Kiểm tra chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm
- Từng mẻ gặt đơn chứa vi rút cần đƣợc chuẩn độ hiệu vi rút cúm CCID50 (liều vi rút gây hủy hoại 50% tế bào) hoặc tạo đám hoại tử (PFU) tùy từng chủng cúm và từng hãng sản xuất.
- Nhận dạng: Xác định các kháng nguyên đặc hiệu bằng phản ứng khuyếch tán miễn dịch hoặc ứng chế ngƣng kết hồng cầu sử dụng các kháng thể đặc hiệu.
- Xác định hàm lƣợng kháng nguyên HA: Hàm lƣợng kháng nguyên HA trong bán thành phẩm và bán thành phẩm cuối cùng đƣợc xác định bằng phƣơng pháp miễn dịch khuyếch tán vòng tròn đơn (SRID). Nếu là vắcxin cúm có chất hấp phụ, thử nghiệm xác định hàm lƣợng kháng nguyên HA phải tiến hành trƣớc khi bổ sung chất hấp phụ.
- Thử nghiệm về các nguyên liệu tồn dƣ: các nhà sản xuất phải chứng minh các nguyên liệu tồn dƣ khác sử dụng trong sản xuất phải giảm qua quá trình tinh chế bằng phƣơng pháp chạy SDS-PAGE nhƣng vấn phải giữ nguyên đặc tính kháng nguyên bằng phƣơng pháp kính hiển vi điện tử.
- Hàm lƣợng Protein tổng số đƣợc xác định bằng phƣơng pháp Lorry. Hàm lƣợng Protein tổng số không đƣợc vƣợt quá 6 lần hàm lƣợng kháng nguyên HA. Đối với vắcxin cúm mùa hiện nay, theo quy định hàm lƣợng Protein tổng số khơng đƣợc vƣợt q 100µg cho một chủng vi rút cho một liều tiêm cho ngƣời và tổng số ba chủng khơng vƣợt q 300 µg cho một liều tiêm cho ngƣời.
Kiểm tra chất lượng kháng nguyên vắcxin thành phẩm
- Thử nghiệm nhận dạng: Thử nghiệm nhận dạng đƣợc thực hiện với ít nhất 1 lọ cho mỗi loạt vắcxin.
- Hàm lƣợng kháng nguyên HA: Yêu cầu hàm lƣợng kháng nguyên HA đối với cúm mùa hiện nay là 15 µg/chủng/liều tiêm .
- Thử nghiệm an toàn chung: Mỗi loạt thành phẩm đều phải thử nghiệm về độc tính khơng mong muốn (độc tính bất thƣờng) sử nghiệm các thử nghiệm an tồn chung trên chuột lang và chuột nhắt trằng theo yêu cầu của Kiểm định Quốc gia.
- Thử nghiệm chất gây sốt: Mỗi loạt thành phẩm đều phải thử nghiệm về chất gây sốt trên thỏ trƣởng thành theo tiêu chuẩn của Kiểm định Quốc gia.
- Thử nghiệm công hiệu: Mỗi loạt thành phẩm đều phải đánh giá đáp ứng miễn dich trên chuột và khỉ theo tiêu chuẩn của Kiểm định Quốc gia.
Chƣơng 2 - VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP