Để đánh giá độ nhạy của PCR đa mồi theo cơng thức tính (Se) chúng tơi tiến hành trên các mẫu ADN được tách chiết từ các loài vi khuẩn chứng dương thuộc họ
Enterobacteriaceae như E. coli, K. pneumoniae, P. mirabilis, Salmonella sp,..Mặt
khác, trong nội dung đánh giá độ nhạy kỹ thuật thì việc thực hành trên lâm sàng cần xác định độ nhạy kỹ thuật ở nồng độ vi khuẩn tối thiểu trong mẫu bệnh phẩm. Do vậy, chúng tơi tiến hành pha lỗng nồng độ của các chủng vi sinh theo tỷ lệ giảm dần từ 104 CFU/ml đến 100 CFU/ml vào trong máu người khỏe mạnh rồi tiến hành tách chiết ADN vi sinh vật và tiến hành PCR.
b. Đánh giá độ đặc hiệu của phản ứng PCR đa mồi.
Một trong những yêu cầu quan trọng khác của chẩn đoán vi khuẩn từ máu ngoại vi là phải kiểm soát được hiện tượng bắt cặp của mồi với ADN gen người. Mặc dù kết quả phân tích trên các thuật tốn do chúng tôi sử dụng trong thiết kế mồi đều loại bỏ khả primer-dimer và hiện tượng bắt chéo của mồi vào gen người nhưng để khẳng định tính đúng đắn trong thực hành chẩn đốn chúng tơi tiến hành đánh giá độ đặc hiệu phản ứng PCR đa mồi trên các mẫu ADN chứng âm[31].Tương tự như việc đánh giá độ nhạy phương pháp, đối với việc tính độ đặc hiệu chúng tôi tiến hành như sau: Đánh giá độ đặc hiệu theo công thức (Sp) bằng cách PCR đa mồi trên các mẫu ADN vi khuẩn chứng dương, ADN từ các loài vi
khuẩn khác không thuộc họ này (Staphylococcus aureus; Streptococcus
pneumoniae; Pseudomonas aeruginosa; Acinetobacter baumanii…), ADN người,
ADN virut, ADN nấm. Cơng thức tính độ nhạy và độ đặc hiệu của cấy khuẩn và PCR đa mồi được tính theo cơng thức sau:
Bảng 5. Cơng thức tính độ nhạy, độ đặc hiệu phương pháp
PCR (+) PCR (-) Tổng
Nuôi cấy (+) a b a + b
Nuôi cấy (-) c d c + d
Se = (a/a+c) x 100 (%)
Sp = (d/b+d) x 100 (%)