4.4. Đặc điểm tế bào của các dòng vi khuẩn phân lập
Đặc điểm hình thái tế bào của các dịng vi khuẩn phân lập được mô tả qua bảng:
Bảng 7: Đặc điểm tế bào của vi khuẩn phân lập đƣợc quan sát dƣới kính hiển vi, độ phóng đại 400 lần
Hình dạng tế bào Liên kết/riêng lẻ Mức độ chuyển dộng AL KN2 MT8 MT9 TT3 Cầu Cầu Que dài Que ngắn Que ngắn Liên kết Liên kết Liên kết Riêng lẻ Liên kết Chậm Nhanh Chậm, gần như bất động Nhanh Chậm
4.5. Khảo sát sơ bộ khả năng phân giải lipid của các dòng vi khuẩn phân lập
4.5.1. Kiểm tra hoạt tính lipase của các dịng vi khuẩn phân lập
Kết quả quan sát các khuẩn lạc của các dòng vi khuẩn sau khi ủ 72h ở 30 0C trên mơi trường kiểm tra hoạt tính Tween 20 cho thấy chỉ có 3 dịng: AL1, MT8 và
MT9 là có hoạt tính lipase để phân giải lipid được thể hiện qua sự xuất hiện vòng halo
kết tủa xung quanh khuẩn lạc.
TT3
MT8
AL1
KN2
28
Theo Paparaskevas và các cộng sự (1992) cho rằng môi trường Tween20 (Tw20) được sử dụng chủ yếu để khảo sát và tuyển chọn các dòng vi khuẩn phân giải được Tw20 cho thấy chúng cũng có khả năng phân giải lipid qua sự hình thành vùng kết tủa, nhờ acid béo sinh ra sau khi phân giải Tw20 tác dụng với CaCl2, xung quanh các khuẩn lạc có hoạt tính.
Hình 8: Kiểm tra hoạt tính lipase các dịng vi khuẩn trên mơi trƣờng Tween20
(Xung quanh khuẩn lạc MT8 xuất hiện vòng halo kết tủa trắng đục cho thấy dịng này có hoạt tính lipase (+) và ngược lại KN1 khơng có hoạt tính lipase (-))
4.5.2. Khảo sát khả năng phân giải lipid của các chủng vi khuẩn phân lập
Kết quả theo dõi và đo đường kính halo của các dịng vi khuẩn được thể hiện cụ thể ở phụ bảng. Nhận xét thấy, 3 dòng vi khuẩn khác nhau, ở cùng điều kiện ủ trên mơi trường Tween20, có hoạt tính lipase hay đường kính tạo vịng kết tủa halo khác nhau và kích thước đường kính càng tăng theo thời gian. Một biểu đồ đường thẳng thể hiện mối tương quan (linear relationship) giữa thời gian với đường kính nhân rộng vịng kết tủa halo, hay hoạt tính lipase của các dịng vi khuẩn phân lập, được dựng và thể hiện qua hình 8.
MT8 KN2
+
29
Hình 9: Sự tƣơng quan giữa đƣờng kính nhân rộng halo và thời gian ủ của 3 dòng vi khuẩn phân lập
(Hệ số tương quan r của cả ba đường đều gần bằng 1; đường kính nhân rộng halo = tổng đường kính halo – đường kính giếng )
Hình 10: Khảo sát halo xung quanh giếng thạch Tw20 của dòng vi khuẩn MT8 MT8
Nhận xét: Hoạt tính lipase tăng sẽ kèm theo đường kính halo xuất hiện xung quanh khuẩn lạc tăng, việc sử dụng kỹ thuật này được áp dụng để khảo sát sơ bộ khả năng phân giải lipid của vi sinh vật (M. Samad et al., 1988). Dịng MT9 có hoạt tính lipase cao và nổi trội hơn so với 2 dòng MT8 và AL1.
halo 1 Đư ờn g kí n h ( m m ) Thời gian ủ 1
30
4.5.3. Khảo sát mức độ sinh trưởng của các tế bào vi khuẩn phân lập
Kết quả đo OD các dòng vi khuẩn phân lập và bảng phân tích anova trong phần phụ lục 1. Sau khi phân tích phương sai hai nhân tố 3 lần lặp lại trên phần mềm excel 2010, kết quả có được như sau:
• Bảng ANOVA:
Cột đầu tiên là các nguồn biến động:
- Sample: Biến động do nhân tố dòng vi khuẩn tạo nên (do được xếp theo hàng). - Columns: Biến động do nhân tố thời gian tạo nên (do được xếp theo cột). - Interaction: Tác động qua lại.
