Về vấn đề phân tích nước tiểu: I. Mục đích sử dụng:
Que thử nước tiểu là dạng tấm nhựa mỏng trên bề mặt có các vùng được phủ sẵn thuốc thử riêng biệt. Được dùng phát hiện định tính hoặc bán định lượng mợộ̣t hoặc vài chất cần phân tích sau trong nước tiểu: Ascorbic Acid, Glucose, Billirubin, Ketone (Acetonic Acid), trọng lượng riêng, máu, pH, protein, urobilinogen, nitrite, leukocytes. Que thử nước tiểu đucợ sử dụng cho xét nghiệm tại chỗ và các phịng thí nghiệm
II. Tổng quan:
Thành phần nước tiểu thay đổi trong suốt giai đoạn của bệnh hoặc rối loạn chức năng của cơ thể trước khi các thành phần của máu thay đổi rõ rệt. Phân tích nước tiểu là mợộ̣t quy trình hữu ích, mỗi mợộ̣t chỉ số sẽ phản ánh sức khoẻ; tình trạng bệnh và là mợộ̣t phần của kiểm tra sức khoẻ định kỳ. Que thử nước tiểu có thể dùng để đánh giá tổng quan sức khoẻ và hỗ trợ trong chẩn đốn, theo dõi q trình chuyển hố hoặc bệnh trên cơ thể gây ảnh hưởng đến chức năng thận, rối loạn nộộ̣i tiết và bệnh rối loạn đường tiết niệu. III. Thận trọng:
Chỉ dùng chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Khơng dùng que thử đã hết hạn Que thử phải được bảo quản trong lọ đóng kín cho đến khi sử dụng
Không chạm vào phần chứa thuốc thử trên que Huỷ bỏ mọi que thử bị mất màu vì có thể đã hỏng
103
Tất cả mẫu bệnh phẩm được xem là nguy cơ đọc hại và xử lý như tác nhân gây bệnh Que thử sau khi dùng được huỷ theo quy định
IV. Bảo quản và độộ̣ ổn định:
Bảo quản trong lọ đóng kín nắp ở nhiệt đợộ̣ phịng hoặc bảo quản lạnh (2-30oC). Tránh ánh sáng mặt trời. Que thử giữ ổn định trong khoảng thời gian sử dụng ghi trên nhãn. Không được lấy túi hạt chống ẩm của lọ ra ngoài. Lấy lượng que thử vừa đủ và dùng ngay, đậy chặt nắp lọ ngay sau khi lấy que thử. Tránh đóng băng. Khơng sử dụng khi hết hạn
Lưu ý: Mợộ̣t khi mở lọ, que thử cịn lại giữ ổn định đến 3 tháng. Đợộ̣ ổn định có thể giảm trong điều kiện đợộ̣ ẩm cao V. Lấy và bảo quản mẫu:
Mẫu nước tiểu phải được chứa trong dụng cụ đựng mẫu khô, sạch và phải được xét nghiệm càng nhanh càng tốt. Không được ly tâm. Khơng sử dụng nước tiểu có chất bảo quản. Nếu xét nghiệm khơng thực hiện trong vịng 1 giờ sau lấy mẫu, ngay lập tức bảo quản lạnh mẫu và để mẫu đạt nhiệt độộ̣ phogf trước xét nghiệm.
