CHƢƠNG 4 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT ĐƢỢC PHÂN LẬP
4.4.10 Squami nA (ASE5.2a) và Squamin B (ASE5.2b)
Hợp chất ASE5.2 đƣợc phân lập từ phần chiết etyl axetat (ASE) dƣới dạng ột vơ định hình màu trắng, Rf = 0,55 (TLC, sillica gel, CH2Cl2/MeOH 9:1, v:v).
ASE5.2a/ASE5.2b
Các dữ kiện phổ 1
H-NMR của ASE5.2 cho nhiều thơng tín hữu ích về các
đơn vị amino acid của chất peptid này khi đƣợc so sánh với phổ của các chất peptid đƣợc phân lập từ một số loài Annona [8, 14, 21, 44]. Sự xuất hiện một số tín hiệu
kép trên các phổ 1
H-NMR và 13C-NMR cho thấy có một cặp đồng phân cấu hình của chất peptid ASE5.2, một hiện tƣợng có thể gặp với các peptid có nhiều gốc
amino acid [44]. Trong khoảng từ δH 0,76 đến 1,40 là các tín hiệu của 6 nhóm metyl ao gồm một nhóm metyl dạng triplet và 5 nhóm metyl khác ở dạng dou let, từ δH 1,80 đến 2,80 là các tín hiệu của các nhóm metylen và metin, từ δH 3,40 đến 5,20 là các nhóm metin liên kết với oxy và từ δH 6,60 đến 7,10 là cụm hai nhóm metin v ng thơm tƣơng tác với nhau. Sự phân tích kỹ lƣỡng các phổ 1
H-NMR kết hợp với các giá trị độ chuyển dịch hóa học trên phổ 13
C-NMR và tính ội trên phổ DEPT cho phép xác định các gốc amino acid trong chất peptid ASE5.2. Gốc Ile của hai đồng
phân xuất hiện tƣơng ứng ở δH 0,76 (3H, t, J = 6,5 Hz, Ile- CH3), 0,88 (3H, dd, J = 7,0 Hz, 2,5 Hz, Ile-' CH3) và 0,76 (3H, t, J = 6,5 Hz, Ile- CH3), 0,90 (3H, dd, J =
7,5 Hz, 2,5 Hz, Ile-' CH3), 1,80-2,55 (3H, m, Ile- H, 2Ile- H) và 4,10-4,40 (1H, m, Ile- H). Hai gốc Ala xuất hiện ở δH 0,99 (3H, d, J = 7,5 Hz, Ala- CH3) và
4,10-4,40 (1H, m, Ala- H). Hai gốc Val đƣợc nhìn thấy ở δH 1,03 (3H, d, J = 7,0
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
và 4,70 (1H, t, J = 7,5 Hz, Val- H). Hai gốc Thr ở δH 1,40 (3H, d, J = 7,5 Hz, Thr- CH3) và 5,06 (1H, m, Thr- H). Hai gốc Tyr cộng hƣởng ở δH 6,70 (2H, d , J = 8,0 Hz, Tyr- H), 7,0 (2H, t , J = 8,0 Hz, Tyr- H) và δH 6,70 (2H, d , J = 8,0 Hz, Tyr- H), 7,01 (2H, t , J = 8,0 Hz, Tyr- H), 3,40-3,80 (2H, m, 2Tyr- H) và 4,82
(1H, m, Tyr- H). Sự khác iệt của hai nhóm S(O)CH3 ở δH 2,38 (3H, s) và 2,51
(3H, s) là đặc iệt đáng chú , vì điều này cho phép xác định sự tồn tại của hai đồng phân cấu hình nhƣ đƣợc mơ tả cho squamin A và squamin B trong tài liệu [44]. Các nhóm metyl này thuộc về hai gốc amino acid OMet (methionine sulfoxide); các nhóm khác của gốc amino acid này cộng hƣởng ở δH 4,10-4,40 (1H, m, OMet- H) và 1,80-2,55 (4H, m, 2OMet- H, 2OMet- H). Ngoài 6 gốc amino acid này c n có hai gốc amino acid khác là Gly với nhóm metylen xuất hiện ở δH 3,40-3,80 (2H, m, 2Gly- H) và Pro ở δH 1,80-2,55 (4H, m, 2Pro- H, 2Pro- H) và 4,10-4,40 (3H, m, Pro- H, 2Pro- H). Sự xác định các gốc amino acid này đƣợc khẳng định ởi các tín hiệu cac on-13 tƣơng ứng. Sau khi các gốc amino acid đƣợc xác định thì cấu trúc của ASE5.2a và ASE5.2b đã đƣợc xác định dựa trên sự so sánh phổ NMR với của các chất octapeptid từ các loài Annona cho thấy sự phù hợp lần lƣợt với các
chất squamin A (cyclic-Gly-Thr-Val-Ala-Ile-Pro-OMet-Tyr) và squamin B (cyclic- Gly-Thr-Val-Ala-Ile-Pro-OMet-Tyr) [44]. Do các gốc amino acid đƣợc cho là tiếp nhận cấu hình L, sự khác iệt có thể do cấu hình của gốc OMet. Hai octapeptid này đã lần đầu tiên đƣợc phân lập từ cây A. squamosa của Trung Quốc [44].
