Hệ số tƣơng quan hồi qui tuyến tính trong khoảng nồng độ từ 5-200 µg/kg là R=0,99998039 cho thấy có sự tƣơng quan tuyến tính rõ rệt
Phƣơng trình hồi qui tuyến tính: y=188,648 x+ 114,048 Kiểm tra độ chệch của các điểm chuẩn cho kết quả bảng 3.13
Nồng độ thực 5 10 20 40 60 80 100 200
Kết quả đo 5,09 10,87 20,30 41,20 57,55 78,99 102,56 196,21
Độ chệch (%) 1,8 8,7 1,5 3,0 4,1 1,3 2,6 1,9
Theo tiêu chuẩn EC/657/2002 độ chệch cho phép <15% , nhƣ vậy các điểm chuẩn có độ chệch trong khoảng từ 1,3 – 8,7% <15% cho thấy đƣờng chuẩn có độ tin cậy đáp ứng yêu cầu của các tiêu chuẩn.
Nhƣ vậy khảo sát khoảng tuyến tính 5-200 µg/kg, cho kết quả tƣơng quan tuyến tính rõ rệt, độ chệch đáp ứng các yêu cầu của tiêu chuẩn, do vậy chọn khoảng làm việc trong khoảng từ 5-200 µg/kg trùng với khoảng tuyến tính đã khảo sát.
3.3.5. Độ chính xác của phƣơng pháp
Phân tích 12 mẫu thêm chuẩn lặp lại ở 2 nồng độ 20 ppb và 50 ppb, phân tích trong điều kiện lặp lại (phân tích trong một khoảng thời gian ngắn, trên cùng một thiết bị phân tích của một phƣơng pháp phân tích và do một ngƣời làm). Đánh giá độ lặp lại thơng qua tính tốn hệ số biến thiên CV%, độ đúng thông qua hệ số thu hồi và so sánh với bảng giá trị yêu cầu theo phụ lục F của AOAC. Bảng 3.14 và 3.15 là kết quả phân tích lặp lại của 3 chất tetracycline, oxytetracycline và chlotetracycline.
Bảng 3.14 Độ lặp lại, thu hồi của phƣơng pháp tại nồng độ 20 µg/kg, n=12 đối với từng chất (TC,OTC và CTC)
Chất phân tích Kết quả trung bình Xtb Hệ số biến thiên CV (%) Hệ số thu hồi R(%) TC 17,51 4,27 81,60 – 95,10 OTC 18,59 3,49 88,10 – 98,30 CTC 16,90 5,26 81,40 – 91,00
Theo phụ lục F của AOAC 2016, tại nồng độ 20 µg/kg CV% phải nhỏ hơn 21 %, qua bảng 3.7 -CV% đối với 3 chất trong khoảng 3,49 – 5,26% nhỏ hơn 21 % cho thấy độ lặp lại của phƣơng pháp ở nồng độ 20 µg/kg rất tốt
Cũng theo yêu cầu yêu cầu của phụ lục này, ở nồng độ 20 µg/kg hệ số thu hồi nằm trong khoảng 60 – 115 % . Theo kết quả thu đƣợc từ bảng 3.7 nhận thấy đối với nhóm chất 3 kháng sinh nằm trong khoảng 81,40 – 98,30% nằm trong yêu cầu cho phép.
Tại nồng độ 20 µg/kg phƣơng pháp cho kết quả có độ chính xác phù hợp với các u cầu hiện hành.
Bảng 3.15 Độ lặp lại, thu hồi của phƣơng pháp tại nồng độ 50 µg/kg, n=12đối với từng chất (TC, OTC, CTC)
Chất phân tích Kết quả trung bình Xtb Hệ số biến thiên CV (%) Hệ số thu hồi R(%) TC 47,74 5,39 88,30 - 103,12 OTC 45,03 4,39 85,02 – 95,08 CTC 47,41 3,49 90,44 – 99,94
Theo phụ lục F của AOAC 2016, tại nồng độ 50 µg/kg CV phải nhỏ hơn21 %, qua bảng 3.8 CV% đối với 3 chất trong khoảng 3,49 – 5,39 % nhỏ hơn 21 % cho thấy độ lặp lại của phƣơng pháp ở nồng độ 50 µg/kg rất tốt. Cũng theo yêu cầu yêu cầu của phụ lục này, ở nồng độ 50 µg/kg hệ số thu hồi nằm trong khoảng 60 – 115 % . Theo kết quả thu đƣợc từ bảng 3.7 nhận thấy đối với nhóm chất 3 kháng sinh nằm trong khoảng 85,02 – 103,12 % nằm trong yêu cầu cho phép.
Tại nồng độ 50 µg/kg phƣơng pháp cho kết quả có độ chính xác phù hợp với các yêu cầu hiện hành.
Qua khảo sát độ lặp lại của phƣơng pháp tại 3 nồng độ 5 µg/kg, 20 µg/kg, 50 µg/kg cho thấy kết quả lặp lại, thu hồi của phƣơng pháp rất tốt. Phƣơng pháp có độ chính xác phù hợp để phân tích 3 kháng sinh TC, OTC, CTC.
3.3.6.Đánh giá kết quả phân tích mẫu so sánh liên phòng
Sử dụng mẫu chuẩn (mẫu thịt) so sánh là mẫu đƣợc gửi từ đơn vị tổ chức thử nghiệm so sánh liên phòng là viện kiểm nghiệm quốc gia (đƣợc tổ chức vào tháng 8/2017, khối lƣợng khoảng 100 gam). Phân tích lặp lại 6 lần do số lƣợng mẫu khơng có nhiều, sau đó tính kết quả trung bình phân tích của 6 lần lặp so với giá trị thực đƣợc qui cho để tính độ chệch. Bảng 3.16 thể hiện kết quả phân tích với mẫu chuẩn so sánh.
Bảng 3.16 Kết quảphân tích 3 chất TC,OTC và CTC trong mẫu chuẩn so sánh Chất Chất phân tích Kết quả phân tích (µg/kg) Kết quả trung bình (µg/kg) Nồng độ mẫu chuẩn so sánh (µg/kg) Độ chệch (%) L1 L2 L3 L4 L5 L6 TC 30,56 32,98 29,98 34,67 38,27 36,87 33,87 36,86 8,11 OTC 39,78 40,32 39,98 39,88 41,23 41,56 40,46 45,33 10,74 CTC 30,25 29,33 32,32 31,78 34,32 31,29 31,55 35,88 12,07 Theo phụ lục F của AOAC 2016, tại ngƣỡng nồng độ 35 - 46 ppb, độ chệch phải nhỏ hơn 15%. Kết quả phân tích cho thấy độ chệch nằm trong khoảng từ 8.11 – 12.07% nhỏ hơn 15% . Do vậy kết quả phân tích hồn tồn phù hợp với qui định 3.3.7. Độ đặc hiệu/chọn lọc của phƣơng pháp
Đánh giá độ dặc hiệu/chọn lọc của phƣơng pháp thông qua so sánh kết quả phân tích giữa mẫu trắng và mẫu trắng thêm chuẩn hỗn hợp nồng độ 10 ppb. Kết quả thu đƣợc qua Hình 3.10 phổ khối của mẫu trắng và Hình 3.11 phổ khối của mẫu trắng thêm chuẩn 10 ppb