- Within: Biến động ngẫu nhiên
- Total: Biến động của n giá trị quan sát. Từ kết quả này cho thấy:
o FSample = 53.34 > F0.05 = 3.4; Vậy các dòng vi khuẩn phân giải lipid
trong dầu ăn thực vật khác nhau có tốc độ tăng trưởng khác nhau.
o FColumns = 1017.39 > F0.05 = 3.01; Trong khoảng thời gian 96 giờ đồng
hồ, tốc độ sinh trưởng của vi khuẩn thay đổi.
o FInteraction = 181.91 > F0.05 = 2.5; Cả hai nhân tố dòng vi khuẩn và thời
gian đều tác động đến chỉ số đo OD660.
Qua đây, mức độ tăng trưởng của 3 dịng vi khuẩn trong mơi trường phân lập chỉ có nguồn cung cấp carbon chính là từ dầu ăn thực vật, được đánh giá theo thứ tự dựa trên tổng giá trị trung bình của các nghiệm thức: MT9 ˃ MT8 ˃ AL1 về mặt thống kê.
31
4.6. Nhận diện dịng vi khuẩn có khả năng phân giải lipid
4.6.1. Kết quả điện di sản phẩm PCR
Hình 11: Phổ điện di sản phẩm PCR đƣợc nhân lên từ đoạn gen 16S rDNA của 3 dòng vi khuẩn cần nhận diện
(Giếng (1): thang chuẩn 100bp plus, (2): dòng AL1, (3): dịng MT8, (4): dịng MT9, (5): đối chứng âm)
Hình 10 trình bày kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại trình tự gen 16S rDNA của 3 dòng vi khuẩn cần nhận diện. Qua phổ điện di cho thấy sản phẩm PCR có chiều dài khoảng 1500bp và khơng có các sản phẩm phụ.
4.6.2 Kết quả giải trình tự và nhận diện vi khuẩn
Kết quả giải trình tự của 3 dịng vi khuẩn có khả năng phân giải lipid được trình bày ở phụ lục 3. Chiều dài đoạn gen 16S rDNA được giải trình tự của các dịng vi khuẩn nhận diện được trình bày ở bảng sau:
Bảng 8: Kích thƣớc đoạn gen 16S rDNA đƣợc giải trình tự của 3 dịng vi khuẩn có khả năng phân giải lipid
Kí hiệu Chiều dài đoạn gen 16S rDNA được giải
trình tự Dịng AL1 Dòng MT8 Dòng MT9 1384 nucleotide 1418 nucleotide 1375 nucleotide 1.500 bp 1 2 3 4 4 5
32
Kết quả BLAST N của dòng AL1 trên cơ sở dữ liệu NCBI:
Dịng AL1 có trình tự 16S rDNA tương đồng 99% với trình tự của các dòng
Acinetobacter baumannii (KF055001 và JN162444)
Kết quả BLAST N của dòng MT8 trên cơ sở dữ liệu NCBI:
Dịng MT8 có trình tự 16S rDNA tương đồng 99% với trình tự của các dịng
Bacillus cereus và Bacillus thuringiensis (GU122949 và JX010983)
33
Dịng MT9 có trình tự 16S rDNA tương đồng 99% với trình tự của các dịng
Acinetobacter bereziniate (JX035952 và HE651922)
Như vậy, qua BLAST N trên cơ sở dữ liệu NCBI có thể tạm khẳng định các dịng vi khuẩn phân giải lipid phân lập được là những dòng Acinetobacter sp. và Bacillus sp..
Theo Sugimori và Utsue (2012), Acinetobacter là vi khuẩn gram âm, hiếu khí, tế bào dạng cầu (spheroid) có đường kính là 0.8 – 0.9 µm, ít di động; có khuẩn lạc màu kem. Hai dòng vi khuẩn AL1 và MT9 phân lập có đặc điểm phù hợp với những mô tả của nghiên cứu trên.
