Chất 5 µl 10 µl tR (phút) RS AS tR (phút) RS AS HMX 2,673 2,385 1,253 2,165 1,783 1,076 RDX 5,648 3,652 1,086 4,005 1,837 1,148 Chất 15 µl 20 µl tR (phút) RS AS tR (phút) RS AS HMX 2,473 3,534 1,384 2,162 3,520 1,434 RDX 4,782 3,338 1,496 3,938 3,362 1,242 Hình 3. 11 Sắc ký đồ HPLC khảo sát thể tích mẫu
Nhận xét thấy thể tích mẫu tiêm vào cột ảnh hƣởng rõ rệt đến kết quả phân tích. Nếu lƣợng mẫu tiêm vào cột lớn hơn 15 μl thì pic của HMX và RDX sẽ không đối xứng tốt, giá trị diện tích pic của các pic này sẽ khơng chính xác và dẫn tới kết quả phân tích sai. Điều này đƣợc giải thích theo thuyết tốc độ (thuyết Van Deemter), khi lƣợng mẫu tăng thì số đĩa lý thuyết (N) của cột giảm, độ phân giải
giảm theo vì RS N [6]. Kết quả trong bảng 3.5 cho thấy, với lƣợng mẫu tiêm
vào cột là 10 μl thì cho kết quả tách tốt nhất. Vì vậy, chúng tơi chọn thể tích mẫu tiêm vào cột là 10μl cho các khảo sát tiếp theo.
3.1.5 Khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu
3.1.5.1 Phá mẫu bằng axeton
HMX và RDX tan rất tốt trong axeton, tiến hành đo trên thiết bị HPLC với
chế đo đƣợc khảo sát nhƣ trên thì thấy xuất hiện một pic có nghĩa là hai pic chập vào nhau khơng tách đƣợc. Do đó khơng định lƣợng đƣợc hai chất.
Hình 3. 12 Sắc ký đồ HPLC phá mẫu bằng axeton 3.1.5.2 Phá mẫu bằng MeOH
HMX và RDX tan chậm trong MeOH, tiến hành đo thì kết quả cho thấy hai pic gần nhau, bị trùng chân pic, pic của HMX, RDX đều bị dỗng chân nên cũng khơng định lƣợng đƣợc.
Hình 3. 13 Sắc ký đồ HPLC phá mẫu bằng MeOH 3.1.5.3 Phá mẫu bằng ACN
HMX và RDX tan tốt trong ACN, kết quả đo cho thấy hai pic tách rời khỏi nhau, pic cân, thời gian lƣu ngắn.
3.1.6 Điều kiện tối ƣu hóa cho q trình tách HMX và RDX.
3.1.6.1 Điều kiện tối ƣu xử lý mẫu:
Cân khoảng 0,0300g ± 0,0002g mẫu cho vào bình định mức 25,0ml thêm 10,0ml ACN lắc đều cho mẫu tan hồn tồn, để n 10 phút, sau đó điền đầy ACN đến vạch mức.
Lấy 10ml đem ly tâm 5 phút với tốc độ 1000 vòng/ phút, lấy dung dịch ra lọc qua fit lọc 0,45 µm đƣợc dung dịch chạy sắc ký.
3.1.6.2 Điều kiện tối ƣu chạy sắc ký:
Từ những kết quả khảo sát ở trên rút ra điều kiện sau:
Cột tách: cột C18, 4,6mm x 150 mm, 5µm.
Detector :UV- VIS
Bƣớc sóng hấp thụ cực đại: 230 nm.
Nhiệt độ cột 300C.
Tỷ lệ 4 pha dung môi: isooctan, ACN, MeOH, chloroform tỷ lệ %
theo thể tích là 75:2:3:20.
Tốc độ dịng 1,0 ml/phút.
Thể tích bơm mẫu: 10µL.
Sở dĩ luận văn chọn tốc độ 1ml/phút là do trong quá trình khảo sát với các loại dung môi thấy tốc độ 1ml/phút cho pic có độ phân giải tốt, độ lặp tốt nên luận văn chọn chạy máy với tốc độ 1ml/phút.
3.2. ĐƢỜNG CHUẨN, GIỚI HẠN PHÁT HIỆN VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƢỢNG 3.2.1 Khảo sát khoảng tuyến tính và xây dựng đƣờng chuẩn 3.2.1 Khảo sát khoảng tuyến tính và xây dựng đƣờng chuẩn
Các dung dịch dùng để dựng đƣờng chuẩn đƣợc pha loãng từ các dung dịch chuẩn gốc. Nồng độ các dung dịch này đƣợc biểu diễn trong bảng 3.6. Mỗi dung dịch đƣợc bơm trên hệ sắc ký 3 lần, diện tích pic trung bình thu đƣợc sẽ là số liệu để dựng đƣờng chuẩn sự phụ thuộc của diện tích pic vào nồng độ.