Để mẫu nước tiểu không được bảo quản lâu hơn ở nhiệt đợộ̣ phịng có thể dẫn tới sự tăng nhan của vi khuẩn và kết quả là thay đổi pH. Sự thay đổi alkaline pH có thể gây kết quả dương tính giả với xét nghiệm protein. Nước tiểu chưa GLU có thể gây giảm pH do vi sinh vật chuyển hoá glucose
Mẫu nước tiểu nhiễm bẩn với chất tẩy rửa da chứa chlohexide có thể ảnh hưởng đến kết quả protein (và ảnh hưởng thấp hơn với SG và BI)
VI. Hướng dẫn sử dụng:
Để que thử, mẫu thử và/ hoặc dung dịch khơng đạt nhiệt đợộ̣ phịng (15 – 30oC) trước khi làm xét nghiệm:
104
1. Lấy que thử ra khỏi lọ và sử dụng càng nhanh càng tốt. Đóng chặt nắp lọ ngay sau khi lấy ra mộộ̣t lượng que thử đủ theo nhu cầu. Nhúng hoàn toàn vùng phản ứng của que thử vào mẫu nước tiểu sạch, lắc đều và ngay lập tức lấy que thử ra để tránh thuốc thử bị hoà tan
2. Khi lấy que thử ra khỏi nước tiểu, trượt cạnh que thử lên miệng dụng cụ đựng nước tiểu để loại bỏ nước tiểu dư thừa. Giữ que thử nằm ngang và để cạnh que thử tiếp xúc với vật liệu thấm nước (như giấy ăn) để tránh hoá chất giữa các vùng phản ứng bị trộộ̣n lẫn hoặc làm bẩn tay
3. So sánh vùng thử với ô màu tương ứng trên nhãn lọ đựng que thử tại thời gian đọc của từng loại thuốc thử. Giữ que thử gần ô màu và so khớp màu cẩn thận
Lưu ý: kết quả có thể đọc trong vịng 2 phút sau thời gian đọc tương ứng của từng loại thuốc thử
Kết quả có thể đọc bằng máy phân tích nước tiểu VII. Diễn giải kết quả:
Kết quả thu được bằng cách so sánh trực tiếp ô màu in trên nhãn lo que thử. Ô màu đại diện cho các giá trị danh nghĩa, giá trị thực tế có thể thay đổi so với lý thuyết. Trong trường hợp kết quả khơng mong đợi hoặc có nghi vấn, thực hiện các bước sau: khẳng định
105
que thử còn hạn sử dụng, so sánh kết quả với dung dịch chứng âm và chứng dương đã biết trước nồng độộ̣ và lặp lại xét nghiệm với que thử mới. Nếu vấn đề vẫn tồn tại, ngừng sử dụng máy và liên hệ đại lý phân phối.
VIII. Kiểm soát chất lượng:
Để kết quả chính xác hơn, hiệu quả xét nghiệm của que thử phải khẳng định bằng xét nghiệm với mẫu phẩm âm tính, dương tính/ dung dịch chứng đã biết trước khi thực hiện mộộ̣t xét nghiệm mới hoặc khi sử dụng mợộ̣t lọ que thử mới. Mỗi phịng thí nghiệm phải cơng bố mục tieu riêng cho các tiêu chuẩn phù hợp
X. Hạn chế:
Que thử nước tiểu có thể bị ảnh hưởng bởi các chất làm cho nước tiểu có màu bất thường như thuốc chứa thuốc nḥộ̣m azo (ví dụ: pyridium, azo gantrisin, azo gantanol), nitrofurantoin (Microdatin, Furadantin) và riboflavin. Màu phát triển trên ơ kiểm tra có thể bị che giấu hoặc phản ứng màu gây sai kết quả.
* Cảm quan: Màu Đục Nâu 106 download by : skknchat@gmail.com
Xanh lá cây hoặc xanh dương
IX. Chi tiết các thơng số:Thuốc thử và đặc tính hiệu quả: Thuốc thử và đặc tính hiệu quả:
Thuốc thử Ascorbic acid
Glucose 30 giây (GLU) Bilirubin 30 giây Ketone 40 giây (KET) Specific Gravity 45 giây (SG) Blood 60 giây (BLO) pH 60 giây Protein 60 giây (PRO) Urobilinogen 60 giây (URO) Nitrite 60 giây
108
(NIT)
Leukocytes
120 giây
(LEU)
Dùng trong phịng thí nghiệm và các thử nghiệm lâm sàng. Thông số quan trọng với người đọc là độộ̣ nhạy, đợộ̣ đặc hiệu, đợộ̣ chính xác. Nói chung, các xét nghiệm này đực dùng để phát hiện các thông số mà không bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu
Diễn giải kết quả bằng mắt thường cũng phụ thuộộ̣c vào mộộ̣t vài yếu tố như sự thay đổi của màu sắc quan sát được, sự có hoặc khơng các yếu tố ức chế và điều kiện ánh sáng khi que thử dược đọc. Mỗi ô màu trên bảng màu tương ứng với mợộ̣t khoảng nồng đợộ̣ chất cần phân tích
Khoảng giá trị đọc của pH, protein, urobilinogen và glucose là khác nhau giữa phương pháp đọc bằng mắt và máy phân tích Đợộ̣ nhạy các thông số trên dựa trên các nghiên cứu đọc bằng mắt thường và có thể khác nhau giữa đọc bằng mắt và máy phân tích. Khi đọc bằng mắt, nếu màu của o nằm giữa khoảng âm tính và có vết thì kết quả là âm tính.
