CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.4. Bàn luận
3.4.2. Về thành phần hóa học tinh dầu, chất béo và các hợp chất phenolic
3.4.2.1. Định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ
Từ kết quả định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ bằng phương pháp thường quy có thể thấy trong quả Mùi và quả Thì là đều phát hiện sự có mặt của 7 nhóm chất: flavonoid, coumarin, saponin, đường khử, acid amin, chất béo và sterol; không phát hiện sự có mặt của 7 nhóm chất: glycosid tim, anthranoid, alcaloid, tanin, acid hữu cơ, polysaccharid và caroten.
Các nhóm chất flavonoid, coumarin và chất béo cho nhiều phản ứng dương tính và/hoặc dương tính rõ; do đó có thể kết luận những nhóm chất này có nhiều trong mẫu nghiên cứu.
Các nhóm chất saponin, đường khử, acid amin và sterol có phản ứng dương tính, tuy nhiên chỉ được tiến hành với 1 phản ứng hoặc các phản ứng dương tính chưa rõ ràng; do đó cần phải tiến hành thêm các phản ứng khác để xác định.
Kết quả định tính các hợp chất hữu cơ giúp phân tích sơ bộ các nhóm chất có mặt trong mẫu nghiên cứu và là cơ sở định hướng trong việc chiết xuất, nghiên cứu các nhóm chất có trong quả Mùi và quả Thì là.
3.4.2.2. Tinh dầu
Hàm lượng tinh dầu trong quả Mùi và Thì là nghiên cứu lần lượt là 0,80% và 2,24%. Kết quả này phù hợp với hàm lượng trong các tài liệu tham khảo đã được nêu trong phần Tổng quan. Hàm lượng tinh dầu trong quả Thì là khá cao và gấp gần 3 lần hàm lượng tinh dầu trong quả Mùi, thời gian cất kéo tinh dầu khá nhanh, tinh dầu mang mùi thơm dễ chịu và nguyên liệu để sản xuất tinh dầu (quả Thì là) có thể dễ dàng thu hoạch hoặc mua được với giá thành khơng đắt, q trình bảo quản không quá phức tạp,… Qua thử nghiệm xác định khả năng ức chế vi sinh vật, bước đầu nhận thấy tinh dầu quả Thì là có khả năng ức chế với một số chủng vi sinh vật kiểm định. Chính vì vậy, nhóm nghiên cứu hy vọng tinh dầu Thì là sẽ được nghiên cứu sâu hơn về tác dụng sinh học, là cơ sở để nâng cao giá trị sử dụng của tinh dầu này.
Kết quả phân tích thành phần cấu tử trong tinh dầu quả Mùi cho thấy trong tinh dầu quả Mùi có ít nhất 7 cấu tử. Trong đó, cấu tử δ-3-caren chiếm hàm lượng đáng kể (6,25%), đặc biệt, cấu tử linalool chiếm tới 85,88% thành phần tinh dầu, những cấu tử cịn lại chiếm hàm lượng khơng đáng kể (<1%). Hàm lượng linalool trong mẫu nghiên cứu gần tương đồng với hàm lượng linalool trong quả Mùi mô tả trong tài liệu [7].
37
Kết quả phân tích thành phần cấu tử trong tinh dầu quả Thì là cho thấy trong tinh dầu quả Thì là có ít nhất 15 cấu tử. Trong đó, có 3 cấu tử chiếm hàm lượng khá cao là limonen (17,89%), carvon (36,06%) và dillapiol (34,08%). Kết quả này có sự sai khác về tỷ lệ hàm lượng các thành phần trong tinh dầu của quả Thì là thu hái ở các quốc gia khác. Tuy nhiên, nhìn chung 2 cấu tử limonen và carvon vẫn chiếm tỷ lệ khá cao giống như trong tài liệu “Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam”, tập II [14] và tài liệu “Những tinh dầu lưu hành ở Việt Nam” [11] và cấu tử dillapiol chiếm tỷ lệ cao giống như trong tinh dầu quả Thì là Ấn Độ như tài liệu [14] mô tả.
