Hệ thống MGIT là một phương pháp thuận tiện, nhanh, tin cậy để thực hiện các thử nghiệm xác định độ nhạy cảm kháng sinh (DST) trực tiếp và gián tiếp ở những nước nghèo, đặc biệt sử dụng khá thành công như một phương pháp phát hiện trực tiếp từ các bệnh phẩm lâm sàng bị nhiễm (đờm) [41]. Tuy nhiên, do chi phí cao trong đầu tư đã hạn chế việc sử dụng rộng rãi hệ thống chẩn đoán này.
1.4.3 Một số phƣơng pháp kiểu hình mới
Những nhược điểm của phương pháp kiểu hình truyền thống mất nhiều thời gian cho việc xác định, cần phải có đội ngũ xét nghiệm có kỹ năng tốt trong hầu hết các kỹ thuật, vì vậy một số phương pháp kiểu hình mới đã ra đời có thể thực hiện trên các chủng đã phân lập hoặc trực tiếp từ bệnh phẩm.
1.4.3.1 Phương pháp sử dụng phage đặc hiệu
Hiện tại có hai dạng của phương pháp sử dụng phage đặc hiệu để phát hiện nhanh sự kháng thuốc của MTB, đó là sự khuếch đại phage một cách sinh học trong
mycobacteriophage phát hiện tín hiệu (Jacobs 1993). Chúng dựa trên khả năng của các chủng MTB còn sống hỗ trợ sự phát triển của mycobacteriophage lây nhiễm. Các phage nội sinh không gây nhiễm bị bất hoạt bởi các hoá chất điều trị. Số lượng phage nội sinh, thể hiện số MTB còn sống ban đầu, được xác định sau chu kỳ gây nhiễm, nhân lên và giải phóng ở mycobacteria phát triển nhanh chóng. Trong trường hợp kháng thuốc, trực khuẩn vẫn cịn sống sót và bảo vệ mycobacteriophage [13].
Thử nghiệm thương mại FastPlaque TB đã được sử dụng để phát hiện sự đề kháng với RIF ở cả chủng MTB phân lập và trực tiếp trên các bệnh phẩm lâm sàng.
*Kỹ thuật sử dụng phage phát hiện tín hiệu luciferase
Chủng vi khuẩn lao được ni cấy trên môi trường chứa thuốc kháng sinh 2-4 ngày sau đó được lây nhiễm bởi mycobacteria phage chứa gen biểu hiện luciferase. Khả năng sống sót của vi khuẩn lao trên mơi trường ni cấy được phát hiện bằng tín hiệu luciferase trong vòng vài phút sau khi gây nhiễm. Các chủng MTB nhạy cảm với INH hoặc RIF tín hiệu ánh sáng sẽ bị dập tắt, ngược lại với các chủng đề kháng, tín hiệu ánh sáng sẽ tiếp tục được hình thành. Thử nghiệm này với các thuốc chống lao dịng 1 có độ tương đồng 98% so với hệ thống BACTEC TB-460 [5,13].
Tuy nhiên các nghiên cứu cũng chỉ ra rằng, phương pháp phát hiện tính kháng thuốc bằng phage đặc hiệu trên các chủng MTB phân lập được cho phép rút ngắn thời gian chẩn đốn vì khơng phải ni cấy vi khuẩn đến khi hình thành khuẩn lạc có thể quan sát bằng mắt thường, có độ nhạy cao nhưng độ đặc hiệu thấp và thay đổi. Hiện cũng khơng có đủ bằng chứng đánh giá độ chính xác của thử nghiệm này trong chẩn đoán vi khuẩn lao kháng thuốc, đặc biệt là trực tiếp từ mẫu bệnh phẩm đờm [13,40].
1.4.3.2 Phương pháp đo màu
Một số phương pháp đo màu đã được sử dụng trong nững năm gần đây để phát hiện nhanh tính kháng thuốc của M. tuberculosis. Phương pháp này sử dụng tín hiệu
màu chỉ thị cho phản ứng oxy hóa khử để phát hiện sự sinh trưởng của vi khuẩn lao trên mơi trường chứa kháng sinh. Tính kháng thuốc được phát hiện bằng sự thay đổi màu sắc của chất chỉ thị màu tương ứng với số lượng vi khuẩn lao sống sót trong mơi trường. Các chất chỉ thị màu đã được sử dụng cho phương pháp này như alamar blue
hoặc muối tetrazolium 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide. Phương pháp sử dụng chỉ thị màu có độ nhạy tương đối nhưng độ đặc hiệu thấp để phát hiện nhanh MDR-TB [35].
1.4.3.3 Phương pháp khử nitrate
Đây là một kỹ thuật rất đơn giản dựa trên khả năng M. tuberculosis khử nitrate thành nitrite được phát hiện bằng cách thêm một thuốc thử hố học vào mơi trường ni cấy. M. Tuberculosis được nuôi cấy trên môi trường Loewenstein-Jensen chứa chất kháng sinh và khả năng khử nitrate thành nitrite được xác định sau 10 ngày nuôi cấy. Các chủng kháng thuốc sẽ khử nitrate và được nhận ra bởi màu hồng đỏ trong môi trường trong khi các chủng nhạy cảm sẽ mất khả năng này do chúng bị ức chế bởi chất kháng sinh. Một số nghiên cứu gần đây áp dụng phương pháp này trên mẫu bệnh phẩm đờm cho độ nhạy và độ đặc hiệu khác nhau, đặc biệt cho kết quả tốt trong phát hiện đề kháng với INH và RIF [38].
Các phương pháp này đều dựa trên nguyên lý xác định khả năng phát triển của vi khuẩn lao trong mơi trường ni cấy có kháng sinh từ đó đưa ra kết luận về khả năng kháng thuốc của chủng vi khuẩn lao đang nghiên cứu. Nhược điểm của phương pháp này là thời gian nuôi cấy để chẩn đốn dài, ít nhất mất 2 - 4 tuần mới cho kết quả vì thế khơng đáp ứng được cơng tác điều trị và kiểm soát lao kháng thuốc.