1. Acid ascorbic:
a. Tổng quan
Còn được gọi là vitamin C, loại vitamin tan trong nước, là chất dinh dưỡng thiết yếu cho người, được cung cấp qua các loại rau củ quả giàu Vit C như cam, chanh,…
Là chất quan trọng tham gia vào quá trình trao đổi chất và cần thiết cho hệ miễn dịch
Có vai trị trong việc bảo vệ tế bào, duy trì sức khoẻ của da, sụn, răng, xương và tính bền vững của mạch máu. Ngồi ra cịn là chất chống lại q trình oxi hố mạnh
Ý nghĩa
Chỉ số ASC trong xét nghiệm nước tiểu cho thấy dấu hiệu để phát hiện các tế bào, trị liệu trong viêm nhiễm thận, đường tiết niệu, sỏi đường tiết niệu...
Việc đánh giá mức đợộ̣ acid ascorbic trong nước tiểu có thể giúp làm giảm nguy cơ sai lệch kết quả trong mộộ̣t số bệnh. Acid ascorbic nồng đợộ̣ cao trong nước tiểu có thể gây âm tính giả đối với mộộ̣t số chất (glucose, nitrite và bilirubin) hoặc tế bào (hồng cầu, bạch cầu) khi xét nghiệm nước tiểu bằng que thử.
b. Nguyên lý:
Xét nghiệm này liên quan đến sự mất màu của Tillman. Sự có mặt của acid ascorbic gây ra sự thay đổi màu từ xanh dương/lá cây sang màu cam. Bệnh nhân với chế đợộ̣ ăn đầy đủ có thể bài tiết ra 2 – 10 mg/dl hằng ngày. Sau khi tiêu thụ lượng lớn axit ascorbic thì nồng đợộ̣ có thể lên đến 200 mg/dl.
c. Hạn chế: khơng có hiện tượng nhiễu được biết đến d. Biện luận
110
Chỉ số bình thường: 5-10 mg/dL hoặc 0.28-0.56 mmol/L. Nhu cầu vitamin C thay đổi theo lứa tuổi cụ thể như sau: Trẻ từ 6-11 tháng là 25-30 mg/ngày
Trẻ từ 1-6 tuổi là 30 mg/ngày, trẻ từ 7-9 là 35 mg/ngày Tuổi vị thành niên 10-18 tuổi là 65 mg/ngày
Người trưởng thành là 70 mg/ngày Phụ nữ có thai là 80 mg/ngày Phụ nữ cho con bú là 95 mg/ngày.
Mộộ̣t số bệnh lý do thiếu/ thừa Vitamin C
Bệnh thiếu máu: Vitamin C giúp hấp thu sắt do đó thiếu vitamin C cơ thể không thể hấp thu đủ sắt và gây ra tình trạng thiếu máu. Vết thương chậm lành
Bệnh lỗng xương: người thiếu vitamin C có nguy cơ cao bị gãy xương, loãng xương, đặc biệt là phụ nữ và người cao tuổi Bệnh thối hóa khớp: do vitamin C góp phần tham gia tổng hợp collagen.
Bệnh tim mạch: Thiếu vitamin C có thể dẫn tới mợộ̣t số bệnh lý về tim mạch như thoát mạch, thành mạch kém bền ,...
Bệnh Scorbut: Là mộộ̣t trong những căn bệnh điển hình khi cơ thể bị thiếu vitamin C. Các triệu chứng điển hình của bệnh Scorbut gồm có: viêm lợi, răng dễ rụng, sưng khớp, chảy máu chân răng, xuất huyết dưới da,...
Ung thư: Khi thiếu vitamin C, cơ thể sẽ dễ bị tấn công bởi các gốc tự do và về lâu dài có thể dẫn tới mợộ̣t số bệnh ung thư.
