a) Đất; b) Rơm; c) Than bùn; d) Bã thải trồng nấm sò; e) Chủng nấm mốc phân hủy lignin được tuyển chọn (Penicillium chrysogenum)
- Đất bề mặt được lấy trực tiếp từ vườn trồng rau màu ở Hà Đông, Hà Nội (ở độ sâu từ 0 - 20 cm). Sau khi mang về được xử lý bằng cách để khơ trong khơng khí ở nhiệt độ phịng rồi rây qua rây có đường kính lỗ 3 mm để đồng nhất mẫu. Bảo quản đất trong túi nilon sạch, bao kín ở nhiệt độ 4 - 10oC đến khi sử dụng.
- Rơm rạ được thu từ đồng ruộng đất chiêm trũng ở Ninh Bình. Rơm rạ phải chọn loại đã thật sự khô, sau khi mang về phịng thí nghiệm được xử lý sơ bộ để loại bỏ các tạp chất như túi nilon, sỏi, đá rồi sau đó cắt nhỏ rơm rạ thành những đoạn ngắn hơn có kích thước 2 - 3 cm để quá trình ủ được thực hiện dễ dàng và hiệu quả hơn trong việc khi hấp phụ và phân hủy HCBVTV của Biomix.
- Bã thải trồng nấm sò trắng (Pleurotus pulmonarius) được thu từ khu vực trồng nấm tại Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam - Bắc Từ Liêm - Hà Nội. Sau
khi mang về, bã nấm sò trắng được xử lý sơ bộ, sau đó nghiền nhỏ rồi rây qua rây có kịch thước lỗ 3 mm. Bảo quản trong túi nilon sạch, hút hết khơng khí, bao kín lại và để trong tủ ấm ở 4 - 10oC đến khi sử dụng.
- Than bùn sau khi mua về thì được bảo quản trong túi nilon sạch, bao kín và để trong tủ ấm ở nhiệt độ 4 - 10oC đến khi sử dụng.
- Nấm mốc phân hủy lignin (Penicillium chrysogenum) sau khi được tuyển chọn thì cho vào mơi trường PDA dịch thể với các thành phần bao gồm:
Khoai tây : 200 gam Glucose : 20 gam Agar : 20 gam Nước cất : 1000ml pH : 5 - 5,5.
Sau khi cấy, nuôi lắc 120 vòng/phút trong vòng 6 - 7 ngày ở 30°C. Thu sinh khối trong bình và tiến hành bổ sung vào Biomix với tỷ lệ 5% thành phần Biomix (tương ứng với 125 ml). Trộn đều để nấm có thể phát triển đều trong Biomix.
2.2.3.2. Phối trộn tạo các Biomix
- Chuẩn bị ba thùng xốp loại vừa có kích thước trong 45 x 32 x 28 (cm) và ba nắp thùng hoặc tấm nilon để đậy, tấm đập sẽ được làm thủng vài lỗ nhỏ tạo khơng khí cho Biomix cũng như tạo điều kiện cho VSV hiếu khí sinh trưởng và phát triển.
- Các thành phần nguyên liệu được đưa vào theo thứ tự rơm, bã thải trồng nấm sò (hoặc than bùn đối với Biomix 3), đất sau đó phối trộn đều để chuẩn bị tạo các Biomix.
- Khối lượng của một loại Biomix là 2,5 kg.
+ Biomix 1: 0,625 kg đất : 1,25 kg rơm : 0,625 kg bã thải trồng nấm sị : 125 ml dịch ni cấy chủng nấm mốc phân hủy lignin được tuyển chọn.
+ Biomix 2: 0,625 kg đất : 1,25 kg rơm : 0,625 kg bã thải trồng nấm sò. + Biomix 3: 0,625 kg đất : 1,25 kg rơm : 0,625 kg than bùn.
- Cân thành phần mỗi nguyên liệu của mỗi Biomix như trên, cho vào các thùng xốp đã được chuẩn bị từ trước, trộn đều các nguyên liệu với nhau. Sau đó, tưới nước
bằng cách phun sương để làm ẩm đến độ ẩm 60% cho cả ba Biomix và bảo quản ở nhiệt độ phòng. Các Biomix sau khi chuẩn bị xong (Hình 2.5).