Theo Nur Hidayat (2011), Bacillus cereus N-09 là một vi khuẩn có khả năng
phân giải lipid, được phân lập ở đường ống thoát nước của các nhà hàng. Bacillus cereus có vi khuẩn dạng que, có kích thước lớn so vi vi khun khỏc, 1ì 3-4 àm, gram dương và hình thành nội bào tử (theo microbewiki.kenyon.edu). Các đặc điểm cũng như nguồn gốc phân lập được rất tương đồng với dịng MT8.
4.7. Phân tích quan hệ di truyền các dòng vi khuẩn phân lập đƣợc với các dịng vi khuẩn tƣơng đồng về trình tự 16S rDNA trên NCBI khuẩn tƣơng đồng về trình tự 16S rDNA trên NCBI
Từ cây phả hệ ở hình 11, nhận xét thấy N1 (tương ứng với dòng vi khuẩn AL1) cùng nhánh với 2 dòng Acinetobacter baumannii (KF055001 và JN162444) với độ tương đồng trình tự nucleotide là 98%. Điều này phù hợp với kết luận ban đầu qua kết quả BLAST N. Tương tự với N2 (tương ứng với dòng vi khuẩn MT8) và Bacillus cereus GU122949. Với dòng vi khuẩn N5 (tương ứng với dòng vi khuẩn MT9) cùng
34
47% và có khoảng cách xa với nhánh của 2 dịng Acinetobacter berezinieae JXD35952 và HE651922, kết quả này không tương đồng với kết quả ở BLAST N.
KF055001_Acinetobacter_baumannii_strain_IARI-JR-51 JN162444_Acinetobacter_baumannii_strain_MMG_5b N1 N5 N2 GU122949_Bacillus_cereus_strain_DBT3ST4 JX010983_Bacillus_thuringiensis_strain_B62 JX035952_Acinetobacter_bereziniae_strain_JDG127 HE651922_Acinetobacter_bereziniae_strain_ATCC_17924 100 98 100 47 46 24 0.5
Hình 12: Cây phả hệ trình bày mối quan hệ di truyền của ba dịng vi khuẩn có khả năng phân giải lipid trong dầu ăn thực vật
(Cây phả hệ được vẽ theo phương pháp Neighbour-joining dựa vào trình tự 16S rDNA, ở nút là các giá trị bootstrap trên cơ sở 1500 lần lặp lại)
35
CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
5.1. Kết luận
Chọn được ba chủng vi khuẩn khuẩn có khả năng phân giải lipid trong tổng số 5 chủng vi khuẩn được phân lập.
Dựa vào đánh giá sơ bộ khả năng phân giải lipid qua phương pháp đo đường kính vòng halo kết tủa trên mơi trường Tween20, MT9 được xem là dịng có hoạt tính lipase cao nhất so với hai dòng AL1 và MT8
AL1 và MT8 được xác định thuộc lần lượt 2 dòng Acinetobacter baumannii và
Bacillus cereus do có độ tương đồng về trình tự 16S rDNA cũng như quan hệ gần
gũi thể hiện trên cây phả hệ ở mức 99%. Kết quả xác định dịng MT9 chưa có sự thống nhất của hai phương pháp, tuy nhiên chúng ta cũng có thể xác định được sơ bộ MT9 thuộc loài Acinetobacter dựa trên các kết quả ghi nhận được.
5.2. Đề nghị
- Khảo sát về tốc độ phân giải lipid của 3 dòng phân lập trong các điều kiện mơi trường khác nhau để có kết luận chính xác hơn về khả năng phân giải lipid.
- Tối ưu hóa điều kiện sản xuất lipase của 3 dòng phân lập.
36
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
Hồ Huỳnh Thùy Dương. 2002. Sinh học phân tử (tái bản lần 2). Nxb. Giáo dục,
chương 9 và 14.
Khuất Hữu Thanh. 2003. Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen. Nxb. Khoa học và kỹ thuật Hà Nội, trang 137-139.
Nguyễn Thị Lang và Bùi Chí Bửu. 2005. Sinh học phân tử. Giới thiệu phương pháp và
ứng dụng. Nxb. Nơng nghiệp Tp.Hồ Chí Minh, trang 107-114.
