Kết quả thiết kế đoạn gen ltb-gp

Một phần của tài liệu Lê thị thanh k20 sinh học thực nghiệm (Trang 61 - 63)

B: Trình tự axit amin.

3.1.5. Kết quả thiết kế đoạn gen ltb-gp

Theo thiết kế ban đầu, trong trình tự đoạn gen gp5m có hai vị trí cắt của

enzyme giới hạn NcoI nằm giữa 2 đầu gen m. Do đó, đoạn gen ltb-gp5 sẽ đƣợc tạo

ra bằng cách cắt vector pBT-gp5m với enzyme giới hạn NcoI để loại bỏ gen m. Sản phẩm cắt đƣợc điện di kiểm tra trên gel agarose 1% cho kết quả nhƣ Hình 3.8.

Hình 3.8: Ảnh điện di sản phẩm cắt vector pBT-ltb-gp5m với enzyme giới hạn

NcoI trên gel agarose 1%. 1: vector pBT-ltb-gp5m không cắt, 2: sản phẩm cắt vector pBT- ltb-gp5m với enzyme NcoI; M:Thang chuẩn ADN 1kb (Geneshun).

Vector pBT-ltb-gp5m có kích thƣớc khoảng 4300 bp nên khi cắt hoàn toàn với enzyme NcoI sẽ tạo ra hai băng lần lƣợt khoảng 600 bp và 3700 bp. Tuy nhiên ảnh điện di cho thấy sản phẩm cắt thu đƣợc gồm 3 băng, ngồi 2 băng có kích thƣớc đúng nhƣ dự kiến còn một băng mờ ở giữa. So sánh với kết quả điện di vector dạng chƣa cắt (giếng 1) cho thấy đây chính là phần vector pBT-ltb-gp5m chƣa bị cắt. Băng đậm ở phía trên cùng (giếng 2) chính là phần cịn lại của vector pBT-ltb-gp5m sau khi đã bị cắt bỏ gen m. Do vậy chúng tôi tiến hành tinh sạch băng ADN này từ bản gel agrose. Sau khi tinh sạch, đoạn ADN này lại đƣợc tự nối trở lại sử dụng enzyme nối T4 ADN ligase. Sản phẩm của phản ứng nối sau đó đƣợc biến nạp vào tế bào vi khuẩn E. coli DH 5α. Tuy nhiên sản phẩm ADN tinh sạch từ bản gel có thể bị lẫn vector pBT-ltb-gp5m chƣa bị cắt. Do đó, plasmid trong các khuẩn lạc mọc trên đĩa thạch sau khi biến nạp đƣợc chúng tôi kiểm tra bằng phƣơng pháp PCR sử dụng cặp mồi M13 F/M13 R. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR trên gel agarose 1% chúng tơi thu đƣợc kết quả nhƣ Hình 3.9.

1 2 M

500 bp 4000 bp 4000 bp

Hình 3.9: Ảnh điện di sản phẩm PCR kiểm tra kết quả thiết kế vector pBT-ltb-gp5

trên gel agarose 1%. 1-5: Kí hiệu các khuẩn lạc; M: Thang chuẩn ADN 1kb (Thermo Scientific).

Kết quả điện di cho thấy ở tất cả các dòng kiểm tra sản phẩm PCR đều lên băng với kích thƣớc khoảng 1000 bp đúng nhƣ tính tốn. Chứng tỏ chúng tơi đã tạo thành công vector pBT-ltb-gp5 từ vector pBT-ltb-gp5m.

Nhƣ vậy, bằng các kỹ thuật sinh học phân tử nhƣ PCR, cắt ADN bằng enzyme giới hạn, tách dịng ... chúng tơi đã thiết kế thành công các đoạn gen ltb- gp5m, ltb-gp5, ltb-gp3. Đồng thời dịng hóa thành cơng các đoạn gen này vào vector

tách dòng pBT. Các vector pBT-ltb-gp5m, pBT –ltb-gp5, pBT ltb-gp3 đƣợc lƣu giữ trong chủng vi khuẩn E. coli DH5α sẵn sàng cho các thí nghiệm tiếp theo.

Một phần của tài liệu Lê thị thanh k20 sinh học thực nghiệm (Trang 61 - 63)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(81 trang)