của 27 bệnh nhân 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27
gen cagA, gen 23S rARN. PCR nhân các gen này trực tiếp từ mẫu ADN genome tách từ sinh thiết dạ dày của bệnh nhân.
Chúng tôi xem xét đồng thời nhiều gen bởi lẽ trên thực tế, rất nhiều chủng H.
pylori có thể có hoặc khiếm khuyết một số gen, nghĩa là có khả năng mẫu bệnh phẩm
chứa vi khuẩn H. pylori nhƣng vì khơng có gen nên khơng đƣợc thể hiện trên kết quả PCR. Bên cạnh đó, lại có thể có những lồi vi khuẩn khác chƣa biết cũng có chứa những gen tƣơng tự nhƣ gen của H. pylori, đồng nghĩa với việc, có sự xuất hiện của
gen nhƣng chƣa chắc sản phẩm PCR ấy đã đƣợc khuếch đại từ gen của H. pylori. Việc kết hợp nghiên cứu trên nhiều gen và thống kê sự xuất hiện đồng thời của các gen ấy trong mẫu ADN bệnh phẩm cho phép chúng tôi khẳng định chắc chắn hơn về sự xuất hiện của vi khuẩn H. pylori trong mẫu sinh thiết bệnh nhân, cũng nhƣ tỷ lệ nhiễm H. pylori ở các bệnh nhân này.
Kết quả nhân từng gen đƣợc trình bày trong bảng 2. Bệnh nhân đƣợc cho là bị nhiễm H. pylori đƣợc xác định là có chứa tất cả hoặc ít nhất là 3/4 gen nghiên cứu. Sau khi thống kê sự xuất hiện của các gen, chúng tôi xác định đƣợc tỷ lệ bệnh nhân nhiễm HP là 23/27 bệnh nhân, chiếm 85,19%.
Nhiễm H. pylori là một trong các nguyên nhân gây viêm dạ dày cấp tính chảy máu ở ngƣời. Ngồi gây bệnh, vi khuẩn H. pylori, do ức chế tiết axit dạ dày, cịn thúc đẩy q trình định cƣ của các loại vi khuẩn khác trong Microbiota dạ dày. Trong nghiên cứu của chúng tôi, các bệnh nhân nhiễm H. pylori hay mang HPstatus+ chiếm 85,19 %. Tỉ lệ này cao hơn so với kết quả trong nghiên cứu của các tác giả khác trong nƣớc. Theo Quách Trọng Đức và cộng sự (2009), tỷ lệ nhiễm H. pylori chỉ là 49,6 % [3]; còn trong nghiên cứu của GS Tạ Long và cộng sự (2010), tỷ lệ này dao động từ 61,2 đến 78,9 % [8]. Con số này cũng cao hơn so với tỷ lệ nhiễm ở các nƣớc phát triển có điều kiện kinh tế - xã hội nhƣ Ý 46,9 % [26]; Nhật Bản 47,8 % [59].
Bảng 2. Kết quả phân tích 4 gen chỉ thị của vi khuẩn H. pylori của 27 bệnh nhân
STT Mã số BN
PCR
glmM hspA cagA 23S rRNA
1 1B - + + + 2 2B - - - - 3 3B + + + + 4 4B + + + + 5 5B + + + + 6 6B - + + + 7 7B + + - + 8 8B + + + + 9 9B + + + + 10 10B - - - - 11 11B + + + + 12 12B + + + + 13 13B - - - - 14 14B + + + + 15 15B + + + + 16 16B - - - - 17 17B + + + + 18 18B + + + + 19 19B + + + + 20 20B + + + + 21 21B + + + + 22 22B + + + + 23 23B + + + + 24 24B + + + + 25 25B + + + + 26 26B + + + + 27 27B + + + +
Số ngƣời nhiễm H. pylori cao ở các bệnh nhân bị viêm dạ dày cấp tính chảy máu xác nhận vai trị gây bệnh lý của vi khuẩn, mặt khác báo động tình trạng đỏ của vệ sinh cộng đồng và vệ sinh an tồn thực phẩm cũng nhƣ tình trạng ơ nhiễm mơi trƣờng hiện nay.
