CHƢƠNG 1 : TỔNG QUAN
1.3. Một số phương pháp xác định Natamycin trong mẫu thực phẩm
1.3.2. Xác định Natamycin bằng phương pháp sắc ký ghép nối đầu dò khối phổ
phân giải cao (LC-HRMS)
Phương pháp xác định Natamycin trong thực phẩm chủ yếu dựa trên kĩ thuật xử lí mẫu chiết lỏng – lỏng và phân tích bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao. Roberts và cộng sự xây dựng phương pháp xác định nhanh hàm lượng Natamycin trong rượu vang trên hệ thống sắc ký lỏng ghép nối đầu dò khối phổ phân giải cao (LC-HRMS), với thông tin kỹ thuật như sau:
˗ Cột phân tích: C18, 150 x 2,1nm, 3,5 µm ˗ Nhiệt độ buồng cột: 30 oC
˗ Tốc độ dịng: 0,25ml/ phút ˗ Thể tích tiêm mẫu: 20µl
˗ Dung môi A: nước: axit axetic (97:3) ˗ Dung môi B: methanol: axit axetic (97:3) ˗ Thời gian chạy: 30 phút
Chương trình Gradien pha động:
Thời gian (phút) Dung môi A (%) Dung môi B (%)
2 90 10
25 10 90
27 10 90
Thời gian (phút) Dung môi A (%) Dung môi B (%)
30 90 10
Thông số khối phổ (LC-HR/MS):
˗ Sử dụng chế độ ion hóa điện tử ở chế độ ion dương, tín hiệu khối phổ được ghi nhận ở chế độ AIF (all fragmentation ions).
˗ Khối phổ: m/z/Δm/z
˗ Mục tiêu AGC: dải động cao ˗ Thời gian tiêm mẫu tối đa: 50 ms ˗ Phạm vi quét : m/z 480-670 ˗ Tốc độ quét khí : 60L/phút ˗ Tốc độ khí phụ trợ : 5L/phút ˗ Thế mao quản: 3,5kV
˗ Thời gian lưu: 16,5 phút
˗ Chuẩn Natamycin: m/z 666,31069 [M + H]+ , ion xác định m/z 503,22672 Phương pháp xử lí của Roberts chỉ lọc mẫu phân tích qua màng lọc và phân tích. Phương pháp nhanh, qui trình xử lí mẫu đơn giản nhưng kết quả phân tích chịu ảnh hưởng của nền mẫu. Sun và cộng sự dùng kĩ thuật chiết pha rắn để chiết Natamycin trong nền rượu vang. Cột trao đổi anion yếu (WAX) được sử dụng đễ làm giàu chất phân tích, loại bỏ nền mẫu, tăng giới hạn phát hiện của phương pháp. Nghiên cứu của Sun đạt giới hạn phát hiện thấp (3,34 µg/L), hiệu suất thu hồi từ 70 đến 94% với độ lệch chuẩn tương quan ≤ 4%. Từ đó, có thể thấy kĩ thuật chiết pha rắn cho q trình xử lí mẫu và kĩ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao ghé nối đầu dò khối phổ là phương pháp giúp xác định hàm lượng Natamycin trong thực phẩm một cách hiệu quả.