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
KẾT LUẬN
Luận văn thạc sĩ "Nghiên cứu các hợp chất acetogenin và các thành phần khác từ hạt cây Na (Annona squamosa L., Annonaceae)" đã đƣợc thực hiện nhằm xác định các thành phần hóa học, đặc biệt là các acetogenin, trong hạt Na (Annona
squamosa L.) của Việt Nam. Hạt Annona squamosa đã đƣợc xác định là một nguồn
các acetogenin có hoạt tính chống ung thƣ với cơ chế tác dụng mới; tuy nhiên, cho đến nay chƣa có các nghiên cứu hệ thống xác định các thành phần này trong hạt cây Na của Việt Nam. Luận văn đã hoàn thành các nhiệm vụ chiết tách, phân tích và phân tách sắc ký các phần chiết hữu cơ từ hạt Na và nghiên cứu cấu trúc các hợp chất đƣợc phân lập.
Luận văn đã đạt đƣợc các kết quả nghiên cứu mới sau:
1. Đã xây dựng đƣợc quy trình chiết acetogenin từ hạt Na (Annona squamosa L.) Việt Nam theo hai phƣơng pháp chiết và phân bố các hợp chất hữu cơ vào các phần chiết n-hexan (AS1H 5,57% và AS2H 5,89%), diclometan (AS1D 2,51% và
AS2D 0,48%) và etyl axetat (AS1E 0,30% và AS2E 0,10%). Kết quả cho thấy cả
hai phƣơng pháp đã chiết đƣợc nhóm các acetogenin phân cực trung bình vào các phần chiết diclometan.
2. Đã phân tích TLC các chất có trong các phần chiết diclometan và etyl axetat cho phân tích định tính các acetogenin và lựa chọn hệ dung môi phù hợp cho sắc kí điều chế gradient.
3. Bằng các phƣơng pháp sắc ký điều chế đã phân lập đƣợc chín hợp chất acetogenin và sterol từ phần chiết diclometan theo phƣơng pháp chiết 1 (AS1D) và hai hợp chất amid và peptid từ phần chiết etyl axetat gộp của hai phƣơng pháp (ASE). Quy trình phân lập acetogenin từ phần chiết diclometan theo phƣơng pháp chiết 2 (AS2D) cũng cho một số thành phần acetogenin tƣơng tự.
4. Đã xác định đƣợc cấu trúc các hợp chất đƣợc phân lập bằng các phƣơng pháp phổ hiện đại. Các chất acetogenin đƣợc phân lập là một chất aetogenin mono-THF:
solamin (AS1D3.0) và 8 chất acetogenin bis-THF: squamocin J (AS1D3.1),
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
và 4-dehydroxyannonin VIII (AS1D3.7), squamocin (AS1D5.6), hỗn hợp hai chất
annonin IV và annonin VIII (AS1D7.2), annonin XVI (AS1D7.4); cùng với 2
sterol glucosid: hỗn hợp -sitosterol 3-O--D-glucopyranosid và stigmasterol 3-
O--D-glucopyranosid (AS1D10); một chất amid: N-trans-caffeoyl-tyramin
(ASE3.4.4); và hỗn hợp 2 chất octapeptid squamin A và squamin B (ASE5.2). Đã sử dụng các mơ hình hóa học lập thể dựa trên các độ chuyển dịch hóa học proton và cacbon-13 để xác định hóa lập thể tƣơng đối của các acetogenin.
