Chƣơng 1 : TỔNG QUAN
2.5 Kỹ thuật kháng sinh đồ
2.5.1 Phƣơng pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán [5], [27], [38], [39]
Nguyên lý: Các loại kháng sinh khác nhau đã được tẩm trong các khoanh giấy sẽ khuyếch tán trong đĩa thạch và kìm hãm sự phát triển của chủng vi khuẩn trên bề mặt thạch. Dựa vào đường kính vịng ức chế để đánh giá mức độ nhạy cảm hay đề kháng của kháng sinh.
Các bước tiến hành
- Chủng vi khuẩn thuần nhất được cấy trên môi trường nuôi cấy khác nhau (thạch thường, thạch máu) tùy thuộc từng loại vi khuẩn trong 18-24h
- Pha huyền dịch bằng cách lấy 3 đến 5 vi khuẩn thuần pha vào dung dịch nước muối 0,85% và lắc đều bằng máy vortex, so độ đục chuẩn
- Dùng tăm bông vô trùng thấm ướt huyền dịch vừa pha (độ ẩm vừa phải), ria đều vi khuẩn lên mặt đĩa thạch Muleller - Hinton (là môi trường chuẩn để tiến hành kỹ thuật kháng sinh đồ)
- Đặt khoanh giấy kháng sinh vào đĩa bằng kim nhọn, khoảng cách các khoanh khoảng 20-25 mm và cách thành đĩa từ 10-15 mm
- Ủ ấm 35-370C/24h trong tủ ấm thường. Riêng phế cầu phải ủ trong tủ ấm có khí trường 5-10% C02
Nhận định kết quả:
- Đo đường kính vịng ức chế bằng thước đo milimet
- So sánh với bảng giới hạn dành cho chủng mẫu để kiểm tra chất lượng xét nghiệm. Chỉ khi kết quả chủng mẫu đạt yêu cầu mới đọc kết quả trên chủng phân lập từ bệnh nhân
- Đánh giá mức độ nhạy cảm của KS ở 3 mức độ + Nhạy cảm (susceptible): S
+ Trung gian (intermediate): I + Đề kháng (resistant): R
Phiên giải kết quả theo hướng dẫn của CLSI
2.5.2 Phương pháp E-test [39], [44], [59]
Nguyên lý: Sử dụng thanh giấy chứa các nồng độ kháng sinh nhằm xác định nồng độ ức chế tối thiểu sự phát triển của vi khuẩn
Tiến hành
- Để đĩa thạch và băng giấy chứa các nồng độ kháng sinh ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.
- Lấy 4 hoặc 5 khuẩn lạc vào môi trường nước muối 0.9% và ủ ấm 350C trong 2-8h để đạt độ đục 0.5 Mc Farland
- Lắc đều bằng máy vortex, so độ đục chuẩn tương đương 0.5 Mc Farland (1.5 x 108 CFU/ml).
Bước 2: Ria huyền dịch và đặt băng giấy
- Nhúng tăm bông vào ống đựng huyền dịch, ép nhẹ lên thành ống rồi ria toàn bộ lên mặt thạch.
- Dùng panh đặt băng giấy E-test lên mặt thạch
- Đặt băng giấy lên trên mặt thạch với nồng độ kháng sinh cao nhất ở gần cạnh của đĩa petri. Đối với đĩa có đường kính 90mm, có thể đặt 1 hoặc 2 băng giấy
- Loại bỏ các bóng khí của băng giấy trên mặt thạch bằng cách dùng panh ấn nhẹ nhàng lên băng giấy.
- Khơng thay đổi vị trí của băng giấy E-test sau khi đã đặt trên mặt thạch. Nếu đặt ngược băng giấy có thể dùng panh lật nhẹ nhàng và đặt lại.
Bước 3: Ủ ấm
- Lật ngược đĩa thạch và ủ ấm 16-20h ở 350C (không chồng quá 5 đĩa trong tủ ấm)
Bước 4: Đọc và diễn giải kết quả
- Mở nắp và đọc đĩa nơi có nguồn sáng.
- Giá trị MIC được đọc dựa vào điểm tiếp xúc giữa vịng ức chế vi khuẩn (hình elip) với điểm tiếp xúc thấp nhất của băng giấy E-test trên mặt thạch.
+ Nhận định kết quả MIC bằng E-test Penicillin với S. suis theo tiêu chuẩn của viện nghiên cứu tiêu chuẩn hóa lâm sàng và xét nghiệm Hoa Kỳ (CLSI)
+ Nhạy cảm: MIC ≤ 0,12 µg/ml + Trung gian: MIC = 0,23-2 µg/ml + Đề kháng: MIC ≥ 4 µg/ml