Đại lƣợng đo Ý nghĩa
Giá trị trung bình
x = ∑ (2.2)
x là giá trị trung bình số học của tập hợp các giá trị xi, dùng để ước lượng xu hướng của các giá trị trung tâm (giá trị thực)
Độ lệch chuẩn SD SD = √∑
(2.3)
SD nói lên mức độ dao động của các kết quả đo xi xung quanh giá trị trung bình, thể hiện sự sai lệch phân tán của một dãy kết quả thí nghiệm so với giá trị trung bình của nó
Độ lệch chuẩn tương đối RSD(%) RSD% =
(2.4)
Biểu thị sự biến động, phân tán của các kết quả thí nghiệm
Đánh giá độ chụm:
- Nếu theo một tiêu chuẩn hoặc một quy trình chính thống có cơng bố RSD (%) thì RSD (%) tính được phải nhỏ hơn hoặc bằng RSD (%) cho phép.
- Nếu theo một tiêu chuẩn, một quy trình chính thống khơng cơng bố thì người ta thường so sánh RSD (%) tính được so với RSD (%) cho phép ở nồng độ chất tướng ứng theo AOAC (phụ lục). RSD (%) tính được khơng được lớn hơn giá trị trong bảng ở hàm lượng chất tương ứng, độ chụm thay đổi theo nồng độ chất phân tích. Nồng độ chất càng thấp thì kết quả càng dao động nhiều (khơng chụm) nghĩa là RSD% càng lớn [15].
2.2.4.2. Độ đúng của phƣơng pháp
Độ đúng chỉ mức độ gần nhau giữa giá trị trung bình của dãy lớn các kết quả thí nghiệm và các giá trị quy chiếu được chấp nhận. Do đó, thước đo độ đúng thường đánh giá qua sai số tương đối hay bằng phương pháp xác định độ thu hồi.
2.2.4.3. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lƣợng (LOQ)
Giới hạn phát hiện (LOD): là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà hệ thống phân tích cịn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa so với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu nền.
Giới hạn định lượng (LOQ): là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà hệ thống phân tích định lượng được tín hiệu phân tích khác có ý nghĩa định lượng với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu của nền. LOQ chỉ áp dụng cho các phương pháp định lượng.
Giống như LOD, có nhiều cách khác nhau để xác định LOQ phụ thuộc vào từng phương pháp, kỹ thuật và điều kiện trang thiết bị cụ thể mà lựa chọn phương pháp xác định, tính tốn cho phù hợp.
Cơng thức tính LOD và LOQ:
LOD = (2.5)
LOQ = (2.6)
Trong đó:
- Sb: Sai số của giá trị y trong phương trình hồi quy. - b: Hệ số hồi quy tuyến tính.
2.3. Qui trình thực nghiệm
2.3.1. Nghiên cứu tối ƣu các điều kiện điều chế dung dịch nano vàng: 2.3.1.1. Điều chế dung dịch nano vàng
Hút chính xác 2,50ml dung dịch HAuCl4.3H2O 10mM chuyển vào bình định mức 50ml, thêm nước cất tới vạch định mức, trộn đều được 50,00ml dung dịch HAuCl4.3H2O 0,50mM. Chuyển dung dịch vào cốc chịu nhiệt 100ml và đun dung dịch ở khoảng 100°C. Khi dung dịch sôi, thêm 5,00ml natri citrate 38,8 mM (0,67%) vào và khuấy mạnh bằng thiết bị khuấy từ. Đun dung dịch thêm khoảng 10 phút ta thấy dung dịch chuyển sang màu đỏ tươi, biểu thị sự hình thành các hạt nano Au. Dung dịch được làm nguội đến nhiệt độ phòng và được bảo quản ở 4°C trong tủ lạnh để sử dụng.