111
Thừa vitamin C cũng có thể dẫn tới nhiều tác hại. Nếu dùng vitamin C liều cao kéo dài, có thể gặp các tác dụng khơng mong muốn như rối loạn tiêu hóa, loét dạ dày, tá tràng, đau đầu, mất ngủ, viêm bàng quang, tiêu chảy, tăng tạo sỏi thận, gây bệnh gút, giảm độộ̣ bền hồng cầu, cản trở hấp thụ vitamin A, B12 và có thể gây ra hiện tượng ức chế ngược nếu ngừng độộ̣t ngộộ̣t,. Đặc biệt, phụ nữ mang thai dùng vitamin C ở liều cao trong thời gian dài có thể gây ra những nhu cầu bất thường ở thai nhi, từ đó dẫn đến bệnh scorbut sớm ở trẻ.
2. Glucose:
a. Tổng quát:
Là đơn vị cấu tạo cơ bản của carbohydrat, tḥộ̣c loại monosaccharide
Có nguồn gốc ngoại sinh từ thức ăn và nợộ̣i sinh từ q trình phân giải glycogen ở gan hoặc từ q trình tân tạo glucose thơng qua việc thoái hoá lipid và protid
Ý nghĩa của việc định lượng glucose trong nước tiểu: có vai trị quan trọng trong viêc chẩn đốn bệnh đái tháo đường
112
b. Nguyên lý và giá trị kỳ vọng:
Xét nghiệm này dựa trên phản ứng enzyme xảy ra giữa glucose oxidase, peroxidase và chất tạo màu. Glucose đầu tiên được oxi hoá tạo thành acid glucose oxidase. Hydrogen peroxidase phản ứng với chất tạo màu KI với sự hiện diện của peroxidase. Mức đợộ̣ oxi hố chất tạo màu chạy từ xanh đến nâu. Glucose thường không được phát hiện trong nước tiểu. Có mợộ̣t lượng nhỏ glucose được bài tiết bởi thận. Nồng đợộ̣ thấp hơn 100 mg/dl có thể được xem là bất thường nếu kết quả là chính xác.
c. Hạn chế:
Vùng thuốc thử không phản ứng với lactose, galactose, fructose hoặc chất chuyển hoá khác, hoặc chất làm giảm chuyển hố thuốc (ví dụ: salicylates và acid nalidixic). Đợộ̣ nhạy có thể ảnh hưởng với bệnh phẩm có tỉ trọng cao (> 1.025) và với nồng độộ̣ ASC (≥ 25
mg/dl). Nồng đợộ̣ KET ≥ 100 mg/dl có thể gây âm tính giả cho bệnh phẩm chứa lượng nhỏ GLU (50-100mg/dl) d. Biện luận:
Glucose khơng có trong nước tiểu vì chỉ có dưới 0.1% được lọc qua tiểu cầu xuất hiện qua nước tiểu (<130mg/ngày) Các yếu tố có thể gây ảnh hưởng:
Hút thuốc hoặc sử dụng các chất kích thích Ăn trong 3 giờ trước khi xét nghiệm
Do dùng các loại thuốc như cephalosporin, penicillin, nitrrofurantoin, methyldopa, tetracyclin, lithium, carbemazepin, phenolthiazin, steroid và thiazid
Dương tính giả xảy ra khi sử dụng hydrogen peroxide hoặc thuốc tẩy Âm tính giả xảy ra do nồng độộ̣ Vit C trong nước tiểu cao
113
Nguyên nhân liên quan đến sinh lý: Mang thai
Liên quan đến chế độộ̣ ăn nhiều carbohydrat Stress
Nguyên nhân liên quan đến bệnh lý: Đái tháo đường
Các bệnh lý liên quan đến thận đặc biệt là ống lượn gần
3. Bilirubin:
a. Tổng quát:
114
Là sản phẩm thối hố của q trình thối hố nhân hem của hồng cầu và được vận chuyển đến gan nhờ albumin
Là chất có sắc tố màu vàng, có 2 dạng: billirubin tự do/gián tiếp (chưa kết hợp với acid glucoronic ở gan) và billirubin liên hợp/trực tiếp (kết hợp với acid glucoronic)
