CH NG 1 : T NG QUAN
2.3. Ph ng pháp nghiên cu
2.3.3. Thu yt minh quy trình
M c đích: m b o đ ng nh t ch t l ng enzyme t o ra s d ng cho m i thí nghi m. Th c hi n: Ch n c g ng còn nguyên v n; lành l n, không b th i h ng ho c d p nát hay b h h ng b i sinh v t h i ho c b th m n c gây m b t th ng ngoài v c ; khơng có mùi và/ho c v l ; r n ch c; không b tr y v ; đ khô đ s d ng; v , cu ng và v t c t khi thu ho ch ph i khơ hồn tồn. s ch, khơng có t p ch t l nhìn th y b ng m t th ng, G ng sau khi mua v đ c s d ng ngay ho c dùng d n trong tu n và b o qu n n i thoáng mát, tránh ánh n ng tr c ti p.
2.3.3.2. R a
M c đích: Lo i s ch đ t cát, b i b n, h n ch làm nhi m t p ch t vào dung d ch trích ly. Th c hi n: G ng khi s d ng làm thí nghi m s đ c r a s ch, đ ráo và g t v .
2.3.3.3. C t lát
M c đích: Gi m kích th c vƠ lƠm đ ng đ u kích th c nguyên li u, h tr quá trình nghi n.
Th c hi n: G ng sau khi đ ráo và g t v s đ c c t nh ra thành t ng lát nh v i kích th c đ dày x r ng x cao t ng đ ng 1 x 2 x 2 (mm).
2.3.3.2. Nghi n
M c đích: Gi m kích th c nguyên li u, t ng di n tích ti p xúc gi a dung mơi v i ngun li u, trích ly m t ph n enzyme có trong ngun li u.
Th c hi n: L y 15g g ng t i đư g t v cho vào máy xay sinh t cùng v i m t l ng dung môi bao g m đ m phosphat (pH 7,0), EDTA (pH 7,0) vƠ cystein xay đ u trong vòng 1 phút 30 giây (30 giây xay ậ ngh 30 giây).
23
M c đích: Trong q trình tách chi t có s h tr c a sóng siêu ơm giúp đ y nhanh quá trình truy n kh i d n đ n vi c gi i phóng các protein và polyphenol t thành t bào, nhu mô thông qua hi u ng xâm th c (cavitation).
Th c hi n: S d ng thi t b siêu âm d ng đ u dò. Các đi u ki n kh o sát: nhi t đ , công su t, th i gian siêu âm.
2.3.3.4. Trích ly có khu y đ o
M c đích: T o dòng l u ch t chuy n đ ng liên t c đ dung môi ti p xúc đ c v i nguyên li u.
Th c hi n: Nguyên li u sau khi đ c đ ng hóa v i kích th c nh ti p t c đ c khu y đ o v i cá t m c 5 trên thi t b khu y t .
2.3.3.5. L c thơ
M c đích: Lo i b bã g ng lƠ các x không tan.
Th c hi n: Dùng gi y l c Whatman cho vào thi t b l c chân không, ti n hành l c l y d ch trích và b bã. Dch trích sau đó đ c đ a đi lƠm l nh đ h nhi t đ xu ng 4 .
2.3.3.6. Ly tâm 1
M c đích: Tách m t ph n tinh b t và bã khơng tan cịn sót l i c a q trình l c thô.
Th c hi n: Dch trích sau khi đ c làm l nh 4 s đ c cho vào ng ly tâm (50ml) quay ly tâm 5000 vòng trong 30 phút.
2.3.3.7. K t t a protein
M c đích: B c đ u thu nh n và tinh s ch ginger rhizome proteolytic enzyme
Th c hi n: Dùng dung môi h u c ethanol các n ng đ khác nhau cho vào d ch l ng đ dung d ch 0-5oC cho quá trình k t t a di n ra. Các đi u ki n kh o sát: hƠm l ng ethanol, t l ethanol và d ch trích, th i gian k t t a.
24
M c đích: Lo i b ph n d ch l ng đ thu nh n ph n ginger rhizome proteolytic enzyme k t t a
Th c hi n: Cho d ch l ng vào ng ly tâm (50ml) quay ly tâm 3600 vòng trong 30 phút.
2.3.3.9. Th m tích
M c đích: T ng đ tinh s ch cho ch ph m ginger rhizome proteolytic enzyme, lo i b các ch t có kh i l ng phân t nh h n 10kDa nh acid amin, ch t khống, mu i, ầcó trong m u ra ngoài.
Th c hi n: S d ng màn th m tích cellophane, kích th c 35mm. Cho m u vào túi cellophane và hòa loãng v i đ m phosphat (pH 7,0), đ t túi vào trong c c n c c t vƠ đ t lên thi t b khu y t trong 24 gi nhi t đ 3 -5 .