thêm 1 ml dung dịch kaỉi hydroxyd 20 % trong methanol,
màu xanh lục xuất hiện vả trờ nên tím đỏ khi đun nóng trong cách thủy ở 40 °c và sau đó chuyển sang màu nâu đỏ.
Độ trong của dung dịch
Hòa tan 2,5 g chế phẩm trong trimcthyỉpentan (77) vả pha lồng thành 25 ml với cùng dung mơi. Dung dịch thu được phải trong (Phụ lục 9.2).
Chỉ số acid
Không quá 2,0 (Phụ lục 7.2). Dùng 2,00 g chế phẩm.
Menadion và các tạp chất liên quan khác
Phương pháp sắc ký lớp mòng (Phụ lục 5.4).
Bản mỏng: Siỉica geỉ GF2S4 ■
D u n g m ó i kh a i tr iể n: C y cỉo h exa n - to ỉu e n (20 : 80).
Dung dịch thử (ỉ): Hòa tan 0,40 g chế phẩm trong cyclohexan
(77) và pha loẫng thành 10 ml với cùng dung môi.
Dun% dịch thử (2): Pha loãng 1 ml dung dịch thử (ỉ) thành
10 ml với cyclohexan (77).
Dung dịch đổi chiếu (ỉ): Hòa tan 40 mg phytomenadion
chuẩn trong cyclohexan (77) và pha loãng thành 10 ml với cùng dung môi.
DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM V
Pung dịch đổi chiếu (2)\ Pha loãng 1 ml dung dịch thử (2)
thành 20 ml bẳng cycỉohexan (Tỉ'),
pung dịch đối chiếu (3): Hòa tan 4,0 mg menadion (TT)
trong cycỉohexan (TT) và pha loãng thành 50 ml với cùng dung môi.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 ịi\ môi
dung dịch trên. Triển khai sấc ký đèn khi dung môi đi được khoảng 15 cm, lấy bản mỏng ra, để khơ ngồi khơng khí trong 5 min. Quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254 nm vả phun dung dịch acid phosphomoỉybdic Ì0 %
trong ethanol (TT). sấy bàn mòng ờ 120 °c trong 5 min. Quan sát dưới ánh sáng thường. Trên sắc ký đồ cùa dung dịch thừ (1), bất cứ vết nào tương ứng menadion không dược đậm màu hơn vết trên sắc ký đồ cùa dung dịch đối chiểu (3) (0,2 %); bất cứ vết nào, khác vết chính và vết tưcmg ứng với menadion, không được đậm màu hơn vết của dung dịch đối chiếu (2) (0,5 %). Bỏ qua bất cứ vết nào nằm dưới vết chính và khơng tách hồn tồn khỏi vét chính.
Tro sulíat
Khơng được q 0,1 % (Phụ lục 9.9, phương pháp 2).
Dùng 1,0 g chế phẩm.
Định lượng
Phương pháp sắc ký lòng (Phụ lục 5.3).
Pha động: Octanoỉ - di-isopropyl ether - heptan (0,67 :
3,3:1000)
Dung dịch thử: Hòa tan 15,0 mg chế phẩm trong pha động
vả pha loãng thành 10,0 ml với pha động.
Dung dịch đoi chiếu (ỉ): Hòa tan 15,0 mg phytomenadion
chuân trong pha động và pha loãng thành 10,0 ml với pha động.
Dung dịch đoi chiếu (2): Hòa tan 15,0 mg phytomenadion
chuân vả 4,0 mg /‘rom-epoxyphytomenadion chuẩn trong pha động và pha ỉoâng thành 10,0 ml với pha động.
Điêu kiện sắc ký:
Cột kích thước (25 cm x 4,6 mm) được nhồi spherical silica geỉ dừng cho sắc ký (5 pm) với lồ xốp 8 nm.
Detector quang phổ tử ngoại đặt tại bước sóng 254 nm. Tốc độ dịng: 0,4 ml/rnin.
Thể tích tiêm: 20 pl.
Cách tiến hành:
Tiêm dung dịch đổi chiểu (2). Điều chình độ nhạy của hệ thơng sao cho chiều cao của pic chính ít nhất bàng 50 % của thang đo.
Phép thừ chi có giá trị khi thứ tự rửa giải của các pic là
tr<ms-epoxyphytomenadion, cứ-phytomenadion và trans-
phytomenadion. Tiến hành tiêm dung dịch đổi chiếu (1) 6 lần. Phép định lượng chi có giá trị khi độ lệch chuẩn tương đơi của diện tích pic đông phân trans nhỏ hơn 1,0 % và
độ phần giải giữa pic tương ứng với /raw-phytomenadion và cis-phytomenadĩon ít nhất là 2,5. Tiêm dung dịch thử và dung dịch đổi chiếu (1), tính tốn nồng độ phần trăm cùa /ratts-phytomenadion, cứ-phytomenadion và trans-
epoxyphytomenadion theo các công thức sau:
DƯỢC ĐIỆN VIỆT NAM V
- r , I J - _ ^ x A Ịj.a„s * Slranf 7>-a«5-phytomenadion = ------- —^ ----------- tn x s lrans VĨÊNNẺN PHYTOMENADION CA-phytomenadion = -----------— -■ m x S'cis Thms-epoxyphYtomenadion - —— —------ m * Sepoxy Trong đó:
rrí lả khối lượng (mg) chất chuẩn trong dung dịch đối
chiếu (1);
m là khối lượng (mg) chế phẩm trong dung dịch thử; /Ttrans là hàm lượng (%) /rarts-phytomenadion trong phytomenadion chuẩn;
A'C{S là hàm lượng (%) cừ-phytomenađion trong phytomenadion chuẩn;
Ả 'epoxy là hàm lượng (%) /r<my-epoxyphytomenadion trong
phytomenadion chuẩn;
Strans là diện tích pic tương ứng với đồng phân trans trong
sẳc ký đồ của dung dịch thừ;
Scis là diện tích pic tương ứng với đồng phân cis trong sắc ký đồ của đung dịch thử;
Sep0Ky là điện tích pic tương ứng với đồng phân trans-
epoxyphytomenadion trong sãc kỷ đô của dung dịch thừ; iSVans là diện tích pic tương ứng với đồng phân trans trong săc ký đồ của dung dịch đối chiếu (1);
s \is lả diện tích pic tưong ứng với đồng phân cỉs trong sắc ký'đò của dung dịch đổi chiếu (1);
5'epoxy là diện tích pic tương ứng với đồng phân trans-
epoxyphytomenadion trong sắc ký đồ cùa dung dịch đổi chiếu (1),
Bảo quản
Trong bao bì kín, tránh ánh sáng.
Loại thuốc
Thuốc tương tự vitamin K.
Chế phẩm
Thuốc tiêm, viên nén.
VIÊN NÉN PHYTOMENADION
Tabeỉỉae Phytomenadìonì
Là viên nén nhai hay ngậm chửa phytomenadion.
Chế phẩm phải đáp ứng các yêu cầu trong chuyên luận ‘Thuốc viên nén” (Phụ lục 1.20) và các yêu cầu sau đây:
Hàm lượng phytomcnadion, C3|H460 2, từ 90,0 % đến 110,0 % so với lượng ghi trcn nhãn.
Định tính
Lẳc một lượng bột viên tương ứng với 50 mg phytomenađion với 50 ml eihcmoỉ (77), khoảng 1 h, để lấng. Lấy 5 ml dịch
PILOCARPrN NITRAT
trong cho vào bình định mức 50 ml, thêm ethcmoỉ (77) đến định mức, lắc đều (dung dịch A). Phồ hấp thụ (Phụ lục 4.1) của dung dịch A trong khoảng bước sóng từ 230 nm đến 350 nm, phải có cực đại ở bước sóng 328 nm và cực tiểu ờ bước sóng 292 nm.
Tiếp tục pha lỗng một thể tích thích hợp dung dịch A với lượng ethanol (77) vừa đủ để được dung dịch
phytomenadion 0,001 %. Phổ hấp thụ (Phụ lục 4.1) cùa dung dịch thu được Ưong khống bước sóng từ 230 nm đến 350 nm, phải có cực đại ở các bước sóng 245 nm, 249 nrn, 263 nm và 271 nm, cực tiểu ở các bước sóng 256 nm và 266 nm.
Độ rã
Yêu cầu về độ rã không áp dụng cho viên nén phytomenadion.
Menadion
Không được quá 1,0 %
Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).
Bản mỏng: Siỉica geỉ GF2S4
Dung môi khai triển: Methanoỉ - ether - cvcỉohexan
( 1 :2 0 : 80).
Dung dịch thử: Phân tán một lượng bột viên tương ứng với
50 mg phytomenadion trong 5 ml ethanoỉ (TT) bang cách lắc siêu âm khoảng 5 min, thêm 15 ml 2,2,4-trimethylpentan
(77), lắc khoảng 1 min, ly tâm vả lấy lớp dung dịch trong ờ trên.
Dung dịch đối chiếu: Dung dịch 0,0025 % menadìon trong 2,2,4-trimethyỉpentan (TT).
Cách tiến hành: Chấm 50 Ịil mỗi dung dịch trên. Triên
khai sấc kỷ đến khi dung môi đi được 15 cm. Lấy bản sắc ký ra để khơ ngồi khơng khí. Quan sát dưới ánh sáng từ ngoại ờ bước sóng 254 run.