3.3. PHÂN LẬP CÁC VI KHUẨN Ở ĐIỀU KIỆN KỊ KHÍ
Vi khuẩn đƣợc phân lập từ sinh thiết dạ dày của 27 bệnh nhân trong điều kiện kị khí. Để đảm bảo các khuẩn lạc nhận đƣợc là vi khuẩn phát triển từ mẫu bệnh, một đĩa mơi trƣờng máu đƣợc trải với 30 µl dịch NaCl đƣợc sử dụng làm mẫu đối chứng âm. Sau 3-5 ngày ở điều kiện kỵ khí, 23/27 (85,1%) các mẫu bệnh phẩm cho kết quả ni cấy dƣơng tính.
Bảng 3. Tỷ lệ bệnh nhân nhiễm vi khuẩn
Số bệnh nhân nhiễm vi khuẩn (n = 27) Số lƣợng Tỷ lệ
Âm tính 4 14,81%
Dƣơng tính 23 85,19%
Kết quả cho thấy, một bệnh nhân có thể (i) bị nhiễm một hay nhiều loại vi khuẩn; (ii) các khuẩn lạc đa dạng về hình thái, màu sắc, kích thƣớc, số lƣợng; (iii) các đĩa ni cấy giữa các bệnh nhân khác nhau mang các khuẩn lạc khác nhau (Hình 10).
Hình 10. Hình ảnh các khuẩn lạc vi khuẩn trên đĩa thạch máu của một số bệnh nhân
Nguyễn Văn T. 57t (A); BN Vũ Ngọc C. 34t (B); BN Nguyễn Thị H. 57t (C)
Đặc biệt, trên nhiều đĩa nuôi cấy đầu tiên còn thấy một loại khuẩn lạc màu trắng trong, nhỏ li ti nhƣ đầu mũi kim, có trƣờng hợp nhƣ những phẩy bụi bé rất khó nhận thấy (Hình 11). Bằng kinh nghiệm chúng tơi nhận thấy chúng rất giống với khuẩn lạc của Helicobacter pylori, một loại vi khuẩn cƣ trú thƣờng xuyên trong Microbiota dạ dày ngƣời [45].
Để khẳng định chúng có phải là H. pylori khơng, các phân tích bao gồm (i) test
thử Urease; (ii) nhuộm Gram trên tiêu bản; (iii) kiểm tra sự có mặt của gen 23S rARN đƣợc tiến hành. Những vi khuẩn nào có hình dấu phẩy đặc trƣng dƣới kính hiển vi, bắt màu hồng đỏ với thuốc nhuộm Gram (Hình 12); dƣơng tính với test Urease (Hình 13), và mang gen 23S rARN tƣơng đồng >98 % với gen 23 S rARN của H. pylori (Hình 14) đƣợc xác định là H. pylori. (Trình tự gen 23S rARN của các chủng H. pylori đƣợc trình bày ở Phụ lục IV). Hình 15 là một số chủng trong số 16 chủng H. pylori đƣợc phân lập ở điều kiện kị khí.
Hình 11. Hình ảnh
các khuẩn lạc
đƣợc nhận định giống với H. pylori
Hình 12. H. pylori sau khi nhuộm Gram dƣới kính hiển vi quang học
Hình 14. Sản phẩm PCR khuếch đại gen 23S rARN xác định H. pylori
(1-16): Sản phẩm PCR gen 23S rARN, (N): đối chứng âm, (D): đối chứng dƣơng
Hình 13. Kết quả thử hoạt tính Urease
bằng Helicotest
Dƣơng tính: mẫu 2, 3, 4 và 6 (màu đỏ cánh sen). Âm tính: 1 và 5 (màu vàng)
Hình 15. Các chủng H. pylori phân lập ở điều kiện kị khí
Đối với các khuẩn lạc vi khuẩn không phải H. pylori mọc đa dạng trên đĩa nhƣ đã chỉ ra ở trên, chúng tôi cũng tiến hành các bƣớc phân lập và làm sạch từng loại khuẩn lạc ở điều kiện kị khí. q trình đƣợc nhắc laị từ 3-5 lần cho đến khi nhận đƣợc chủng vi khuẩn thuần nhất, không bị nhiễm. Kết quả phân lập đƣợc 26 chủng vi khuẩn ngoài H. pylori. Các khuẩn lạc vi khuẩn mọc tốt, đồng nhất, và thể hiện rõ sự khác biệt về hình dạng, màu sắc, kích thƣớc khuẩn lạc giữa các chủng. Hình 16 là đĩa phân lập cuối cùng của một số chủng vi khuẩn.