Phạm Thành Hổ. 2005. Nhập môn công nghệ sinh học. Nxb. Giáo dục, chương 3. Trần Linh Phước. 2005. Phương pháp phân tích vi sinh vật, Nxb. Giáo dục Trịnh Lê Hùng. 2006. Cơ sở hóa sinh. Nxb. Giáo dục Hà Nội.
Tiếng Anh
Altschul S.F., W. Gish, W. Miller, E.W. Myers and D.J. Lipman. 1990. Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol., 215(3): 403-410.
Akiyama S. 1991. Present situation and prospect of recovered oil use. Degradation of fat and oil by “Bacillus subtilis BN 1001”. Yushi, 44:46-51.
Bednarski W., Adamczak M., Kowalewska-Piontas J. and Zadernowski R. 1994. Biotechnological methods for the up-grading and modification of animal waste fats. Acta Biotechnol, 14(4):387-393.
Bennasar A., C. Guasp and J. Lalucat. 1998. Molecular methods for the detection and identification of Pseudomonas stutzeri in pure culture and environmental
samples. Microd. Ecol, 35:22-33.
Breugelmans P. and M. Uyttebroek. 2004. Protocol for DNA extraction and purification. Laboratory of soil and water management,K.U. Leuven
Brinkman F.S.L. and D.D. Leipe. 2001. Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Second Edition: Phylogenetic Analysis. John Wiley & Sons, Inc.
37
Clarridge J.E. 2004. Impact of 16S rRNA Gene Sequence Analysis for Identificaiton of Bacteria on Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Clin. Microbiol. Rev., 17:840-862.
Coenye T. and P. Vandamme. 2003. Intragenomic heterogentic between multiple 16S ribosomal RNA operons in sequenced bacterial genomes. FEMS Microbiol.,
228(1): 45-54.
E. El-Bestawy, M. H. El-Masry and N. El-Adl. 2005. The potentiality of free Gram- negative bacteria for removing oil and grease from containing industrial effluents.World Journal of Microbiology and Biotechnology, 21:815-822.
Efron B. 1979. Bootstrapping methods: Another look at the jackknife. Ann. Stat., 7:1-
26.
Felsenstein J.1985. Confidence intervals on phyenies: An approach using the bootstrap. Evolution., 39:783-791.
Hallin S. and Lindgren P. 1999. PCR detection of genes encoding nitrite reductase in denitrifying bacteria. Appl. Environ. Microbiol., 65(4):1652-1657.
Lane D.J. 1991. 16S/23S rRNA sequencing. Nucleic acid techniques in bacterial systematics, pp. 115-175. Edited by E. Stackebrandt and M.Goodfellow. New York: Wiley.
Matsumiya Y, Wakita D, Kimura A, Sanpa S, Kubo M. 2007. Isolation and characterization of a lipid-degrading bacterium and its application to lipid- containing wastewater treatment. Journal of Bioscience and Bioengineering,
103(4):325-330.
Mohd Y. A. Samad, C. Nyonya A. Razak, Abu B. Salleh, W.M. Zin Wan Yunus, Kamaruzaman Ampon và Mahiran Basri. 1988. A plate assay for primary screening of lipase activity. Journal of Microbiological Methods, 9: 51-56
Nur Hidayat. 2011. Optimization of pH, temperature and agitation rate on biodegradation of lipids and detergents in food wastewater by Bacillus sp N-09.
Journal of Agriculture and Food Technology, 1(5): 59-62
Sanger F., S. Nicklen, A.R. Coulson. 1977. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 74(12): 5463-5470.
38
Saitou, N. và Nei, M. 1987. The neighbor-joining method: a new method for reconstruciting phylogenetic trees. Mol Biol Evol., 4:406-425
Sikorski J., R. Rossello- Mora and M. G. Lorenz. 1999. Analysis of genomic diversity and relationships among Pseudomonas stutzeri strains by PCR based genomic fingerpringting and multilocus enzyme electrophoresis, Syst. Appl. Microbiol.,
22:393-402.
Sugimori D., Nakamua M., Tusbochi N., Tusbochi K., Obata T., Uzura K. and Miyazaki K. 2002. Treatment of lipid contaminated wastewater by lipid- degrading microbial preparation. Seibutsu-kogaku, 80:559-562.