Billirubin tự do độộ̣c với cơ thể, đặc biệt đối với hệ thần kinh
Ý nghĩa: giúp chẩn đoán nguyên nhân của vàng da là trước hay sau gan b. Nguyên lý và giá trị kỳ vọng:
Xét nghiệm này dựa trên phản ứng cặp azo của billirubin với diazotized dichloroaniline trong môi trường acid mạnh. Mức billỉubin thay đỏi sẽ tạo ra màu hồng nhạt và đậm nhạt tỉ lệ thuận với nồng độộ̣ Bi trong nước tiểu. Trong nước tiểu bình thường khơng thể phát hiện được Bi kể cả sử dụng phương pháp nhạy nhất. Ngay cả khi theo dõi lượng Bi cũng cần điều tra thêm. Các kết quả khơng điển hình (màu sắc khác với ơ màu âm hay dương tính trong bảng màu) có thể chỉ ra rằng sắc tố có nguồn gốc Bi trong nước tiểu và có thể giấu đi phản ứng của Bi
c. Hạn chế:
BI khơng có mặt trong nước tiểu thơng thường, vậy nên bất kỳ kết quả dương tính nào, bao gồm dương tính vết, chỉ ra mợộ̣t tình trạng bệnh lý cơ bản và cần điều tra thêm. Phản ứng có thể xảy ra với mẫu nước tiểu chứa lượng lớn Chlorpromazine hoặc rifampin có thể gây nhằm lẫn dương tính Bi. Sự có mặt của các sắc tố mật có gốc Bi có thể che giấu phản ứng Bi. Hiện tượng nyà được đặc tả bởi phản ứng màu trên ô kiểm tra không tương quan với màu trên bảng màu. Nồng đợộ̣ cao của ASC có thẻ giảm đợộ̣ nhạy.
d. Biện luận:
115
Bình thường sẽ khơng có Bi trong nước tiểu, là dấu hiệu sớm của bệnh gan và thường xuất hiện trước dấu hiệu lâm sàng của bệnh vàng da tiến triển
Giấy thử chỉ đo được lượng lớn hơn 0.4 mg/dl và là billirubin trực tiếp (do chỉ có bilỉubin liên hợp mới có thể đi xuyên qua ống thận để vào nước tiểu)
Sinh lý:
Do dùng thuốc Bệnh lý:
Vàng da tại gan và sau gan Viêm gan siêu vi
Viêm gan do ngợộ̣ đợộ̣c hố chất
Vàng da do tắc đường dẫn mật như ung thư tuỵ, sỏi mật, giun chi ống mật
Mợộ̣t lượng nhỏ Bi có thể tìm thấy trong giai đoạn đầu của bệnh gan. Ở giai đoạn cuối của bệnh, Bi liên hợp tăng cao ở huyết tương, sự bào tiết bi qua thận có ý nghĩa hơn
Các yếu tố gây ảnh hưởng:
Dương tính giả do các loại thuốc phenolthiazin
Âm tính giả do nồng đợộ̣ Vit C cao, do mẫu cũ (bi liên hợp bị thuỷ phân thành bi tự do ở nhiệt đợộ̣ phịng), rìampicin hoặc do tia tử ngoại (chuyển bi thành biliverdin)
116
4.Urobilinogen: a. Tổng quát:
Billirubin liên hợp theo mật đổ vào ruộộ̣t non, ở ruộộ̣t già dưới tác dụng của enzyme β-glucoronic của vi khuẩn, bilirubin liên hợp được thuỷ phân tạo bilirubin tự do và bilirubin này bị khử tạo hợp chất không màu là urobilinogen
Mộộ̣t phần urobilinogen (khoảng 20%) được tái hấp thụ về gan qua tĩnh mạch cửa. Tại gan sẽ oxi hoá tái tạo Bi, đổ vào mật chu trình gan-ṛộ̣t.
Mợộ̣t phần nhỏ sẽ vào tuần hoàn chung, qua thận và đào thải qua nước tiểu, được oxi hoá nhờ oxi và tạo urobilin
Phần lớn ở lại ruộộ̣t và đào thải ra ngồi qua phân, mợộ̣t phần bị oxi hố tạo hợp chất có màu, khi ra ngồi các hợp chất khơng màu sẽ tiếp tục bị oxi hố tạo sản phẩm khơng màu là stercobilin.