2.4.1. Phương pháp đo trắc quang
Nguyên tắc của phương pháp đo quang là dựa vào hàm lượng ánh sáng đã bị hấp thu bởi chất thu để tính được nồng độ của chất hấp thu.
Thực nghiệm
Học Quốc Gia Hà Nội.
Xây dựng đường chuẩn Rhodamin B
Cân 0.02g Rhodamin B cho vào bình định mức 1lit. Định mức bằng nước cất đến vạch. Dung dịch vừa pha là dung dịch đầu cho quá trình xây dựng đường chuẩn. Hút lần lượt 2.5ml, 5ml, 10ml, 15ml, 20ml, 25ml, 30ml dung dịch trên và định mức thành 100ml bằng nước cất vào bình 100ml thu được các dung dịch Rhodamin B có nồng độ 0.5ppm, 1ppm, 2ppm, 3ppm, 4ppm, 5ppm, 6ppm. Tiến hành đo mật độ quang các dung dich vừa pha ở bước sóng λ = 553nm.
2.4.2. Phương pháp phổ hấp thụ electron (Ultraviolet - visible spectroscopy, UV-VIS)
Phương pháp này dựa trên bước nhảy của electron từ orbitan có mức năng lượng thấp lên orbitan có mức năng lượng cao khi bị kích thích bằng các tia bức xạ trong vùng quang phổ tử ngoại và khả kiến có bước sóng nằm trong khoảng 200 nm – 800 nm.
Theo cơ học lượng tử quỹ đạo electron của các phân tử chia thành: Orbitan không liên kết n
Orbitan liên kết σ, π
Orbitan phản liên kết σ*, π*
Mức năng lượng của các orbitan này khác nhau, khi bị kích thích (hấp thụ năng lượng) có sự dịch chuyển năng lượng của các electron trong phân tử.
Mỗi bước chuyển năng lượng (ΔE) tương ứng với sự hấp thụ các tia sáng có bước sóng khác λ nhau. c h E Trong đó: h: Hằng số Planck, h = 6,625.10-34 J.s c: vận tốc ánh sáng, c = 3.1010 cm/s
Phương pháp này được áp dụng để xác định các dạng chất khác nhau và trạng thái tồn tại của chúng.
Thực nghiệm
Phổ hấp thụ electron được ghi trên máy UV 1650 PC, Shimadu tại phịng Phân Tích trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên – Đại Học Quốc Gia Hà Nội. Tiến hành đo trong vùng quang phổ tử ngoại và khả kiến (200-800nm), mẫu ở thể lỏng.
2.4.3. Phương pháp đo sắc ký lỏng (LC)
Sắc ký lỏng là phương pháp tách sắc ký các chất dựa trên sự phân bố khác nhau của chúng giữa hai pha không trộn lẫn, trong đó pha động là một chất lỏng chảy qua pha tĩnh chứa trong cột.
Sắc ký lỏng được tiến hành chủ yếu dựa trên cơ chế hấp phụ, phân bố khối lượng, trao đổi ion, loại trừ theo kích thước hoặc tương tác hố học lập thể. Phương pháp này xác định được nhiều loại cấu tử đặc biệt là các chất có khối lượng phân tử lớn.
Thực nghiệm:
Phương pháp được thực hiện trên thiết bị phân tích HPLC model LC 20~A, Shimadzu tại viện Dinh Dưỡng Quốc Gia.
CHƯƠNG 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN