amylase của chủng R2
3.2.1. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến khả năng sinh tổng hợp amylase của chủng R2 amylase của chủng R2
Để xác định thời điểm chủng nấm mốc R2 sinh tổng hợp amylase nhiều nhất chúng tôi tiến hành nuôi chủng này trong môi trường bán rắn [Phần 2.3.2.5], nhiệt độ: 300C, độ ẩm: 60%, mật độ bào tử chủng R2: 1150 x 105 bào tử/ml. Lấy mẫu tách chiết enzyme sau khi nuôi cấy ở các khoảng thời gian khác nhau 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32 giờ và xác định hoạt độ bằng phương pháp tạo màu với dung dịch Iod [Phần 2.3.1.1]. (Hình 3.7)
Hình 3.7: Kết quả ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến sinh tổng hợp amylase của chủng R2
Kết quả ở hình 3.7 cho thấy:
Hoạt độ tăng mạnh chỉ sau 8 giờ nuôi cấy (7.668U) và đạt 9.33U sau 11 giờ nuôi cấy.
Từ sau 14 giờ nuôi cấy hoạt độ đạt cực đại và ổn định cho đến 29 giờ.
H oạ t đ ộ (U )
Thời gian (giờ)
Hoạt độ dao động từ 9.812 - 9.801U sau 14 giờ nuôi cấy quan sát cho thấy trong khoảng thời gian này hầu như toàn bộ bào tử đã phát triển thành sợi nấm. Có lẽ vì vậy mà khả năng sinh tổng hợp enzyme của chúng mạnh.
Kết quả xử lý thống kê của các mẫu từ 14 giờ đến 29 giờ không có sự sai khác (P< 0.05). Sau 32 giờ nuôi cấy hoạt độ bắt đầu giảm nhẹ (Hoạt độ vẫn còn 9.66U). Lúc này bào tử đã hình thành nhiều.
Như vậy, có lẽ do môi trường đã cạn kiệt nên nấm mốc bắt đầu hình thành bào tử và giảm khả năng sinh tổng hợp enzyme ngoại bào.
Để có được kết quả chính xác hơn chúng tôi tiến hành nuôi cấy sinh lại chủng R2 trong các khoảng thời gian 12, 13, 14, 15, 16 giờ, với chế độ nhiệt độ, độ ẩm, mật độ bào tử như trên. Sau 1 giờ lấy mẫu 1 lần và xác định hoạt độ dịch nuôi cấy. (Hình 3.8)
Hình 3.8: Kết quả ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến sinh tổng hợp amylase của chủng R2
Kết quả ở hình 3.8 cho thấy:
Ở 12 giờ hoạt độ vẫn chưa đạt cực đại. Từ 14 giờ đến 16 giờ hoạt độ đạt cực đại và dao động trong khoảng 9.83 - 9.84U.
Theo xử lý phương sai (P< 0.05) hoạt độ giữa 14 và 16 giờ không thấy sai khác, tức mức độ dao động sinh tổng hợp amylase không dao động mạnh
H oạ t đ ộ (U )
Do đó, ta có thể chọn thời điểm nuôi 14 giờ để tiến hành khảo sát các yếu tố tiếp theo.