5. Đây là lần đầu tiên các acetogenin nêu trên đã đƣợc xác định trong hạt cây Na
Việt Nam. Các chất acetogenin solamin, 4-dehydroxyannonin IV, 4-dehydroxyannonin VIII, chất amid N-trans-caffeoyl-tyramin và hỗn hợp 2 chất
octapeptid squamin A và squamin B đã lần đầu tiên đƣợc phân lập từ Annona squamosa.
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mẫn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2006), Cây thuốc và động vật
làm thuốc ở Việt Nam, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội.
2. Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất Bản Y học, Thành phố Hồ Chí Minh.
3. Phạm Hồng Hộ (2001), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất bản Trẻ - Thành phố Hồ
Chí Minh.
4. Đồn Thị Mai Hƣơng, Triệu Quý Hùng, Phạm Văn Cƣờng, Nguyễn Văn Hùng, Marc Litaudon, Pascal Retailleau, Isabelle Schmitz-Afonso, Châu Văn Minh (2013), Áp dụng phƣơng pháp phổ khối lƣợng trong việc xác định cấu trúc của acetogenin từ quả cây Giác đế đài to Goliothalamus macrocalyx ban họ Na
(Annonaceae), Tạp chí Hóa học, 51 (6ABC), tr. 31-35.
5. Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội.
Tiếng Anh
6. Alali F. Q., Liu X. X., McLaughlin J. L. (1999), Annonaceous Acetogenins: Recent Progress, J. Nat. Prod., 62 (3), pp. 504-540.
7. Araya H. (2004), Studies of Annonaceous tetrahydrofuranic acetogenins from
Annona squamosa L. seeds, Bull. Nat. Inst. Argo-Environ. Sci., 23, pp. 77-149.
8. A. Wele, Y. Zhang, I. Ndoye, J. -P. Brouard, J. -L. Pousset, B. Bodo (2004), A cytotoxic cyclic heptapeptide from the seeds of Annona cherimola, J. Nat. Prod., 67, pp. 1577-1579.
9. Araya H., Sahai M., Singh S., Singh A. K., Yoshida M., Hara N., Fujimoto Y. (2002), Squamocin-O (1) and squamocin-O (2), new adjacent bis-
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
tetrahydrofuran acetogenins from the seeds of Annona squamosa, Phytochemistry, 61 (8), pp. 999-1004.
10. Ba Ndob I. B. , P. Champy, C. Gleye, G. Lewin, B. Akemdengué (2009), Annonaceous acetogenins: precursors from the seeds of Annona squamosa, Phytochemistry Lett., 2, pp. 72-76.
11. Craig Hopp D., Alali F. Q., Gu Z. M., McLaughlin J. L. (1998), Mono-THF ring Annonaceous acetogenins from Annona squamosa, Phytochemistry, 47 (5), pp. 803-809.
12. Chavan M. J., Wakte P. S., Shinde D. B. (2011), Analgesic and anti-
inflammatory activities of 18-acetoxy-ent-kaur-16-ene
from Annona squamosa L. bark. Inflammopharmacology, 19 (2), pp. 111-115. 13. Chen Y., Xu S. S., Chen J. W., Wang Y., Xu H. Q., Fan N. B., Li X. (2012),
Anti-tumor activity of Annona squamosa seeds extract containing annonaceous acetogenin compounds, J. Ethnopharmacol., 142 (2), pp. 462-466.
14. C. M. Li, N. H. Tan, Q. Mu, H. L. Zheng, X. J. Hao, Y. Wu, J. Zhou (1997), Cyclopeptide from the seeds of Annona squamosa, Phytochemistry, 45, pp. 521- 523.