3.4. NGHIÊN CỨU CÁC VI KHUẨN
3.4.1. Xác định Gram của các chủng phân lập
Các vi khuẩn phân lập ở điều kiện kị khí đƣợc xác định sau nhuộm Gram đa phần là Gram dƣơng (Hình17).
Hình 17. Ảnh chụp một số chủng vi khuẩn dƣới kính hiển vi Olympia
Các vi khuẩn phân lập ở điều kiện kị khí thường là loại Gram dương (số 1,2,3,5,6) chỉ có số ít là loại Gram âm (số 4)
3.4.2. Định tên vi khuẩn
Để xác định các vi khuẩn nhận đƣợc là lồi nào, chúng tơi tiến hành các bƣớc tách chiết ADN từ các chủng vi khuẩn phân lập, nhân bản toàn bộ gen 16S rARN. Sản phẩm PCR đƣợc kiểm tra trên gel Agarose 1.5 % (Hình 18), sau đó đƣợc tinh sạch và đọc trình tự gen. Trình tự 16S rARN đƣợc trình bày ở phụ lục III.
1 2 3
1 2 3 4 N P
Hình 18. Sản phẩm PCR khuếch đại từ gen 16S rARN
(1-4): Sản phẩm PCR gen 16S rARN của chủng phân lập số 1 đến chủng 4 N: đối chứng âm, P: đối chứng dƣơng
Các trình tự 16S rARN của các chủng vi khuẩn phân lập sẽ đƣợc xử lý bằng
chƣơng trình Blast trên kho dữ liệu NCBI Database để so sánh với các chủng trên ngân hàng thế giới, qua đó định tên lồi vi khuẩn. Vi khuẩn định tên có gen 16S rARN tƣơng đồng ít nhất 98% với gen 16S rARN của loài vi khuẩn đã biết. Ví dụ, một chủng vi
khuẩn đƣợc định tên là Rothia dentocariosa có gen 16S rARN giống 100% với vi
khuẩn đã biết trong quĩ gen.
Rothia dentocariosa ATCC 17931 strain ATCC 17931 16S ribosomal RNA, complete
sequence. Sequence ID: ref|NR_074568.1|Length: 1515Number of Matches: 1 Related Information
Range 1: 4 to 1510GenBankGraphicsNext MatchPrevious Match
Score Expect Identities Gaps Strand
2784 bits(1507) 0.0 1507/1507(100%) 0/1507(0%) Plus/Plus Query 1 GTTTGATTCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGAT 60 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4 GTTTGATTCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGAT 63 Query 61 GAAGCCTAGCTTGCTAGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACGTGAGTGACCTAC 120 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 64 GAAGCCTAGCTTGCTAGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACGTGAGTGACCTAC 123 16S rARN
Query 121 CTTTGACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACCAATCTCCGC 180 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 124 CTTTGACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACCAATCTCCGC 183 Query 181 ATGGGGTGTTGGTGGAAAGCGTTATGGAGTGGTTTTAGATGGGCTCACGGCCTATCAGCT 240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 184 ATGGGGTGTTGGTGGAAAGCGTTATGGAGTGGTTTTAGATGGGCTCACGGCCTATCAGCT 243 Query 241 TGTTGGTGAGGTAATGGCTTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCG 300 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 244 TGTTGGTGAGGTAATGGCTTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCG 303 Query 301 GCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTG 360 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 304 GCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTG 363 Query 361 CACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGT 420 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 364 CACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGT 423 Query 421 AAACCTCTGTTAGCATCGAAGAAGCGAAAGTGACGGTAGGTGCAGAGAAAGCGCCGGCTA 480 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 424 AAACCTCTGTTAGCATCGAAGAAGCGAAAGTGACGGTAGGTGCAGAGAAAGCGCCGGCTA 483 Query 481 ACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGC 540 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 484 ACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGC 543 Query 541 GTAAAGAGCTTGTAGGCGGTTGGTCGCGTCTGCTGTGAAAGGCTGGGGCTTAACCCTGGT 600 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 544 GTAAAGAGCTTGTAGGCGGTTGGTCGCGTCTGCTGTGAAAGGCTGGGGCTTAACCCTGGT 603 Query 601 TTTGCAGTGGGTACGGGCTAACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGC 660 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 