Sugimori D and Utsue T. 2012. A study of the efficiency of edible oils degraded in alkaline conditions by Pseudomonas aeruginosa SS-219 and Acinetobacter sp. SS-192 bacteria isolated from Japanese soil. World J Microbiol Biotechnol,
28:841-848.
Paparaskevas D., Christakpoulas P., Kekos D. and Macris J.B. 1992. Optimization production of extracellular lipase from Rhodotorula glutinis, Biotechnology Letters, 14:397-402.
Turner S., Pryer K.M., Miao V.P.W. and Palmer, J.D. 1999. Investigating deep phylogenetic relationships among cyanobacteria and plastids by small subunit rRNA sequence analysis. Journal of Eukaryotic Microbiology. 46:327-338
Vilma C, Saulius G and Egidijus B. 2009. Selection of fat-degrading microorganisms for the treatment of lipid-contaminated environment. Biologija, 55:84-92.
Weisburg, W.G., S.M. Barns, D.A. Pelletier and D.J. Lane. 1991. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. J.Bacteriol., 173(2): 697-703.
Trang Web
http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vsv14.htm, ngày 11/03/2009 http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Bacillus_cereus, ngày 22/04/2011
1
PHỤ LỤC
Phụ lục 1. Kết quả
Bảng 9. Kết quả đo bán kính vịng halo (cm)
24 48 72 96 AL 12 16 19 24 12 15 18 23 12 16 19 24 MT8 12 16 21 25 12 16 21 25 13 17 22 28 MT9 13 20 29 38 13 19 28 40 14 21 30 42
Bảng 10: Kết quả đo OD các dịng vi khuẩn ni trong môi trường quan sát ở bước sống 660nm 24 g 48 g 72 g 96 g AL 0.209 0.259 0.467 0.565 0.257 0.255 0.473 0.561 0.214 0.271 0.474 0.571 MT8 0.124 0.142 0.349 1.135 0.135 0.155 0.363 1.117 0.142 0.167 0.353 1.131 MT9 0.359 0.425 0.559 0.695 0.282 0.305 0.552 0.666 0.353 0.343 0.573 0.689
2
Phụ lục 2. Kết quả thống kê
Bảng kết quả phân tính phương sai hai nhân tố 3 lần lặp lại thí nghiệm đo OD
SUMMARY 24h 48h 72h 96h Total
AL
Count 3 3 3 3 12
Sum 0.68 0.785 1.414 1.697 4.576 Average 0.226667 0.261667 0.471333 0.565667 0.381333
Variance 0.000696 6.93E-05 1.43E-05 2.53E-05 0.022052
MT8
Count 3 3 3 3 12
Sum 0.401 0.464 1.065 3.383 5.313 Average 0.133667 0.154667 0.355 1.127667 0.44275 Variance 8.23E-05 0.000156 5.2E-05 8.93E-05 0.178797
MT9 Count 3 3 3 3 12 Sum 0.994 1.073 1.684 2.05 5.801 Average 0.331333 0.357667 0.561333 0.683333 0.483417 Variance 0.001834 0.003761 0.000114 0.000234 0.024257 Total Count 9 9 9 9 Sum 2.075 2.322 4.163 7.13 Average 0.230556 0.258 0.462556 0.792222 Variance 0.007988 0.008731 0.008071 0.065977
3
ANOVA
Source of
Variation SS df MS F P-value F crit
Sample 0.063387 2 0.031694 53.34373 1.47E-09 3.402826 Columns 1.813417 3 0.604472 1017.392 2.04E-25 3.008787 Interaction 0.648492 6 0.108082 181.9136 8.6E-19 2.508189 Within 0.014259 24 0.000594 Total 2.539555 35 Phụ lục 3: Kết quả giải trình tự
Kết quả giải trình tự 16S rDNA của 3 dịng vi khuẩn nhận diện Trình tự 16S rDNA của dịng AL (1384 nu):
GGCGGCAGGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGGGGAAGGTAGCTTGCTACCGGACCTAGCGGCGGACG GGTGAGTAATGCTTAGGAATCTGCCTATTAGTGGGGGACAACATCTCGAAAGGGATGCTAATACCGCA TACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGATCTTCGGACCTTGCGCTAATAGATGAGCCTAAGTCGGATTAG CTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACA CTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGGAA CCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTATGGTTGTAAAGCACTTTAAGCGAGGAGGA GGCTACTCTAGTTAATACCTAGGGATAGTGGACGTTACTCGCAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGC CAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGGC GGCTTATTAAGTCGGATGTGAAATCCCCGAGCTTAACTTGGGAATTGCATTCGATACTGGTGAGCTAG AGTATGGGAGAGGATGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCG ATGGCGAAGGCAGCCATCTGGCCTAATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCATGGGGAGCAAACAGGATT AGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGTCTACTAGCCGTTGGGGCCTTTGAGGCTTTAGTGGC GCAGCTAACGCGATAAGTAGACCGCCTGGGGGAGTACGGTCGCAAGACTAAAACTCAAATGAATTGAC GGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGGGGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCT TGACATACTAGAAACTTTCCAGAAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAATCTAGATACAGGTGCTGCATGG CTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGAAGGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTTTCCTTACT TGCCAGCATTTCGGATGGGAACTTTAAGGATACTGCCAGTGACAAACTGGGAGGAAGGCGGGGGACGA CGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACCCCCGTGCTACAATGGGCCGGTACAAAGGGTTG CTACCCAGCGATTTGATGCTAATCTCAAAAAGCCGATCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGGCAACTCGAC TCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGAATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGT
4
AACACCGCCCGTCCCACATTGAGA
Trình tự 16S rDNA của dịng MT8 (1418 nu):
TGGCGGCGTGCCTATACATGCAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTTGCTCTTATGAAGTTAGCGGCGG ACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATAC CGGATAACATTTTGAACCGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATGGACC CGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGG GTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCC GCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTG TTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACG GCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAA AGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAA ACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATAT GGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGA GCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTTAGAGGGTTTC CGCCCTTTAGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAAC TCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAA CCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGAAAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAGAGTGACA GGTTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAAC CTTTGATCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAA AAGGGGGGGGATGACGTCAAATCATCATGGCCCCTTATTGACCTGGGCCTACACACGTGCTTACAATG GGACGGTGCAAAAGGCTTGCAAAACCCCCAGGGTGGAGCTAATCTCATAAAACCGTTCTCAGTTCCGG ATTGTAGGCTGCAACTCGCCTCCATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATGCGGGATCAGCATGCCGCGGTG AAAACATTCCCCGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTACCCCCC
Trình tự 16S rDNA của dòng MT9 (1375 nu):
GCTTACCATGCAGTCGAGCGGGGGAGGTTGCTTCGGTAACTGACCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAATA CTTAGGAATCTGCCTATTAATGGGGGACAACATCTCGAAAGGGATGCTAATACCGCATACGCCCTACG GGGGAAAGCAGGGGATCACTTGTGACCTTGCGTTAATAGATGAGCCTAAGTCGGATTAGCTAGTTGGT GGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACACTGGGACTG AGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGGAACCCTGATCC AGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTATGGTTGTAAAGCACTTTAAGCGAGGAGGAGGCTCTTTT GGTTAATACCCAAGATGAGTGGACGTTACTCGCAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCG CGGTAATACAGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGGCGGCTTTTTA AGTCGGATGTGAAATCCCCGAGCTTAACTTGGGAATTGCATTCGATACTGGGAAGCTAGAGTATGGGA GAGGATGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGATGGCGAAG GCAGCCATCTGGCCTAATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCATGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCT GGTAGTCCATGCCGTAAACGATGTCTACTAGCCGTTGGGGTCTTTGAGACTTTAGTGGCGCAGCTAAC
5 GCGATAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGC ACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATAGTAA GAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTTACATACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCT CGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCTTTTCCTTACTTGCCAGCATTTCGG ATGGGAACTTTAAGGATACTGCCAGTGACAAACTGGAGGAAGGCGGGGACGACGTCAAGTCATCATGG CCCTTACGACCAGGGCTACACCCTTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCTACCTACCGATAGGAT GCTAATCTCAAAAAGCCGATCGTATTTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAATCGGAATC GCTAGGAATCGCGGATCAGAATGCCGCGGTGAATACGTTCACCGGGCTTGAACACCCGCCCTAAACAT TGGGATTGTTGCCCC