3.4.2.3. Chất béo
Khi cùng chiết bằng dung mơi cyclohexan, khối lượng cắn chiết trong quả Thì là cao hơn, gấp gần 3 lần hàm lượng chất béo trong quả Mùi.
Sắc ký lớp mỏng cung cấp những thơng tin tương đối hạn chế về thành phần hóa học chất béo của các mẫu nghiên cứu, với cách tiến hành như trên mới chỉ phát hiện được các vết, chưa phát hiện được cụ thể thành phần chất béo. Trên thế giới đã có những nghiên cứu phân tích thành phần hóa học chất béo. Những nghiên cứu đó chỉ ra rằng, trong thành phần chất béo của quả Mùi có các acid béo và tocopherol hịa tan trong chất béo [36], trong thành phần chất béo quả Thì là có các acid béo và tocopherol, sterol hịa tan trong chất béo [21], [32]. Phương pháp phân tích thành phần hóa học chất béo như sau:
- Phân tích thành phần acid béo: Các tài liệu [21], [28] đều tiến hành phân tích thành phần hóa học các acid béo có trong chất béo. Nhìn chung, cách làm như sau: tổng hợp các methyl ester của acid béo (FAME) dựa trên phản ứng ester hóa giữa acid béo với methanol, xúc tác H2SO4 đặc [21] hoặc với tert-butyl methyl ether [28]. Các FAME được phân tích bằng sắc ký khí theo các chương trình nhiệt độ và thời gian đã cài đặt. Việc xác định các thành phần được thực hiện bằng cách so sánh thời gian lưu của chất phân tích với dữ liệu thời gian lưu của các FAME tiêu chuẩn.
- Phân tích thành phần tocopherol: các tocopherol trong chất béo được phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao, sau đó xác định các thành phần bằng cách so sánh thời gian lưu của chất cần phân tích với thời gian lưu của chất chuẩn trên cùng hệ pha động và cột sắc ký [21].
- Phân tích thành phần sterol: Các sterol được phân tích dựa theo cách làm đã được trình bày trong tiêu chuẩn ISO 12228-1:2014 về xác định các sterol riêng rẽ trong dầu mỡ động vật và thực vật [2], [21].
Tuy nhiên, do hạn chế về mặt thời gian, hóa chất và thiết bị nên tạm thời chúng tôi chưa thực hiện nội dung này.
38
3.2.4.4. Các hợp chất phenolic
Khi tiến hành chạy sắc ký lớp mỏng cắn chiết ethanol 70% sau khi loại chất béo với 5 chất chuẩn là acid gallic, acid caffeic, acid p-coumaric, quercetin và kaempferol tại bước sóng 366 nm sau khi phun TT NP/PEG, SKĐ mẫu AnG xuất hiện vết tương đồng về Rf và màu sắc với acid caffeic và acid p-coumaric; SKĐ mẫu CoS xuất hiện vết tương đồng về Rf và màu sắc với acid p-coumaric và kaempferol. Ngoài những vết phát hiện được bằng chất chuẩn thì trên sắc ký đồ mẫu CoS và AnG xuất hiện ít nhất 2 vết tương đồng ở vị trí Rf = 0,73 và Rf = 0,8. Đối chiếu với các hợp chất phenolic trong quả Mùi và quả Thì là trong các nghiên cứu đã được nêu trong phần Tổng quan, với quả Mùi đã quan sát được vết acid caffeic và acid p-coumaric, quả Thì là khơng quan sát được vết acid gallic, acid caffeic, quercetin; nguyên nhân có thể do hàm lượng thấp, nhỏ hơn giới hạn phát hiện. Trong trường hợp này, sắc ký lỏng hiệu năng cao có thể được sử dụng.