604 TTTGCAGTGGGTACGGGCTAACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGC 663 Query 661 GGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAA 720 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 664 GGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAA 723 Query 721 CTGACGCTGAGAAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATG 780 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 724 CTGACGCTGAGAAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATG 783 Query 781 CCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGGACATTCCACGTTTTCCGCGCCGTAGCTAACG 840 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 784 CCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGGACATTCCACGTTTTCCGCGCCGTAGCTAACG 843 Query 841 CATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGG 900 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 844 CATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGG 903 Query 901 GGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAA 960 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 904 GGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAA 963 Query 961 GGCTTGACATATACTGGACTGCGTCAGAGATGGCGTTTCCCTTCGGGGCTGGTATACAGG 1020 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 964 GGCTTGACATATACTGGACTGCGTCAGAGATGGCGTTTCCCTTCGGGGCTGGTATACAGG 1023 Query 1021 TGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCG 1080 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1024 TGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCG 1083 Query 1081 CAACCCTCGTTCTATGTTGCCAGCACGTGATGGTGGGGACTCATAGGAGACTGCCGGGGT 1140 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1084 CAACCCTCGTTCTATGTTGCCAGCACGTGATGGTGGGGACTCATAGGAGACTGCCGGGGT 1143
Query 1141 CAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCA 1200 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1144 CAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCA 1203 Query 1201 CGCATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCTAA 1260 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1204 CGCATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCTAA 1263 Query 1261 AAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAG 1320 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1264 AAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAG 1323 Query 1321 TAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGT 1380 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1324 TAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGT 1383 Query 1381 CAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTGGTGGGGGGAGCCGT 1440 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1384 CAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTGGTGGGGGGAGCCGT 1443 Query 1441 CGAAGGTGGGACTGGCGATTGGGACTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCG 1500 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1444 CGAAGGTGGGACTGGCGATTGGGACTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCG 1503 Query 1501 GCTGGAT 1507 ||||||| Sbjct 1504 GCTGGAT 1510
Từ 26 chủng vi khuẩn phân lập ở điều kiện kị khí, chúng tơi đã xác định đƣợc danh tính của 13 lồi vi khuẩn và 1 chủng chƣa có tên. Bảng 4 trình bày tên của các vi khuẩn chúng tơi tìm thấy trong nghiên cứu này và tần số bắt gặp của nó ở các bệnh nhân. Một loại vi khuẩn có thể xuất hiện ở một hay nhiều bệnh nhân. Các chủng đƣợc phân lập chủ yếu thuộc chi Streptococcus và chi Bacillus, chi Rothia. Ngồi ra cịn một chủng vi khuẩn chƣa biết tên có trình tự gen 16S rARN không giống bất cứ loài nào đã biết.
Các chủng vi khuẩn thuộc họ Acinetorbacter, Mycobacterium và Sphingobacterium đƣợc phân lập từ 10 mẫu đối chứng của các bệnh nhân có niêm mạc
dạ dày hoàn toàn bình thƣờng. Khơng một chủng H. pylori nào đƣợc tìm thấy trong dạ dày của các bệnh nhân thuộc nhóm đối chứng trên.
