Dung dịch để giữ chủng vi khuẩn
Dung dịch (1 lit) chứa 28 g Brucella Broth (BB), bổ sung thêm 30% glycerol (v/v), bảo quản ở -80oC.
2.2.3. Địa điểm thực hiện nghiên cứu
- Soi và sinh thiết dạ dày đƣợc thực hiện tại phòng Nội soi, bệnh viện Bƣu Điện. - Các phân tích sau đƣợc thực hiện tại trƣờng Đại học tổng hợp New York, NY, Mỹ: + Nuôi cấy và phân lập các chủng vi khuẩn kị khí.
+ Xác định HP status của các bệnh nhân.
2.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU
Xác định HPstatus Bệnh nhân có các dấu hiệu chảy
máu dạ dày
Nội soi lấy sinh thiết dạ dày
- Khám lâm sàng, đáp ứng đầy đủ các tiêu chuẩn - Đồng ý tham gia nghiên cứu
Nuôi cấy, phân lập vi khuẩn trong điều kiện kị
khí
Định tên các chủng vi khuẩn phân lập Nghiên cứu hình thái
2.3.1. Khám lâm sàng
Các bệnh nhân đƣợc thăm khám lâm sàng, hỏi bệnh và tiền sử theo mẫu phiếu thu thập số liệu thống nhất bao gồm các thơng tin: tên; tuổi; giới tính; triệu chứng lâm sàng (đau thƣợng vị, cồn cào nóng rát, ợ hơi, ợ chua, buồn nơn, nôn, đầy bụng, rối loạn đại tiện...); tiền sử bệnh (bản thân, gia đình); tiền sử uống rƣợu bia, thuốc lá, uống thuốc kháng sinh hay thuốc ức chế axit; yếu tố stress; dị ứng...
2.3.2. Nội soi và lấy bệnh phẩm
Việc nội soi, chụp ảnh và lấy mẫu sinh thiết dạ dày cho các nghiên cứu đƣợc thực hiện theo thƣờng qui bởi các bác sĩ Nội khoa tiêu hóa cùng trang thiết bị của bệnh viện. Bệnh nhân đƣợc chẩn đoán bị viêm dạ dày xuất huyết (về các mặt gồm vị trí tổn thƣơng, hình ảnh tổn thƣơng, mức độ tổn thƣơng) sẽ đƣợc sinh thiết 2 mảnh, trong đó 1 mảnh ở hang vị, 1 mảnh ở thân vị. Những mẫu bệnh phẩm này đƣợc cho vào ống nghiệm vô trùng và bảo quản trong bình N2 lỏng cho đến khi sử dụng vào các nghiên cứu tiếp theo.
2.3.3. Đo pH dịch vị dạ dày
Giấy đo pH đƣợc tẩm với nhiều chất chỉ thị màu khác nhau và hộp giấy có đính kèm bảng màu để so sánh khi đọc kết quả (Hình 6).
2.3.4. Ni cấy và phân lập chủng vi khuẩn
Hai mảnh sinh thiết dạ dày (1 mảnh lấy ở hang vị và 1 mảnh lấy ở thân vị) đƣợc lấy ra từ bình nitơ và đƣợc đặt vào trong đá khoảng 20 phút để cân bằng nhiệt độ, sau đó đƣợc nghiền kỹ trong 0,5 ml dung dịch muối sinh lý (0,9% NaCl) vô trùng. Khoảng 30 – 50 l dịch nghiền của sinh thiết đƣợc nhỏ và trải đều trên bề mặt đĩa môi trƣờng thạch. Đặt các đĩa petri vào bình Jar với một bao khí BBL GasPak Plus (BD, Mỹ) để tạo điều kiện kị khí (10% CO2) (Hình 7). Đặt bình Jar vào tủ ấm ở 370C và đọc kết quả trong vịng 48 - 72 giờ.
Mỗi khuẩn lạc có hình thù đặc trƣng đƣợc ni riêng rẽ trên các đĩa thạch khác nhau. Các đĩa nuôi đƣợc ghi tên, nguồn gốc bệnh nhân rõ ràng. Quá trình phân lập đƣợc thực hiện cho đến khi nhận đƣợc các khuẩn lạc riêng rẽ và thuần nhất .