

Đo đối chiếu với ống trắng. Yêu cầu mộộ̣t ống trắng cho mỗi thử nghiệm Cholesterol: 1000 μl (Macro) và 500 μl (semi micro)

Supernatant: 100 μl (macro) và 50 μl (semi micro)

 Trộộ̣n đều và ủ trong 10 phút ở 25 độộ̣ C hoặc 5 phút ở 37 độộ̣ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(RBL)

δA(S) = A(sample) – A(RBL) 3. Tính tốn:

Với factor: Đợộ̣ dài bước sóng 546 nm (Macro) 546 nm (Semi Micro)

Sau khi có được kết quả của nồng đợộ̣ LDL-C sử dụng cơng thức Friedewald để tìm nồng đợộ̣ của HDL-C: LDL-C = Tổng lượng Cholesterol – (HDL-C - TG

5 ¿ (mg/dl)

48

 Không áp dụng công thức khi TG > 4.5 mmol/l (> 400 mg/dl)

4.Gía trị tham khảo:

Nữ Nam 5.Biện luận:

Đối với HDL-C thì giá trị bình thường là trên 35 mg/dL và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh mạch vành Bởi vì HDL-C là loại protein tốt giúp chở cholesterol từ ngoại vi về trung tâm Ví dụ:

Bệnh nhân có:

Cholesterol 200mg/dl TG 150mg/dl

LDL-C 180 mg/dl HDL-C 30 mg/dl

Dù cho nồng đợộ̣ Cholesterol và TG là bình thường Nhưng LDL-C > 100mg/dl

HDL-C < 40 mg/dl

49

 Có nguy cơ mắc bệnh mạch vành ở người này

50

Chương III: Định lượng protid

I. Định lượng ure: Tổng quát:

Sản phẩm thoái hoá chủ yếu của protein và acid amin Tạo thành ở gan

Định lượng nhằm chẩn đốn chức năng thận nhưng khơng đặc hiệu do cịn bị ảnh hưởng bởi các yếu tố ngoài thận  thường chỉ định kèm với định lượng creatinin

Trị số bình thường là 0.2 - 0.5 g/l trong huyết thanh và BUN = 0.09 – 0.23 g/l 1. Nguyên tắc:

Ure + 2H2O Urease 2NH3 + CO2

→

α-Ketoglutarate + NH3 + NADH2 GLDH

L-Glutamate + NAD+ + H2O

→ GLDH: Glutamate dehydrogenase 2.Thuốc thử: Dung dịch đệm: TRIS pH=8.1 50 mmol/l 51 download by : skknchat@gmail.com

α-Ketoglutarate 15 mmol/l

Urease ≥ 1000 U/l

GLDH ≥ 5.4 kU/l

Khởi độộ̣ng:

NADH 0.18 mmol/l

Dung dịch chuẩn: 50mg/dL (8.35 mmol/l) 3. Chuẩn bị:

Chất nền bắt đầu: Mẫu thử và thuốc thử Mẫu đo bắt đầu:

-Trộộ̣n 4 lần thể tích R1 và 1 lần thể tích R2

-Để yên thuốc thử trong ít nhất 30 phút ở 15 đến 25 độộ̣ C trước khi dùng -Bảo quản 4 tuần ở 2 đến 8 độộ̣ C, 5 ngày ở 15 đến 25 độộ̣ C

-Không tiếp xúc với ánh sáng  Mẫu:

Huyết thanh, huyết tương khơng có heparin, nước tiểu sạch. Pha lỗng nước tiểu với tỉ lệ 1/100 với nước cất và nhân với 101

52

Bảo quản:

Huyết tương, huyết thanh:

-7 ngày ở 20 đến 25 độộ̣ C hoặc 4 đến 8 độộ̣ C -1 năm ở âm 20 độộ̣ C

Nước tiểu:

-2 ngày ở 20 đến 25 độộ̣ C -7 ngày ở 4 đến 8 độộ̣ C -1 tháng ở -20 đợộ̣ C

4. Gía trị tham khảo và khoảng tuyến tính:

Trẻ em

Người lớn

53

Ure niệu

Đối với khoảng tuyến tính thì nồng đợộ̣ đo được cao nhất là 400mg/dl (66.7 mmol/l) ở nồng đợộ̣ cao hơn cần pha lỗng với nước muối sinh lý (0.9%) với tỉ lệ ½ và nhân kết quả với 3

5.Qúa trình thực hiện:- Bước sóng: 340 nm - Bước sóng: 340 nm - Nhiệt đợộ̣: 37 đợộ̣ C

 Trợộ̣n R1 (5 lần thể tích) với R2 (1 lần thể tích)

Bảo quản ổn định ở nhiệt đợộ̣ từ 2 đến 8 độộ̣ C trong 20 ngày và từ 18 đến 22 độộ̣ C trong 8 ngày

Thuốc thử Mẫu chuẩn Huyết thanh

 Trộộ̣n và ủ 60 giây ở 25 độộ̣ C hoặc 30 độộ̣ C hoặc 20 đến 40 giây ở 37 đợộ̣ C sau đó đọc đợộ̣ hấp thu ánh sáng A1. Đọc lần nữa sau 60 giây ∆A = A1-A2 6. Tính tốn: Hệ số chuyển đổi: Mg/dl  mmol/l Hệ số: 0.167 Mmol/l  mg/dl Hệ số: 6.006 Urea  Urea-N (BUN) Hệ số: 0.467