2.3.1.2. Ảnh hƣởng của nồng độ dung dịch nano vàng (AuNPs)
Lấy vào 04 bình định mức dung tích 10ml, mỗi bình các thể tích dung dịch HAuCl4.3H2O 8,55 mM như sau: 0,50; 1,00; 5,00; 8,00ml. Thêm nước cất tới vạch định mức, trộn đều dung dịch. Chuyển từng dung dịch vào cốc chịu nhiệt 100ml và đun dung dịch ở khoảng 100°C. Khi dung dịch sôi, thêm 1,00ml natri citrate 38,8mM (0,67%) vào và khuấy mạnh bằng thiết bị khuấy từ. Đun thêm khoảng 10 phút và quan sát dung dịch để chọn nồng độ dung dịch Au phù hợp nhất.
2.3.1.3. Ảnh hƣởng của nồng độ natri citrate
Lấy vào 04 bình định mức dung tích 10ml, mỗi bình 0,50ml dung dịch HAuCl4.3H2O 10mM. Thêm nước cất tới vạch định mức, trộn đều dung dịch.
Chuyển từng dung dịch vào cốc chịu nhiệt 100ml và đun dung dịch ở khoảng 100°C. Tại điểm sôi của dung dịch, thêm 1,00ml dung dịch natri citrate có các nồng độ lần lượt như sau: 11,56 mM (0,19%); 38,8 mM (0,67%); 57,8 mM (0,99 %); 115,6 mM (1,99%) vào và khuấy mạnh bằng con khuấy từ. Đun dung dịch thêm khoảng 10 phút và quan sát dung dịch để chọn nồng độ dung dịch natri citrate phù hợp nhất.
2.3.2. Khảo sát các đặc trƣng của dung dịch nano Au
2.3.2.1. Khảo sát đặc tính hấp thụ cộng hƣởng bề mặt SPR bằng phổ hấp thụ phân tử
Phổ hấp thụ phân tử của các dung dịch nano Au được ghi trên máy quang phổ UV-VIS 1601 PC – Shimadzu (Nhật Bản) ở phịng thí nghiệm Hóa phân tích, khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học tự nhiên.
2.3.2.2. Khảo sát hình thái bề mặt qua ảnh TEM
Hình thái bề mặt hạt nano vàng được quan sát qua kính hiển vi điện tử truyền qua JEM1010, tại phịng thí nghiệm Siêu cấu trúc, khoa Vi rút, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương với các thơng số sau: hệ số phóng đại M = x50-x600.000, độ phân giải d = 3A0 và điện áp gia tốc U = 40-100 kV, với 2 dung dịch là dung dịch hạt nano vàng và dung dịch hạt nano vàng khi có mặt acetamiprid với nồng độ là 10-4M,
2.3.2.3. Đo thế Zeta
Thế Zeta của dung dịch nano vàng được đo trên thiết bị đo thế zeta Zetasizer Nano ZS (Malvern, Worcestershire, UK) tại trường Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHQGHN với 2 dung dịch là dung dịch hạt nano vàng và dung dịch hạt nano vàng khi có mặt acetamiprid 10-4M, pH = 5, CNaCl = 0,012M, CAuNPs = 10-4M.
2.3.3. Khảo sát các yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp xác định acetamiprid bằng phƣơng pháp quang học sử dụng hạt nano vàng
2.3.3.1. Khảo sát lực ion
Chuẩn bị 7 bình định mức dung tích 10 ml, lần lượt thêm vào từng bình 4,00 ml dung dịch AuNPs. Sau đó thêm vào các bình các thể tích dung dịch NaCl 1M khác nhau là 60, 80, 120, 160, 180, 260, 300µL, chỉnh pH = 5, thêm 1,00ml dung dịch acetamiprid có nồng độ 10-4M vào lần lượt các bình, định mức dung dịch đến vạch, trộn đều, đợi 10 phút và đo tỉ lệ độ hấp thụ quang A690/A520.
2.3.3.2. Khảo sát pH
Chuẩn bị 7 bình định mức dung tích 10 ml, lần lượt thêm vào từng bình 4,00 ml dung dịch AuNPs, 120µL dung dịch NaCl 1M, sau đó thay đổi các giá trị pH = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9. Thêm 1,00ml dung dịch acetamiprid có nồng độ 10-4M, định mức dung dịch đến vạch, sau 10 phút đo tỉ lệ độ hấp thụ quang.
