3. í NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
1.3.4.Cơ sở khoa học về quy trỡnh đụng lạnh tinh dịch
Nhiều cụng trỡnh nghiờn cứu về quy trỡnh đụng lạnh tinh dịch lợn đó đƣợc cỏc nƣớc nhƣ Nhật Bản, Hàn Quốc, Đức... đề xuất.
Pursel và Johnson (1978) [37] đó đề xuất quy trỡnh đụng lạnh và giải đụng tinh dịch lợn với những bƣớc nhƣ sau:
Tinh dịch đƣợc thu thập theo phƣơng phỏp khai thỏc bằng tay. Loại bỏ keo phốn ngay trong khi thu tinh dịch. Sau đú tinh dịch đƣợc pha loóng theo tỷ lệ 1:3 với mụi trƣờng Androhep Plus và hạ nhiệt độ xuống 23oC sau đú là 15oC trong vũng 1 giờ 30 phỳt. Cỏc mẫu tinh dịch sau đú đƣợc đƣa vào ly tõm ở điều kiện 800 vũng/phỳt trong 10 phỳt ở nhiệt độ 15oC. Tinh trựng thu đƣợc sau ly tõm đƣợc pha loóng để đạt đƣợc nồng độ tinh trựng là 200.106/ml theo hai bƣớc:
- Bƣớc 1: pha loóng với mụi trƣờng BF5 (CE) để đạt đƣợc thể tớch bằng 2/3 thể tớch cuối cựng sau đú làm lạnh tinh dịch tới nhiệt độ 5oC trong vũng 2 -
2,5 giờ.
- Bƣớc 2: pha loóng tinh dịch thu đƣợc với mụi trƣờng FE theo tỷ lệ 1/3 thể tớch cuối cựng. Sau đú để tinh dịch ở nhiệt độ 5oC khoảng 5 phỳt.
Tinh dịch thu đƣợc sau bƣớc 2 đƣợc đúng vào cọng rạ 5 ml và đƣa vào đụng lạnh. Đụng lạnh đƣợc tiến hành tuần tự theo cỏc bƣớc:
- Bƣớc 1: hạ nhiệt độ từ 5oC xuống -8oC (Tốc độ hạ nhiệt độ: 20oC/phỳt) - Bƣớc 2: hạ nhiệt độ từ -8oC xuống -120oC (Tốc độ hạ nhiệt độ:
69oC/phỳt)
- Bƣớc 3: hạ nhiệt độ từ -120oC xuống -140oC (Tốc độ hạ nhiệt độ: 20oC/phỳt)
- Bƣớc 4: đƣa mẫu tinh dịch vào bảo quản trong nitơ lỏng ở -196oC