Mg/dl BUN  mmol/l Hệ số: 0.357 Tính tốn:

Nồng độ ure = (∆Ađo/∆Achuẩn) x 50 (mg/dl)

Nồng độ BUN = 0.466 x nồng độ ure (Blood urea nitrogen)

7. Biện luận:

Trường hợp không can thiệp: Billirubin ≤ 60 mg/ dl

55

Hb ≤ 800mg/dl

Triglyceride ≤ 1750 mg/dl Các trường hợp thay đổi: Sinh lý:

o Thay đổi theo tuổi:

Urê huyết bình thường thường gặp ở người lớn là 0,2 - 0,3 g/1 (3,3 - 5 mmol/l) Ởngười trên 50 tuổi là 0,4 - 0,5 g/1 (6,7 - 8,3 mmol/l)

Ởtrẻ em là 0,1 - 0,25 g/1 (1,67 - 4,2 mmol/l)

o Tăng: người có chế đợộ̣ ăn giàu protid, người dùng thuốc corticosteroid, tetracycline o Giảm khi có thai, khi dùng thuốc chống độộ̣ng kinh, uống rượu, hút thuốc lá

Bệnh lý:

Tăng ure Nguồn gốc

huyết Ngun nhân

Ngun nhân ngồi thận

57

Giảm ure huyết

Ure niệu

Trị số bình thường là 200 - 500 mmol, tương đương 12 - 30 g/sau 4 giờ

II. Định lượng Creatinin: Tống quát:Creatinin: Tống quát:Creatinin: Tống quát:Creatinin: Tống quát: Creatinin: Tống quát:

Trị số bình thường: 0.6-1.5 mg/dl

Là sản phẩm thối hố của creatin cơ Có 2 nguồn gốc:

o Nguồn gốc ngoại sinh do thức ăn cung cấp.

o Nguồn gốc nội sinh chủ yếu từ gan, ngồi ra có thể ở thận và tụy (creatin được tổng hợp từ arginin và methionin)

Tạo thành qua các bước:

o Tại thận: arginin tác dụng với glycin tạo guanidoacetat và ornithin

o Tại gan: Guanidoacetat tác dụng với methionin ở dạng hoạt hóa S-adenosyl methionin (SAM) tạo nên creatin

o Creatin được chuyển qua máu tới cơ, tác dụng với ATP  Creatin-P: dự trữ năng lượng

o Creatin-P được khử H2O và giải phóng Phosphate tạo thành creatinin  đào thải qua thận và ra nước tiểu Để đánh giá mức lọc thận đặc hiệu hơn nồng độộ̣ ure

1. Nguyên tắc định lượng:

Trong dung dịch kiềm, creatinine hình thành phức hợp có màu với picrate (phương pháp Jaffe không khử protein) Creatinine + acid picric  phức hợp Creatinine-acid picric (vàng cam)

2.Nồng độộ̣ của các dung dịch được sử dụng:Dung dịch đệm A Dung dịch đệm A

NaOH 187.8 mmol/l

Phosphate 7.5 mmol/l

Dung dịch đệm B

Acid picric 15.7 mmol/l

59

Dung dịch chuẩn 3. Gíá trị kỳ vọng:

Sử dụng huyết thanh huyết tương

Nước tiểu (trong 24 giờ)

Đối với độộ̣ thanh thải Creatinine (thể tích huyết tương được lọc sạch hồn tồn Creatinine trong 1 đơn vị thời gian)

Người lớn

Ml/min

71 – 151 4. Thành phần mẫu thử

Huyết thanh, huyết tương

Nước tiểu được pha loãng bằng saline với tỉ lệ 1/49 5. Đợộ̣ tuyến tính:

20 mg/dl hoặc 1768 μmol/ l

Trong trường hợp vượt quá 20 mg/dl creatinine trong huyết tương hoặc nước tiểu đã pha loãng theo tỉ lệ 1/49 và tiếp tục pha loãng với tỉ lệ 1/5 với dung dịch NaCl 0.9% và đem kết quả nhân với 6

Phạm vi định lượng là 0.19 đến 20 mg/dl 6.Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl

 mmol/l. Hệ số 88.4

Mmol/l  mg/dl. Hệ số: 0.0113 7. Quy trình thử nghiệm: -Bước sóng: 492 hoặc 500nm -Nhiệt đợộ̣ 25 đợộ̣ C hoặc 37 độộ̣ C

-Pha thuốc thử 1 và 2 theo tỉ lệ 1/1 và đề yên trong 30 phút trước khi dùng -Có thể bảo quản 2 đến 8 độộ̣ C trong 28 ngày hoặc 18 đến 22 độộ̣ C trong 8 giờ

61

Thuốc thử Dung dịch chuẩn

Dung dịch đo

 Trộộ̣n đều và ủ trong 1 phút ở 25 độộ̣ C hoặc 30 giây ở 37 độộ̣ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S1) và ống đo A(STD1); đo lại sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S2) và ống đo A(STD2) sau đó 3 phút ở 25 đợộ̣ C và 1 phút với 37 độộ̣ C