THỰC NGHIỆM
4.5 Phõn tỏch sắc kớ cột phần chiết nƣớc (EG4) 1 Phõn tớch sắc ký lớp mỏng phần chiết nƣớc (EG4)
4.5.1 Phõn tớch sắc ký lớp mỏng phần chiết nƣớc (EG4)
Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trờn bản mỏng trỏng sẵn silica gel Merck Alufolien 60 F254 dày 0,2 mm trờn nền nhụm (Merck, Darmstadt, CHLB Đức). Thuốc thử hiện màu là dung dịch FeCl3 5%.
Phần chiết nước (EG4) được phõn tớch TLC với cỏc hệ dung mụi diclometan- metanol với cỏc tỷ lệ 7:1 và 5:1.
Kết quả phõn tớch TLC được trỡnh bày trờn Bảng 4.3.
Bảng 4.3: Phõn tớch phần chiết nước (EG4) bằng TLC
Hệ dung mụi (diclometan-metanol)
STT Rf Dạng vệt Hiện màu 7:1 1 2 0,62 0,4 Hỡnh cung Trũn Xanh Nõu
5:1 1 2 3 0,48 0,75 0,72 Trũn Trũn Trũn Nõu Nõu Tớm
4.5.2 Phõn tỏch phần chiết nƣớc (EG4)
Phần chiết nước (EG4) được hũa tan trong MeOH, lọc hỳt chõn khụng bằng phễu lọc Buchner và đưa trực tiếp lờn cột.
Phần chiết nước được phõn tỏch bằng sắc kớ cột (CC) pha đảo trờn chất hấp phụ polyme Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemicals), kớch thước cột tỏch 5 cm i.d. 50 cm, rửa giải bằng hệ dung mụi H2O, MeOH-H2O gradient với cỏc tỉ lệ 20% MeOH, 40% MeOH, 60% MeOH và MeOH.
Cỏc phõn đoạn phõn tỏch được thu theo 250 ml cho đến khi hết chất rửa giải (phõn tớch TLC). Cỏc phõn đoạn rửa giải cựng với hệ dung mụi được gộp lại, sau đú được cất loại kiệt dung mụi dưới ỏp suất giảm cho 4 nhúm phõn đoạn: EG4.1
(20%MeOH), EG 4.2 (40% MeOH) (5,3 g), EG4.3 (60% MeOH) (5 g) và EG4.4
(MeOH) (9,7 g).
Quỏ trỡnh phõn tỏch phần chiết EG4 được nờu trờn Sơ đồ 3.3, Mục 3.4, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
Phõn tỏch phõn đoạn EG4.3
Phõn đoạn EG4.3 được phõn tớch bằng sắc kớ lớp mỏng (TLC, silica gel, Merck)
với cỏc hệ dung mụi triển khai CH2Cl2-CH3OH với cỏc tỉ lệ 9:1, 7:1 và 5:1.
Phõn đoạn EG4.3 được phõn tỏch bằng sắc kớ cột CC trờn silica gel (63-200 μm), kớch thước cột tỏch 20 1,5 cm i.d, hệ dung mụi gradient CH2Cl2-CH3OH với cỏc tỉ lệ 15:1 (100 ml ), 9:1 (500 ml), 5:1 (200 ml) và n-hexan-EtOAc-axit fomic với tỉ lệ
10:20:1 (200 ml). Cỏc phõn đoạn phõn tỏch được thu theo 20 ml và phõn tớch sắc kớ lớp mỏng, cỏc phõn đoạn cú TLC giống nhau được gộp lại, cất loại dung mụi dưới ỏp suất giảm cho 5 nhúm phõn đoạn.
Tinh chế phõn đoạn EG 4.3.1 (73 mg) bằng sắc kớ cột Mini-C trờn silica gel (40-
63 μm), hệ dung mụi CH2Cl2-CH3OH với cỏc tỉ lệ 40:1 (100 ml), 20:1 (25 ml) và 12:1 (25 ml), thu 5 ml/phõn đoạn cho chất EG4.3.1.1 (chất I) và chất EG4.3.1.2 (chất II). (25 ml), thu 5 ml/phõn đoạn cho chất EG4.3.1.1 (chất I) và chất EG4.3.1.2 (chất II).
Tinh chế phõn đoạn EG 4.3.2 (0,6 g) bằng sắc kớ cột Mini-C trờn silica gel (40-63 μm), hệ dung mụi CH2Cl2-CH3OH với cỏc tỉ lệ 12:1 (200 ml), 10:1 (25ml) và 9:1 (25 ml), thu 5 ml/phõn đoạn cho chất EG4.3.2 (chất III).
Tinh chế phõn đoạn EG 4.3.4 (0,3 g) bằng Mini-C trờn silica gel (40-63 μm), hệ
dung mụi CH2Cl2-CH3OH với cỏc tỉ lệ 12:1 (50 ml), 11:1 (100 ml) và 10:1 (25 ml) thu 5 ml/phõn đoạn cho chất EG4.3.4 (chất IV).