Quan sát sắc ký đồ của mẫu CoS và đặc biệt ở mẫu AnG thấy ở đoạn Rf từ 0 đến khoảng 0,3 có khá nhiều vết sát nhau, điều đó chứng tỏ trong cắn chiết ethanol 70% quả Mùi và quả Thì là cịn chứa nhiều thành phần khác, cần nghiên cứu hệ dung môi tách tốt hơn và sử dụng nhiều chất chuẩn hơn để phân tích xác định các thành phần trên.
39
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN
Qua nghiên cứu về đặc điểm hiển vi và thành phần hóa học quả Mùi và quả Thì là, chúng tơi đã đạt được các mục tiêu đề ra. Các kết quả chính đạt được là:
- Đã mơ tả chi tiết đặc điểm hiển vi quả Mùi và quả Thì là.
- Đã định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ trong 2 mẫu quả bằng phương pháp thường quy, kết quả cả quả Mùi và quả Thì là đều phát hiện 7 nhóm chất flavonoid, coumarin, saponin, đường khử, acid amin, chất béo và sterol.
- Hàm lượng tinh dầu trong quả Mùi và quả Thì là lần lượt là 0,80% và 2,24%. Thành phần tinh dầu trong các mẫu quả được định tính bằng SKLM và được phân tích bằng sắc ký khí kết nối khối phổ, từ đó xác định được thành phần và hàm lượng từng cấu tử trong các mẫu tinh dầu nghiên cứu.
- Đã xác định khối lượng cắn chiết cyclohexan và định tính thành phần hóa học chất béo bằng SKLM.
- Kết quả định tính bằng SKLM cắt chiết ethanol 70% sau khi loại chất béo với 5 chất chuẩn là acid gallic, acid caffeic, acid p-coumaric, quercetin và kaempferol cho thấy cắn chiết ethanol 70% quả Mùi có chứa acid caffeic và acid p-coumaric; cắn chiết ethanol 70% quả Thì là có chứa acid p-coumaric và kaempferol. Ngồi những vết phát hiện được bằng chất chuẩn thì trên sắc ký đồ quả Mùi và quả Thì là xuất hiện ít nhất 2 vết tương đồng về Rf và màu sắc.
KIẾN NGHỊ
- Phân tích thành phần hóa học chất béo và các thành phần hòa tan trong chất béo (tocopherol, sterol) trong quả Mùi và quả Thì là sử dụng sắc ký khí.
- Xác định thành phần và hàm lượng các hợp chất phenolic trong cắn chiết ethanol 70% sau khi loại chất béo sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao.
TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT
1. Nguyễn Tiến Bân (2003), Danh lục các loài thực vật Việt Nam, Tập 2, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr. 1094-1097.
2. Bộ Khoa học và Công nghệ (2016), Tiêu chuẩn Quốc gia: TCVN 11513-1:2016 (ISO 12228-1:2014) về xác định hàm lượng sterol tổng số và sterol riêng rẽ - Phương pháp sắc ký khí - Phần 1: Dầu mỡ động vật và thực vật.
3. Bộ môn Dược liệu (2010), Thực tập Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr. 59-78.
4. Bộ môn Dược liệu (2012), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, TP. Hồ Chí Minh, tr. 26-42.
5. Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Tập 2, NXB Y học, Hà Nội, tr. PL-279- PL-280.
6. Phạm-Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam, Quyển II, NXB Trẻ, TP. Hồ Chí Minh, tr. 477-488.
7. Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Thị Tâm (2007), Dược liệu học, Tập II, NXB Y học, Hà Nội, tr. 207-208.
8. Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr. 417-418, 422.
9. Lã Đình Mới, Lưu Đàm Cư, Trần Minh Hợi, Trần Huy Thái, Ninh Khắc Bản (2002), Tài nguyên thực vật có tinh dầu ở Việt Nam, Tập II, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr. 213-224, 362-371.
10. Phạm Xn Sinh, Phùng Hịa Bình (2014), Dược học cổ truyền, NXB Y học, Hà Nội, tr. 132-133.
11. Nguyễn Thị Tâm (2003), Những tinh dầu lưu hành trên thị trường, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, tr. 43-44, 50-51.
12. Nguyễn Viết Thân (2003), Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hiển vi,
NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, tr. 13-17.
13. Tuệ Tĩnh Thiền sư, Tuyển tập 3033 cây thuốc Đông y, tr. 709, 1067-1068.
14. Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, Tập II, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, tr. 595-598, 584-856.
TIẾNG ANH
15. Aissaoui A. et al (2008), "Acute diuretic effect of continous intravenous infusion of an aqueous extract of Coriandrum sativum L. in anesthetized rats", Journal of
16. Barros L. et al (2012), "Phenolic profiles of in vivo and in vitro grown Coriandrum
sativum L.", Food Chemistry, 132(2), pp. 841-848.
17. Bota S.R. et al (2021), "Phenolic constituents of Anethum graveolens seed extracts: Chemical profile and antioxidant effect studies", Journal of Pharmaceutical Research International, 33(54B), pp. 168-179.
18. Cansel C. et al (2019), "Antifungal effect on Candida albicans of laurel, coconut and coriander seed oil", Open Access Journal of Pharmaceutical Research, 3(3), p. 179.
19. Chen Y. et al (2013), "Antifungal mechanism of essential oil from Anethum graveolens seeds against Candida albicans", Journal of Medical Microbiology,
62(8), pp. 1175-1183.
20. Christova-Bagdassarian V.L., Bagdassarian K.S., Atanassova M.S. (2013), "Phenolic proflie: antioxidant and antibacterial activities from the Apiaceae family (dry seeds)", Mintage Journal of Pharmaceutical & Medical Sciences, 2(4), pp.
26-31.
21. Dimov M. et al (2020), "Comparative chemical composition of dill fruits of different origins", Bulgarian Journal of Agricultural Science, 26(3), pp. 696-700. 22. Hosseinzadeh H., Karimi G., Ameri M. (2002), "Effects of Anethum graveolens L.
seed extracts on experimental gastric irritation models in mice", BMC Pharmacology, 2(1), pp. 1-5.
23. Kaur N., Chahal K.K., Singh R. (2018), "Phytochemical screening and antioxidant activity of Anethum graveolens L. seed extracts", The Pharma Innovation Journal, 7(6), pp. 324-329.
24. Khalil N. et al (2018), "Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oils of selected Apiaceous fruits", Future Journal of Pharmaceutical Sciences, 4(1), pp. 88-92.
25. Merah O. et al (2020), "Biochemical composition of cumin seeds, and biorefining study", Biomolecules, 10(7), p. 1054.
26. Msaada K. et al (2017), "Antioxidant activity of methanolic extracts from three coriander (Coriandrum sativum L.) fruit varieties", Arabian Journal of Chemistry, 10, pp. S3176-S3183.
27. Nadeem M. et al (2013), "Nutritional and medicinal aspects of coriander (Coriandrum sativum L.): A review", British Food Journal, pp. 743-755.
28. Nguyen Quang Hung, et al (2015), "Oil and fatty acid accumulation during coriander (Coriandrum sativum L.) fruit ripening under organic cultivation", The
29. Pino J.A., Rosado A., Fuentes V. (1996), "Chemical composition of the seed oil of Coriandrum sativum L. from Cuba", Journal of Essential Oil Research, 8(1),
pp. 97-98.
30. Rezaei M. et al (2015), "Antimicrobial activity of the essential oil from the leaves and seeds of Coriandrum sativum toward food-borne pathogens", West Indian Medical Journal, 65(1), pp. 8-12.
31. Saini R.K., Assefa A.D., Keum Y.S. (2021), "Spices in the Apiaceae family
represent the healthiest fatty acid profile: A systematic comparison of 34 widely used spices and herbs", Foods, 10(4), p. 854.