Bảng 4. Tên các loài vi khuẩn phân lập từ bệnh phẩm STT Tên loài Tần số bắt gặp 1 Actinomyces odontolyticus 3,85 % 2 Bacillus licheniformis 7,69 % 3 Bacillus megaterium 3,85 % 4 Bacillus pumilus 3,85 % 5 Helicobacter pylori 85,19 % 6 Ochrobactrum intermedium 3,85 % 7 Rothia dentocariosa 3,85 % 8 Rothia mucilaginosa 11,54 % 9 Streptococcus infantis 3,85 % 10 Streptococcus parasanguinis 15,38 % 11 Streptococcus pneumoniae 3,85 % 12 Streptococcus rubneri 11,54 % 13 Streptococcus salivarius 23,08 % 14 unknown 3,85 %
Nhƣ chúng ta đã biết, hệ tiêu hóa ngƣời bao gồm nhiều ngăn với hệ vi sinh vật khác nhau. Số lƣợng và chủng loại các vi sinh vật trong hệ tiêu hóa tăng dần khi đi xuống phần dƣới, với số lƣợng nhiều nhất ở manh tràng, trực tràng và ít nhất ở dạ dày. Sở dĩ nhƣ vậy là bởi dạ dày là nơi có độ pH quá axit (1-2) do dịch dạ dày tiết ra, điều kiện này đƣợc coi là quá khắc nghiệt, các lồi vi sinh vật trơi rửa từ phía trên thực quản và khoang miệng cũng nhƣ từ phía dƣới ở tá tràng khơng thể xâm nhập và tồn tại trong dạ dày [43], [55], [56], [64]. Theo GS. Perlin (2013), chỉ có các vi khuẩn chịu đƣợc
axit nhƣ H. pylori hay một số vi khuẩn thuộc các chi Lactobacillus, Streptococcus là 2 chi bao gồm các loài chịu đƣợc pH thấp là có khả năng sống sót [29].
rào bảo vệ, ngăn chặn vi khuẩn làm tổ ở bề mặt lớp biểu mơ. Nhƣ vậy có thể dự đốn, một khi cấu trúc niêm mạc dạ dày bị thay đổi, độ nhớt của lớp chất nhầy giảm, suy giảm hệ miễn dịch do nhiều nguyên nhân nhƣ tuổi tác, thói quen, nhiễm H. pylori thời gian dài, sử dụng nhiều kháng sinh và thuốc điều trị làm suy giảm hệ miễn dịch... khiến niêm mạc dạ dày bị tổn thƣơng, thì khả năng bảo vệ của hàng rào miễn dịch bẩm sinh sẽ yếu đi, có thể tạo điều kiện cho sự xâm nhập và phát triển vƣợt trội của các vi khuẩn trong dạ dày.
Lý giải này trùng hợp với kết quả nghiên cứu của chúng tôi, khi nhận thấy ở các bệnh nhân ngồi nhiễm H. pylori cịn bị nhiễm một số vi khuẩn khác.
Trên thế giới cũng đã có một số nghiên cứu chứng minh sự có mặt của các vi khuẩn khác trong dạ dày của bệnh nhân bị bệnh dạ dày. Tuy nhiên ở Việt Nam, hầu nhƣ chƣa có nhiều nghiên cứu tìm kiếm các vi khuẩn khác bên cạnh H. pylori trong dạ dày ngƣời bệnh. Kết quả của chúng tôi đƣợc xem nhƣ những bằng cớ đầu tiên về hiện tƣợng này ở Việt Nam.
Các vi khuẩn phân lập từ Microbiota dạ dày của các bệnh nhân bị viêm dạ dày cấp tính chảy máu sau khi đƣợc tham khảo qua các dữ liệu trên Internet hóa ra đều là (i) các vi khuẩn kị khí tùy tiện; (ii) đƣợc nhận định là gây bệnh ở ngƣời, là các tác nhân gây nhiễm trùng cơ hội; và (iii) đa số là loại vi khuẩn Gram dƣơng. Các vi khuẩn có nguồn gốc từ khoang miệng, họng, trong đƣờng tiêu hóa, đƣờng hơ hấp, ruột... đi ngang qua dạ dày; hoặc có nguồn gốc từ môi trƣờng bên ngoài: trong đất, nƣớc, thực vật phân hủy... (Bảng 5).
