Việc định danh thông qua ảnh chụp dưới KHV quang học (X40) và ảnh chụp dưới KHV điện tử quét (SEM, Scanning electron microscope).
Mẫu được chụp hình SEM tại Viện Khoa học Công nghệ TP. Hồ Chí Minh, số 02 Mạc Đỉnh Chi, Quận 1, TP. Hồ Chí Minh. Trước khi chụp hình, mẫu được xử lý làm sạch chất hữu cơ theo phương pháp Hasle (1978), Round et al., (1990) và có cải tiến ở một vài điểm.
Các bước làm sạch chất hữu cơ
1. Ly tâm 25 ml mẫu, tốc độ 10.000 vòng/phút, thời gian 10 phút và nhiệt độ 4oC.
2. Hút bỏ phần dịch bên trên, còn lại 2,5 ml mẫu bên dưới eppendorf cho vào ống nghiệm.
3. Bổ sung vào ống nghiệm có chứa mẫu 10 ml HCl 10% (tỷ lệ thể tích mẫu: dung dịch HCl 10% = 1:4).
4. Đặt ống nghiệm vào bể nước nóng nhiệt độ 80 – 90oC trong thời gian 3 giờ. Chú ý, thường xuyên lắc ống nghiệm để mẫu được trộn đều và tránh hiện tượng sôi của dung dịch.
5. Sau 3 giờ, rữa mẫu 2 lần bằng nước cất ở tốc độ 10.000 vòng/phút, thời gian 10 phút và nhiệt độ 4oC.
6. Sau khi rữa, cho mẫu vào ống nghiệm và bổ sung H2O2 30% (theo tỷ lệ thể tích 1:4), đặt ống nghiệm vào bể nước nóng nhiệt độ 80 – 90oC trong thời gian 1 giờ. Chú ý, thường xuyên lắc ống nghiệm để mẫu được trộn đều và tránh hiện tượng sôi của dung dịch.
7. Sau 1 giờ, rữa mẫu 3 lần bằng nước cất ở tốc độ 10.000 vòng/phút, thời gian 10 phút và nhiệt độ 4oC.
Sau khi xử lý xong, mẫu được giữ trong nước cất và ở nhiệt độ 4 oC.
Chuẩn bị tiêu bản chụp SEM
Hút 10 – 15 µL mẫu trải đều lên một lamen sạch và sấy lamen có chứa mẫu ở 60oC trong thời gian 12 giờ.