2.1 PHƢƠNG PHÁP CHIẾT VÀ PHÂN TÁCH CÁC HỢP CHẤT TỪ NGUYÊN LIỆU THỰC VẬT NGUYÊN LIỆU THỰC VẬT
2.1.1 Phƣơng pháp chiết
Phương pháp chiết rắn - lỏng
Nguyên liệu mẫu thực vật đƣợc chiết hai pha rắn - lỏng với MeOH ở nhiệt độ phòng.
Phương pháp chiết hai pha lỏng
Phần chiết MeOH đƣợc phân ố giữa H2O và các dung môi hữu cơ khác nhau nhằm làm giàu các lớp chất theo độ phân cực tăng dần.
2.1.2 Các phƣơng pháp phân tích, phân tách và phân lập sắc ký
Sắc ký lớp mỏng
Phƣơng pháp sắc k lớp mỏng (TLC) là một phƣơng pháp hiện đang đƣợc sử dụng rất rộng rãi trong các ngành khoa học hoá học, sinh học, hoá dƣợc với nhiều mục đích khác nhau do các đặc tính ƣu việt của nó: độ nhạy cao, lƣợng mẫu phân tích nhỏ (thƣờng từ 1 đến 100 10ˉ6
g), tốc độ phân tích nhanh, kỹ thuật phân tích dễ thực hiện. Phƣơng pháp sắc k lớp mỏng (TLC) có thể đƣợc dùng để phân tích định tính hay định lƣợng hoặc kiểm tra độ tinh khiết của các hợp chất cũng nhƣ hỗ trợ cho các phƣơng pháp sắc k cột để xác định và kiểm soát điều kiện phân tách.
Sắc ký cột
Sắc k cột thƣờng (CC) đƣợc thực hiện dƣới trọng lực của dung môi trên silica gel theo cơ chế sắc k hấp phụ và đƣợc sử dụng để phân tách các phần chiết, phân lập và tinh chế các hợp chất.
Sắc k cột nhanh (FC) đƣợc thực hiện dƣới áp lực khơng khí nén để dung mơi rửa giải đi qua cột nhanh hơn.
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
Hình 3.1. Sắc k cột điều chế
Sắc kí cột tinh chế Mini-C đƣợc sử dụng dƣới chế độ khơng khí nên để tinh chế lƣợng nhỏ các mẫu chất.
Phƣơng pháp kết tinh lại
Phƣơng pháp này đƣợc sử dụng để tách và tinh chế chất rắn. Việc tinh chế chất rắn ằng kết tinh dựa trên sự khác nhau về độ tan của hợp chất mục tiêu và của tạp chất trong dung môi hoặc một hệ dung môi đã chọn ở cùng một nhiệt độ hoặc ở các nhiệt độ khác nhau.
2.2 CÁC PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CẤU TRÚC
Các phƣơng pháp phổ là các phƣơng pháp hiện đại và hữu hiệu nhất để xác định cấu trúc của các hợp chất hữu cơ.
Các phƣơng pháp phổ đƣợc sử dụng để xác định cấu trúc các hợp chất trong Luận văn này ao gồm:
- Phổ khối lƣợng ion hóa phun bụi điện tử (ESI-MS); - Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton (1H-NMR); - Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân cacbon-13 (13C-NMR); - Phổ DEPT 90 và 135.
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22