15. Fujimoto Y., Eguchi T., Kakinuma K., Ikekawa N., Sahai M., Gupta Y. K. (1988), Squamocin, a new cytotoxic bis-tetrahydrofuran containing acetogenin
from Annona squamosa, Chem. Pharm. Bull., 36 (12), pp. 4802-4806.
16. Gleye C., Duret P., Laurens A., Hocquemiller R., Cavé A. (1998), cis-
Monotetrahydrofuran acetogenins from the roots of Annona muricata, J. Nat. Prod., 61 (5), pp. 576-579.
17. Hopp D. C., Zeng L., Gu Z., McLaughlin J. L. (1996), Squamotacin: an annonaceous acetogenin with cytotoxic selectivity for the human prostate tumor cell line (PC-3), J. Nat. Prod., 59 (2), pp. 97-99.
18. Hopp D. C., Zeng L., Gu Z. M., Kozlowski J. F., McLaughlin J. L. (1997), Novel mono-tetrahydrofuran ring acetogenins, from the bark of Annona squamosa, showing cytotoxic selectivities for the human pancreatic carcinoma
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
19. Hopp D. C., Alali F. Q., Gu Z. M., McLaughlin J. L. (1998), Mono-THF ring
annonaceous acetogenins from Annona squamosa, Phytochemistry, 47 (5), pp.
803-809.
20. Hopp D. C., Alali F. Q., Gu Z. M., McLaughlin J. L. (1998), Three new
bioactive bis-adjacent THF-ring acetogenins from the bark
of Annona squamosa, Bioorg. Med. Chem., 6 (5), pp. 569-575.
21. H. Morita, Y. Sato, J. Kobayashi, Cyclosquamosins A-G (1999), Cyclic peptides from the seeds of Annona squamosa, Tetrahedron, 55, pp. 7509-7518. 22. Khaled Nabih Rashed, Randy Chi Fai Cheung, Tzi Bun Ng (2013), Bio-active
phytoconstiennts from non-polar extracts of Diospyros lotus stems and
demonstration of antifungal activity in the extracts, World Journal of Pharmaceutical Scienses., 1 (4), pp. 99-108.
23. Li X. H., Hui Y. H., Rupprecht J. K., Liu Y. M., Wood K. V., Smith D. L., Chang C. J., McLaughlin J. L. (1990), Bullatacin, bullatacinone, and squamone, a new bioactive acetogenin, from the bark of Annona squamosa, J. Nat. Prod., 53 (1), pp. 81-86.
24. Lieb F., Nonfon M., Wachendorff-Neumann U., Wendisch D. (1990), Annonacins and Annonastatin from Annona squamosa, Planta Med., 56 (3), pp. 312-316.
25. Liaw C. C., Yang Y. L., Chen M., Chang F. R., Chen S. L., Wu S. H., Wu Y. C.
(2008), Mono-tetrahydrofuran annonaceous acetogenins
from Annona squamosa as cytotoxic agents and calcium ion chelators. J. Nat. Prod., 71 (5), pp. 764-771.
26. Mukhlesur R. M., Parvin S., Ekramul H. M., Ekramul I. M., Mosaddik M. A. (2005), Antimicrobial and cytotoxic constituents from the seeds of Annona squamosa, Fitoterapia, 76 (5), pp. 484-489.
27. Morita H., Sato Y., Chan K. L., Choo C. Y., Itokawa H., Takeya K., Kobayashi J. (2000), Samoquasine A, a benzoquinazoline alkaloid from the seeds of Annona squamosa, J. Nat. Prod., 63 (12), pp. 1707-1708.
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
28. Nonfon M., Lieb F., Moeschler H., Wendish D. (1990), Four annonins from
Annona squamosa, Phytochemistry, 29 (6), pp. 1951-1954.
29. Pandey N., Barve D., Phytochemical and pharmacological review on Annona squamosa Linn, International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences, 2 (4), pp. 1404-1412.