Trên sắc kỵ đồ của dung dịch thử, bất cứ vết phụ nào tương ứng với vết của menadion không được đậm hơn vết trên sắc kỷ đồ cùa dung dịch đối chiếu.
Định lượng
Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3).
Pha động: Hỗn hợp nước - ethanoỉ 96 % (5 : 95).
Dung dịch chuẩn: Dung dịch phytomenađion chuẩn 0,01 %
trong pha động.
Dung dịch thử: Lấy 20 viên, loại bò lớp bao (nếu cần), cân
tính khối lượng trung bình viên vả nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng vói khoảng 10 mg phytomenadion, thêm 5 ml dung dịch amoniac 0,5 M (77), lắc siêu âm khoảng 5 min. Thêm 90 ml ethanoỉ
96 % (r ĩ), lắc siêu âm khoảng 10 min, lắc cơ học khoảng
10 min và thêm ethanoỉ 96 % (TT) vừa đủ 100,0 ml, ly tâm và lẩy lóp dung dịch trong ờ trên.
Điểu kiện sắc ký:
Cột kích thước (20 cm X 4 mm) được nhồi pha tình c (5 pm).
Dctector quang phổ tử ngoại đặt ờ bước sóng 254 nm. Tốc độ dịng: 1,5 ml/min.
Thể tích tiêm: 20 pl.
Cách tiến hành:
DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM V í Kiểm tra tính phù hợp của hệ thổnạ sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuàn, độ lệch chuân tương đối của các diên tích đáp ứng từ 6 lần tiêm lặp lại không được lớn hơn 2 °/o Tiến hành sắc kỷ lần lượt với dung dịch chuẩn và dung
dịch thử. è
Tính hàm lượng phytomenadion, C3iH4fi0 2, có trong một đơn vị chế phâm dựa vào diện tích pic thu được của dung dịch thừ, dung dịch chuẩn và hàm lượng C3|H460 2 của phytomenadion chuẩn. Bảo quản Trong bao bì kín và tránh ánh sáng. Loại thuốc Vitamin (nhỏm K). Hàm lượng thưịrng dùng 2 mg, 5 mg, 10 mg. PILOCARPĨN NITRAT Piỉocarpỉni nỉtras HNO, Cn H16N20 2.H N 0 3 P.t.l: 271,3
Pilocarpin nitrat là (3S’,4/?)-3-ethyl-4-[(l-methyl-l//-imidazol -5-yl)methyl]~dihydrofuran-2(3//)-on nitrat, phải chứa từ 98,5 % đến 101,0 % CnHI6N202.HN03, tính theo chế phẩm đã làm khỏ.
Tính chất
Bột kết tĩnh trẳng hoặc gần như trắng hay tinh thề không màu. BỊ phân hủy dưới ánh sáng.
Dề tan trong nước, hơi tan trong ethanol 96 %. Cháy ờ khoảng ì 74 °c kèm theo phân hủy.
Định tính
Có thể chọn một trong hai nhóm định tính sau: Nhóm I: A, c , D.
Nhóm II: B, c , D.^
A. Phổ hấp thụ hồng nẹoại (Phụ lục 4.2) của chế phẩm phải phù hợp với phô hâp thụ hông ngoại của pilocarpin nitrat chuẩn.
B. Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).
Bàn mỏng: Siĩlca gel G.
Dung môi khai triển: Amoniac đậm đặc - methanoỉ ' methvìen cỉorid {1 : 14: 85).
Dung dịch thử: Hòa tan 10 mg chế phẩm ừong nước và
pha loãng thành 10 ml với cùng dung môi.
Dung dịch đối chiếu: Hòa tan 10 mg pilocarpin nitrat
chuẩn trong trong nước vả pha loãng thành 10 ml với cùng dung môi.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lèn bản mỏng 10 pl mỗi
dung dịch trên. Triển khai sắc kỷ tới khi dung môi đi được 15 cm. Sấy bàn mỏng ờ 100 °c đên 105 °c trong 10 min,
đe nguội- Phun thuốc thử Dragendorff ỢT) lên bản mỏng, vểt chính trên sắc ký đồ cùa dung dịch thử phải tưcmg tự với vết chính trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu về vị tri màu sắc và kích thước.
c Chế phẩm phải đáp ứng phép thử Góc quay cực riêng. D Chế phẩm cho phàn ứng của nitrat (Phụ lục 8.1).
pô trong và màu sấc của dung dịch
Dung dịch S: Hòa tan 2,50 g chê phâm trong nước không cỏ carhon dioxyd (TT) và pha loãng thành 50,0 ml với
cùn° dung môi. Pha ngay trước khi dùng.