2.3.3.3. Khảo sát ảnh hƣởng của thời gian phản ứng
Chuẩn bị 1 bình định mức dung tích 10 ml, thêm vào bình 4,00 ml dung dịch AuNPs, 120µL dung dịch NaCl 1M, chỉnh pH = 5, định mức dung dịch đến vạch, thêm 1,00ml dung dịch acetamiprid có nồng độ từ 10-4M, trộn đều dung dịch. Theo dõi độ hấp thụ quang của dung dịch ở bước sóng 690nm trong vịng 45 phút.
2.3.3.4. Khảo sát ảnh hƣởng của nồng độ dung dịch vàng
Chuẩn bị 7 bình định mức dung tích 10 ml, lần lượt thêm vào từng bình: 0,10; 0,50; 1,00; 1,50; 2,00; 2,50; 3,00 ml dung dịch AuNPs. Sau đó thêm 120µL dung dịch NaCl 1M, chỉnh pH = 5, thêm 1,00ml dung dịch acetamiprid có nồng độ 10-4M, định mức dung dịch đến vạch, sau 10 phút đo tỉ lệ độ hấp thụ quang.
2.3.3.5. Khảo sát nồng độ dung dịch acetamiprid
Chuẩn bị 8 bình định mức dung tích 10 ml, lần lượt thêm vào từng bình 4,00 ml dung dịch AuNPs, 20µL dung dịch NaCl 1M, chỉnh pH = 5. Thêm 1,00ml dung dịch acetamiprid có nồng độ khác nhau từ 510-6 ÷ 5.10-4M, định mức đến vạch, sau 10 phút đo tỉ lệ độ hấp thụ quang.
2.3.3.6. Xác định khoảng tuyến tính
Chuẩn bị 8 bình định mức dung tích 10 ml, lần lượt thêm vào từng bình 4,00 ml dung dịch AuNPs, 120µL dung dịch NaCl 1M, chỉnh pH = 5, thêm 1,00ml dung dịch acetamiprid có nồng độ khác nhau từ 510-6
÷ 5.10-4M, định mức dung dịch đến vạch, sau 10 phút đo tỉ lệ độ hấp thụ quang.
2.3.3.7. Đánh giá phƣơng pháp phân tích
Chuẩn bị 15 bình định mức dung tích 10 ml, lần lượt thêm vào từng bình 4,00 ml dung dịch AuNPs, 120 µl dung dịch NaCl 1M, chỉnh pH = 5. Từ bình 1 đến bình 5 thêm vào mỗi bình 100 µl dung dịch acetamiprid có nồng độ 5.10-4M (~111,3 ppm); từ bình 6 đến bình 10 mỗi bình thêm 100µl dung dịch acetamiprid nồng độ 10-5M (~2,23 ppm) và từ bình 11 đến bình 15 mỗi bình thêm 100µl dung dịch acetamiprid nồng độ 5.10-6M (~1,11 ppm), định mức dung dịch đến vạch. Sau 10 phút đo tỉ lệ độ hấp thụ quang A690/520 của dung dịch.
* Đánh giá độ đúng của phương pháp Sai số trung bình của các lần đo:
S% =
(2.7)
Trong đó:
- S%: Sai số phần trăm tương đối - Co: Giá trị nồng độ ban đầu
- Ci: Giá trị nồng độ tính được theo đường chuẩn * Độ lặp lại của phương pháp
RDS (%) =
x100 (2.9)
Nếu RSD (%) đều nhỏ hơn 5% thì chứng tỏ phương pháp có độ chụm tốt.
2.3.4 Thơng tin mẫu và xử lý mẫu thuốc trừ sâu 2.3.4.1 Mẫu thuốc trừ sâu 2.3.4.1 Mẫu thuốc trừ sâu
Các mẫu thuốc trừ sâu chứa acetamiprid được mua trên thị trường tại các tỉnh Hà Nội và Thái Nguyên. Thông tin về các mẫu thuốc trừ sâu được cho trong Bảng 2.3