30. Panda S., Kar A. (2007), Antidiabetic and antioxidative effects of Annona squamosa leaves are possibly mediated through quercetin-3-O- glucoside, Biofactors, 31 (3-4), pp. 201-210.
31. Rieser M. J. (1996), Five novel mono-tetrahydrofuran ring acetogenins from the seeds of Annona muricata, J. Nat. Prod., 59 (2), pp. 100-108.
32. Sahai M., Singh S., Singh M., Gupta Y. K., Akashi S., Yuji R., Hirayama K., Asaki H., Araya H., Hara N., Eguchi T., Kanikuma K., Fujimoto Y. (1994), Annonaceous acetogenins from the seeds of Annona squamosa. Adjacent bis-
tetrahydrofuranic acetogenins, Chem. Pharm. Bull., 42 (6), pp. 1163-1174. 33. Sun L., Zhu H., Gan L., Mo J., Feng F., Zhou C.(2012), Constituents from the
bark of Annona squamosa and their anti-tumor activity, China Journal of Chinese Material Medical (Zhongguo Zhong Yao Za Zhi), 37 (14), pp. 2100-
2104.
34. Vohora S. B., Kumar I., Naqvi S. A. (1975), Phytochemical, pharmacological, antibacterial and anti-ovulatory studies on Annona squamosa, Planta Med., 28
(1), pp. 97-100.
35. Wu Y. C., Hung Y. C., Chang F. R., Cosentino M., Wang H. K., Lee K. H. (1996), Identification of ent-16β,17-dihydroxykauran-19-oic acid as an anti-
HIV principle and isolation of the new diterpenoids annosquamosins A and B from Annona squamosa, J. Nat. Prod., 59 (6), pp. 635-637.
36. Yang X. J., Xu L. Z., Sun N. J., Wang S. C., Zheng (1992), Studies on the chemical constituents of Annona squamosa, Yao Xue Xue Bao (Acta Pharmaceutica Sinica), 27 (3), pp. 185-190.
Nguyễn Quang Hợp Cao học Hóa hữu cơ – K22
37. Yang Y. L , Chang F. R., Wu C. C., Wang W. Y., Wu Y. C. (2002), New ent-
kaurane diterpenoids with anti-platelet aggregation activity from Annona squamosa, J. Nat. Prod., 65 (10), pp. 1462-1467.
38. Yang Y. L., Chang F. R., Hwang T. L., Chang W. T., Wu Y. C. (2004), Inhibitory effects of ent-kauranes from the stems of Annona squamosa on
superoxide anion generation by human neutrophils, Planta Med., 70 (3), pp.
256-258.
39. Yu J. G., Luo X. Z., Sun L., Li D. Y., Huang W. H., Liu C.Y. (2005), Chemical constituents from the seeds of Annona squamosa, Yao Xue Xue Bao (Acta Pharmaceutica Sinica, 40 (2), pp. 153-158.
40. Yu-Liang Yang , Fang-Rong Chang , Chin-Chung Wu , Wei-Ya Wang , and Yang-Chang Wu (2002), New ent-Kaurane Diterpenoids with Anti-Platelet Aggregation Activity from Annona squamosa, Journal of Natural Products., 65 (10), pp.1462-1467.
41. Y. C. Chen, F. R. Chang, H. F. Yen, Y. C. Wu (1998), Amides from stems of annona cherimola, Phytochemistry, 49, pp. 1443-1447.
42. Wu Y. C. (2006), New research and development on the Formosan Annoncaeous plants, in Studies in Natural Products Chemistry, ed. Atta-ur-
Rahman, Elsevier B.V., Amsterdam.
43. Yang H. J., Li X., Zhang N., Chen J. W., Wang M. Y. (2009), Two new cytotoxic acetogenins from Annona squamosa, J. Asian Nat. Prod. Res., 11 (3), pp. 250-256.
44. Yang Y. L., Hua K. F., Chuang P. H., Wu S. H., Wu K. Y., Chang F. R., Wu Y. C. (2008), New cyclic peptides from the seeds of Annona squamosa L. and their anti-inflammatory activities, J. Agric. Food Chem., 56 (2), pp. 386-392.
Trang Web