1. Nguyên tắc:
Phương pháp enzyme so màu qua ly tâm Dung dịch gây kết tủa HDL-C: MgCl2 2. Thuốc thử:
Dung dịch đệm đơn:
Phosphotungstic Acid 0.55 mmol/l
MgCl2 25 mmol/l
Các yếu tố khác: Bước sóng: 546 nm
Nhiệt độộ̣ giữ phần kết tủa ở 25 đến 37 độộ̣ C Có 2 bước:
Bước 1: Kết tủa:
Thuốc thử kết tủa HDL: 1000 μl (macro), 200 μl (semi micro) Huyết thanh: 500 μl (macro), 200 μl (semi micro)
47
Trộộ̣n đều, ủ trong 10 phút ở nhiệt độộ̣ phòng, trọn lại và đem ly tâm trong 5 phút ở 10000g (10 phút ở 4000 g). Sau khi ly tâm tách phần nổi lên từ phần kết tủa trong 1 giờ và xác định nồng độộ̣ Cholesterol.Bước 2: Định lượng LDL-C:
Bước 2: Xác định nồng độộ̣:
Đo đối chiếu với ống trắng. Yêu cầu mộộ̣t ống trắng cho mỗi thử nghiệm Cholesterol: 1000 μl (Macro) và 500 μl (semi micro)
Supernatant: 100 μl (macro) và 50 μl (semi micro)
Trộộ̣n đều và ủ trong 10 phút ở 25 độộ̣ C hoặc 5 phút ở 37 độộ̣ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(RBL)
δA(S) = A(sample) – A(RBL) 3. Tính toán:
Với factor: Độộ̣ dài bước sóng 546 nm (Macro) 546 nm (Semi Micro)
Sau khi có được kết quả của nồng độộ̣ LDL-C sử dụng công thức Friedewald để tìm nồng độộ̣ của HDL-C: LDL-C = Tổng lượng Cholesterol – (HDL-C - TG
5 ¿ (mg/dl)
48
Không áp dụng công thức khi TG > 4.5 mmol/l (> 400 mg/dl)
4.Gía trị tham khảo:
Nữ Nam 5.Biện luận:
Đối với HDL-C thì giá trị bình thường là trên 35 mg/dL và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh mạch vành Bởi vì HDL-C là loại protein tốt giúp chở cholesterol từ ngoại vi về trung tâm Ví dụ:
Bệnh nhân có:
Cholesterol 200mg/dl TG 150mg/dl
LDL-C 180 mg/dl HDL-C 30 mg/dl
Dù cho nồng độộ̣ Cholesterol và TG là bình thường Nhưng LDL-C > 100mg/dl
HDL-C < 40 mg/dl
49
Có nguy cơ mắc bệnh mạch vành ở người này
50