32. Saleh-E-In M.M., Roy S.K. (2007), "Studies on fatty acid composition and proximate analyses of Anethum sowa L. (dill) seed", Bangladesh Journal of Scientific and Industrial Research, 42(4), pp. 455-464.
33. She M., Waston M.F. (2005), "Anethum Linnaeus", Flora of China, 14(64), p. 134. 34. She M., Waston M.F. (2005), "Coriandrum Linnaeus", Flora of China, 14(15), p.
30.
35. Singh K. et al (2015), "Antioxidant activity of essential oil of Coriandrum sativum and standardization of HPTLC method for the estimation of major phytomakers",
Journal of Analytical Chemistry, 70(2), pp. 220-224.
36. Sriti J. et al (2010), "Lipid, fatty acid and tocol distribution of coriander fruit’s different parts", Industrial Crops and Product, 31(2), pp. 294-300.
37. Sriti J. et al (2011), "Chemical composition and antioxidant activities of Tunisian and Canadian coriander (Coriandrum sativum L.) fruit", Journal of Essential Oil
Research, 23(4), pp. 7-15.
38. Stanojević L.P. et al (2015), "The yield, composition and hydrodistillation kinetics of the essential oil of dill seeds (Anethi fructus) obtained by different hydrodistillation techniques", Industrial Crops and Products, 65, pp. 429-436. 39. Takhtajan A. (2009), Flowering plants, Springer Science & Business Media, p.
479.
40. Zheljakov V., Zhalnov I. (1995), "Effect of herbicides on yield and quality of
Coriandrum sativum L.", Journal of Essential Oil Research, 7(6), pp. 633-639.
41. Zhu L.F. et al (1993), "Aromatic plants and essential constituents", Flavour and
Fragrance Journal, 10(5), pp. 336-337.
WEBSITE
42. "Fatty oil", HPTLC Association, 20th April 2022. <https://www.hptlc-
PHỤ LỤC DANH MỤC PHỤ LỤC
PHỤ LỤC 1: Các phản ứng định tính hóa học PHỤ LỤC 2: Hình ảnh kết quả định tính PHỤ LỤC 3: Kết quả giám định tên khoa học PHỤ LỤC 4: Tiêu bản thực vật mẫu nghiên cứu
PHỤ LỤC 5: Ảnh chụp cây Mùi và cây Thì là nghiên cứu
PHỤ LỤC 1: Các phản ứng định tính hóa học [3], [4].
Quy ước: Ống nghiệm nhỏ dung tích 5 ml, ống nghiệm lớn dung tích 20 ml.
1. Định tính flavonoid
Lấy 20 g dược liệu cho vào bình nón 250 ml, thêm 40 ml ethanol 90%. Đun cách thủy sơi 5 phút. Lọc nóng, dịch lọc thu được đem đun cách thủy ở nhiệt độ 80oC. Gạn lấy phần dịch, bỏ phần tạp tách ra dưới đáy bình, cơ cách thủy đến cắn. Hịa tan cắn trong 5 ml ethanol 70%, được dịch chiết cồn, thực hiện các phản ứng định tính sau:
– Phản ứng Cyanidin (Phản ứng Shinoda): cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dịch chiết. Thêm ít bột magnesi kim loại (khoảng 10 mg). Nhỏ từng giọt HCl đậm đặc (3 – 5 giọt). Để yên một vài phút, phản ứng dương tính nếu dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu đỏ.
– Phản ứng với kiềm:
+ Phản ứng với hơi amoniac: Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy khô, rồi hơ trên miệng lọ chứ amoniac đặc đã mở nút, đối chiếu với tờ giấy nhỏ 1 giọt dịch chiết đối chứng thấy màu vàng của vết đậm lên rõ rệt thì phản ứng dương tính.
+ Phản ứng với dung dịch NaOH 10%: Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dịch chiết, thêm