CH NG 4 KT QU VÀ THO LUN
4.5. Kt qu kho sát h ot tính kháng vi khun Aeromonas hydrophila cad ch
Ho t tính kháng vi khu n A. hydrophila c a d ch endolysin tái t h p thô đãă đ c kh o sát b ngăph ngăphápăspotătestă(đánhăgiáăkh n ngălyăgi i t bên ngoài)
vàăph ngăphápăđ m khu n l c (đánhăgiáăkh n ngă c ch sinhătr ng t bào).
K t qu kh o sát ho t tính ly gi i A. hydrophila c a d ch endolysin tái t h p thơ
K t qu (hình 4.9) cho th y nghi m th c d ch endolysin thơ khơng pha lỗng (s 1) có xu t hi n vòng ly gi i vi khu n A. hydrophila, các nghi m th c d ch endolysin thô các t l phaălỗngăkhácăđ u khơng xu t hi n vịng ly gi i. K t qu này cho th y d ch endolysin thơ có ho t tính ly gi i y u vi khu n A. hydrophila.
Hình 4.9. K t qu kh o sát ho t tính ly gi i vi khu n A. hydrophila c a d ch endolysin tái t h p thô b ngăph ngăphápăspotătest.
Chú thích hình 4.9:
( C): dch đ m (đ i ch ng);
(1): d ch endolysin tái t h p thơ khơng pha lỗng;
(1/2), (1/4), (1/8) và (1/16): d ch endolysin tái t h p thô các đ pha loãng 1/2, 1/4, 1/8 và 1/16.
K t qu ho t tính kháng vi khu n A. hydrophila c a d ch endolysin tái t h p thô
K t qu đ m khu n l c m cătrênăđ aăth ch cho th y nghi m th c s d ng endolysin, ho t tính kháng vi khu n th nghi m b tăđ u sau kho ng 5 phút vàăđãă
làm gi m 1.83± 0.17 log CFU/ml vi khu n A. hydrophila sau 60 phút . nghi m th căđ i ch ng, d ch vi khu n th nghi măđ c v i dung dchăđ m Tris-HCl (pH 8.0), m tăđ vi khu n khơng có s thayăđ iăđángăk nào, ch daoăđ ng quanh giá tr 8.0-log CFU/ml (hình 4.10).
Hình 4.10. K t qu kh o sát ho t tính kháng vi khu n Aeromonas hydrophila c a d ch endolysin tái t h p thô b ngăph ngăphápăđ m khu n l c.
Các nghiên c u v endolysin t th c khu n th cho th y endolysin có ho t tính kháng khu nănhanhăvàănguyăc ăviăkhu năđ kháng th pănênăđâyălà m t tác nhân kháng khu n m iăđ y ti măn ngăđ kháng l i các vi khu n gây b nh.ăCácăendolysinăth ng có hi u qu kháng các vi khu n Gram d ng,ăho tăđ ng c a nó kháng l i các vi khu n Gram âmăth ng b gi i h n b i l p màng ngoài c a vi khu n, l p màng ngoài này
nh ă m t hàngă ràoă ng n c n, h n ch s xâm nh p c a endolysin vào l p
peptidoglycan. Tuy nhiên, có nhi u nghiên c u cho th y r ng có các endolysin có kh
n ngălyăgi i t bào vi khu n mà không c n ph i ti n x lý màng t bào. Nghiên c u
c a Lim và c ng s (2014) cho th y endolysin SPN9CC có kh n ngăkhángăviăkhu n E. coli mà không c n ti n x lý màng t bào v i EDTA, endolysin này có vùng xuyên màng k n c có th giúpăchúngăđiăquaăđ c màng ngồi t bào vi khu n Gram âm [51]. Endolysin LysAB54 c ngăcho th y ho t tính kháng khu năđángăk đ i v i vi khu n A. baumannii đaăkhángăthu c và các vi khu n Gram âm khác, bao g m P. aeruginosa, K. pneumoniae và E. coli mà không c n x lý v i các ch t th m qua màng ngoài t bào [88]. Nhi u nghiên c uăc ngăchoăth y r ng m t s endolysin có ho t tính kháng l i nhi u vi khu n Gram âm, và m t s ít trong s chúngăđ c báo cáo là kháng c vi khu n Gram d ng, ch ng h nănh ăAbtn-4 [78], LysSAP26 [95], và LysSS [96]. Các endolysinănh ăv y v i ph m vi v t ch r ngăth ng ch a ho t
4.500 5.000 5.500 6.000 6.500 7.000 7.500 8.000 8.500 0 10 20 30 40 50 60 Log C FU /m l A . hy dr ophi la Th iăgiană(phút) Endolysin Buffer
tính lysozyme ho c glycoside hydrolase, phân c t liên k t liên k t -1,4-glycosidic gi a N-acetylmuramic acid (NAM) và N-acetylglucosamine (NAG) trong l p peptidoglycan [97].
Trong nghiên c u này, endolysin cell wall hydrolase tái t h p có ho t tính kháng v i vi khu n A. hydrophila, m t vi khu n Gram âm. Phân tích domain ch c
n ngăprotein cho th y endolysin này có domain hydrolase_2, có ho t tính phân c t
l p peptidoglycan trong thành t bào vi khu n. Ngồi ra, endolysin này cịn có vùng xo n xun màng có tính k n c có th giúp endolysin xâm nh p vào l p peptidoglycan mà không c n ti n x lý màng ngoài t bào vi khu n Gram âm A. hydrophila v i các ch t th m màng t bào.
Các k t qu kh o sát này là ti năđ cho th y d ch endolysin cell wall hydrolase tái t thơ có ho t tính ti măn ng kháng vi khu n A. hydrophila. Tuy nhiên c n th c hi n các nghiên c uăthêmăđ t iă uăquáătrìnhăbi u hi n, thu h i vàăđánhăgiáăho t tính ly gi i vi khu n c a endolysin cell wall hydrolase tái t h p.