Đặc biệt, chúng tôi nhận thấy 1 ca nhiễm vi khuẩn Ochrobactrum intermedium. Trong một báo cáo của Dharne M.S. và cs (2008) ở Bắc Ấn Độ, 1 trƣờng hợp bệnh nhân có hiện tƣợng xơ hóa ở lớp niêm mạc dạ dày phát hiện thấy có sự hiện diện của vi khuẩn này bên cạnh H. pylori [25].
Ta cũng có thể nhận thấy đa số các vi khuẩn là Gram dƣơng. Vi khuẩn Gram dƣơng có vơ số các hệ thống chống chịu acid. Các cơ chế phổ biến nhất là sử dụng
bơm proton (loại bỏ các proton H+, kiềm hóa mơi trƣờng bên ngồi), có hệ thống sửa chữa các đại phân tử, thay đổi màng tế bào, sản xuất các chất kiềm, thay đổi chuyển hóa... Có lẽ chính vì vậy mà chúng có thể vƣợt qua những thách thức đặt ra bởi môi trƣờng pH thấp nhƣ dịch vị và tồn tại sinh sống trong dạ dày của các bênh nhân [52].
Nhƣ vậy, ở dạ dày ngƣời bệnh, ngồi H. pylori cịn có thể bị nhiễm các vi khuẩn khác nữa. Đây là một quan sát rất quan trọng, bởi một khi các vi khuẩn cơ hội khác xâm nhập và sinh sống đƣợc trong dạ dày dựa trên nền điều kiện là niêm mạc dạ dày đã bị biến đổi và tổn thƣơng, nhiều khả năng trong số đó có cả những lồi có khả năng gây bệnh cho ngƣời, và rất có thể sẽ đóng vai trị nào đó trong bệnh lý dạ dày ngƣời.
Bảng 5. Một số đặc điểm của các vi khuẩn phân lập ở điều kiện kị khí từ Microbiota dạ dày của ngƣời bệnh bị viêm dạ dày cấp tính chảy máu STT Tên vi khuẩn Gram Loại vi khuẩn
Nơi cƣ trú Khả năng gây bệnh
1 Actinomyces
odontolyticus
(+) Kị khí tùy tiện Microbiota khoang miệng, họng (21), (28)
Gây nhiễm trùng toàn thân, nhƣ gây viêm mủ màng phổi (49), viêm phúc mạc (53), nhiễm trùng huyết (21)
2 Bacillus
licheniformis
(+) Kị khí tùy tiện Microbiota đất Là tác nhân gây bệnh cơ hội ở ngƣời, liên quan đến
nhiễm khuẩn huyết, ngộ độc thực phẩm mà đặc trƣng bởi tiêu chảy (18), có trong các thực phẩm nhƣ sữa, rau quả, thịt… ôi thiu.
3 Bacillus
megaterium
(+) Kị khí tùy tiện Microbiota đất Gây nhiễm trùng cơ hội
4 Bacillus pumilus (+) Kị khí tùy tiện Microbiota đất, nƣớc,
khơng khí và thực vật phân hủy
Gây nhiễm độc thức ăn cho ngƣời, có thể sản xuất độc tố (18), (17).
5 Helicobacter
pylori
(-) Vi hiếu khí Microbiota dạ dày Gây các bệnh dạ dày, đặc biệt là ung thƣ dạ dày ở ngƣời.
intermedium cũng có khả năng sản xuất urease (42).
7 Rothia
dentocariosa
(+) Kị khí tùy tiện Microbiota khoang miệng Tác nhân gây viêm nội tâm mạc bán cấp, đặc biệt là
ở các bệnh nhân mắc bệnh về răng miệng và tiềm ẩn bệnh về van tim (58), (15).
8 Rothia
mucilaginosa
(+) Kị khí tùy tiện Microbiota khoang miệng Là loài gây bệnh cơ hội và là tác nhân gây nhiễm