V: thể tích enzyme thí nghiệm (ml) t:
23.6.4. Khảo sát ảnh hưởng chất cảm ứng đến khả năng sinh tổng hợp chừinase ở các chủng nấm sợi nghiên cứu
23.6.2.Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ môi trường nuôi đối với đối với khả năng sinh tổng hợp chitinase ở các chủng nấm sợi nghiên cứu
Sử dụng Môi trường 4 (mục 2.1.2), nuôi cấy trong thời gian tối ưu đã khảo sát ở trên ở các nhiệt độ môi trường 20°c, 25°c, 30°c, 35°c, 40°c, 45°c.
Tiến hành thu dịch chiết enzyme, tiến hành xác định hoạt độ enzyme (theo mục 2.3.5), từ đó xác định được nhiệt độ phù hợp.
23.63. Khảo sát ảnh hưởng nằng độ chất cảm ứng (chitin) đến khả năng sinh tổng hợp chitinasecủa các chủng nấm sợi của các chủng nấm sợi
Sử dụng Môi trường 5 (mục 2.1.2), làn lượt bổ sung chitin ở các nồng độ 0,0%, 5%, 10%, 15%, 20%. Nuôi cấy ở nhiệt độ và thời gian tối ưu đã khảo sát ở mục 2.3.6.1 và 2.3.6.2.
Tiến hành thu dịch chiết enzyme, xác định hoạt độ chitinase, từ đó xác định được nồng độ chitin phù hợp.
23.6.4. Khảo sát ảnh hưởng chất cảm ứng đến khả năng sinh tổng hợp chừinase ở các chủng nấmsợi nghiên cứu sợi nghiên cứu
Sử dụng Mơi trường 4 (mục 2.1.2), trong đó sử dụng thay thế lần lượt bột chitin, bột vỏ tôm, bột vỏ cua (tương ứng lượng chitin là 10%). Nuôi cấy trong thời gian và nhiệt độ tối ưu đã khảo sát ở trên, thu dịch enzyme thô, tiến hành xác định hoạt độ enzyme (theo mục 2.3.5), từ đó xác định được chất cảm ứng phù hợp.
2.3.7 Phương pháp tối ưu điều kiện môi trường nuôi cấy nấm sợi bằng quỉ hoạch thực nghiệm [2]
Để xác định điều kiện tối ưu cho quá trình ni cấy chủng nấm sợi chọn thu chế phẩm enzyme chitinase, chúng tôi dùng thực nghiệm yếu tố tồn phần. Từ các kết quả thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng riêng lẻ từng yếu tố, chúng tôi chọn 3 yếu tố là thời gian ni cấy, nhiệt độ mơi trưịmg ni cấy và nồng độ chitin trong mơi trường ni cấy để nghiên cứu tối ưu hóa theo phương pháp qui hoạch thực nghiệm.
- Lập ma trận đầy đủ với số thí nghiệm N = 23 = 8. Vì khơng làm thí nghiệm song song nên để xác định phương sai tái hiện, chúng tơi làm 3 thí nghiệm ở tâm (mức cơ sở).
STT thí Xi x2 x3 y 1 + + + yi 2 + + - y2 3 + - + ys 4 + - - Ỵ4 5 - + + ys 6 - + - ye 7 - - + y 7 8 - - - ys 9 0 0 0 yod) 10 0 0 0 yo(2) 11 0 0 0 yo(3) - Dùng PTHQ tuyến tính dạng:
ỹ = bo + b^i + b2x2 + b3x3 + b12XiX2 + bi3XiX3 + b23x2x3 + b123XiX2x3 trong đó ỹ: hoạt độ chitinase theo phương trình hồi qui (PTHQ)
- Tính bo, bi, b2, b3... bj - các hệ số của phương trình hồi qui bằng công thức: 1
bị = —y Vi j
Nit ji 1
* T
- Kiểm định tính ý nghĩa của các hệ số PTHQ theo tiêu chuẩn Student
+ Giá trị trung bình của thơng số tối ưu hóa (hoạt độ chitinase) của 3 thí nghiệm tại tâm:
±y t—i' (0)«
ỹo- -3 + Phương sai tái hiện: