2.1. ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU.
- Viên nang Faclacin 2 của Công ty Cổ phần dƣợc phẩm Trung ƣơng I – Pharbaco với các đặc điểm sau:
+ Cloxacillin (dạng cloxacillin natri) : 250 mg + Amoxicillin (dạng Amoxicillin trihydrat) : 250 mg
+ Tá dƣợc: tinh bột sắn, bột talc, magnesi stearat vừa đủ cho 1 viên.
- Chất chuẩn nghiên cứu
+ Amoxicillin trihydrat (VKNTW): Hàm lƣợng: 98,40% Độ ẩm: 13,20%. + Cloxacillin Natri (VKNTW): Hàm lƣợng: 98,30% Độ ẩm: 4,37%. - Dung mơi và hố chất khác.
+ Nƣớc cất 2 lần đƣợc xử lí loại bỏ ion. + Methanol dùng cho HPLC.
+ Kali dihydrophosphat (KH2PO4) loại tinh khiết phân tích. 2.2. THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU
- Máy quang phổ hai chùm tia Unicam UV 300 (ThermoSpectronic) đƣợc kết nối với máy tính (chạy trên hệ điều hành Windows XP) với phần mềm chuyên dụng Vision 32.
Chế độ đo:
+ Start Lambda: 200 nm - Stop Lambda: 400 nm
+ Data Mode : Absorbance
+ Band width : 1,5nm
+ Data Interval: Very high resolution
- Cuvet thạch anh bề dày 1cm.
- Máy sắc kí lỏng hiệu năng cao Agilent 1100 series DAD. Cột Apollo C18 (150mm4,6 mm, 5m).
- Máy lọc nƣớc Maxima Ultra pure water (ELga). - Cân phân tích Sartorius, độ đọc 0,0001g
- Máy siêu âm Ultrasonic LC 60 H.
- Các dụng cụ: bình định mức (25; 50; 100; 200; 250 ml), pipet chính xác: (1; 5; 10; 20; 25 ml), cốc có mỏ, đũa thuỷ tinh, phễu lọc, giấy lọc băng xanh.
2.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
2.3.1. Xây đựng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời AMO và CLO bằng các phƣơng pháp quang phổ UV-VIS và sắc ký lỏng hiệu năng cao phƣơng pháp quang phổ UV-VIS và sắc ký lỏng hiệu năng cao
Các phƣơng pháp quang phổ
- Chọn bƣớc sóng định lƣợng thích hợp để loại bỏ đƣợc ảnh hƣởng của các chất gây cản trở.
- Chọn khảo sát khoảng nồng độ có sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ và tín hiệu đo.
- Kiểm tra độ lặp lại của phƣơng pháp.
- Kiểm tra độ đúng của phƣơng pháp.
Phƣơng pháp phân tích đối chứng: Phƣơng pháp HPLC. - Tiến hành phân tích trên thiết bị HPLC các điều kiện sau:
+ Thẩm định điều kiện sắc ký.
+ Kiểm tra độ lặp lại của phƣơng pháp.
+ Kiểm tra độ đúng của phƣơng pháp.
2.3.2. Ứng dụng để định lƣợng đồng thời AMO và CLO trong viên nang Faclacin 2 Faclacin 2
- Tiến hành định lƣợng AMO và CLO trong cùng một mẫu bằng các phƣơng pháp:
+ Quang phổ tử ngoại UV-VIS (phổ đạo hàm, phổ đạo hàm tỉ đối) + Sắc ký lỏng hiệu năng cao
- So sánh kết quả của các phƣơng pháp đo quang đối với phƣơng pháp HPLC và rút ra nhận xét.
2.3.3. Xử lý kết quả thực nghiệm [3]
Sự phụ thuộc tuyến tính của nồng độ với tín hiệu đo (trong các phƣơng pháp đo quang) và diện tích pic (trong phƣơng pháp HPLC) đƣợc thiết lập bằng phƣơng pháp bình phƣơng tối thiểu với hệ số tƣơng quan của đƣờng chuẩn 0,990.
So sánh độ chính xác của các phƣơng pháp bằng test F và so sánh các giá trị trung bình bằng test t với khoảng tin cậy 95%.
Giá trị trung bình: n X X n i i 1 Độ lệch chuẩn: 2 n i i 1 X X S n 1 Phƣơng sai: n X X S n i i 1 2 2
Độ lệch chuẩn tƣơng đối: 100
X S RSD