1.3.1 .Thủy phân arabinoxylan thành các monosaccharide
1.4. Các nghiên cứu tinh sạch và xác định khối lượng phân tử của arabinoxylan
arabinoxylan
Arabinoxylan được tạo ra từ ngũ cốc có khối lượng phân tử thay đổi phụ thuộc vào phương pháp xác định khối lượng phân tử. Các nghiên cứu đã cho thấy AX của lúa mì được chiết bằng nước có khối lượng phân tử khoảng 65-66 kDa khi được phân tích bằng phương pháp lắng kết tủa, trong khi đó nếu phân tích bằng phương pháp sắc ký lọc gel, khối lượng phân tử lớn hơn nhiều từ 800-5.000 kDa, 70-1.000 kDa. AX của lúa mạch đen có khối lượng phân tử khoảng 519-770 kDa khi phân tích bằng phương pháp sắc ký lọc gel cao áp [31]. Vì thế để xác định chính xác khối lượng phân tử của AX là điều không dễ dàng. Phương pháp phổ biến nhất được sử dụng trong các nghiên cứu trên thế giới là phương pháp HPSEC [18, 53, 57].
Dervilly và tập thể [18] đã tinh sạch AX hịa tan trong nước từ dịch chiết thơ bằng cách xử lý với enzyme bền nhiệt α-amylase và protease để loại bỏ tinh bột và protein và được tủa hai lần với ethanol 80% rồi xử lý với ethanol 100% và acetone trước khi được sấy khơ. AX sau đó được phân đoạn theo các nồng độ ethanol khác nhau từ 20 đến 70%, và được xử lý với enzyme lichenase, β-glucosidase và amyloglucosidase để loại bỏ các β-glucan và tinh bột cịn sót lại. Các phân đoạn tủa cồn được xử lý và rửa chiết qua cột Sephacryl S500 HR. Shiiba và tập thể [52] đã sử dụng cột sắc ký DEAE-Sepharose CL-6B để tinh sạch hemicellulose hòa tan trong nước, mẫu qua cột được thẩm tích trong đệm Tris-HCl 100 mM trước khi được sắc ký qua cột Sephacryl S-200. Khối lượng phân tử của AX cám mì được xác định bằng hệ thống SE-HPLC với cột Waters Ultrahydrogel 1000 và hệ các chất chuẩn của Shodex có khối lượng phân tử khác nhau. Rao và tập thể [53] đã tinh sạch polysaccharide qua cột Sepharose CL-4B, sau đó mẫu được cho qua cột E- 1000, và xác định khối lượng phân tử bằng phương pháp HPSEC.
Luận văn Thạc sĩ Khoa học Ngô Thị Huyền Trang
Watanabe và tập thể [57] đã nghiên cứu AX được tách từ vỏ trấu của lúa gạo, AX được tinh sạch qua cột lọc gel Sepharose CL-6B và rửa chiết với đệm NaOH 0,5 M, sau đó AX được kiểm tra độ sạch và sự đồng nhất bằng phương pháp siêu li tâm và điện di vùng. Kết quả thu được AX có kích thước khoảng 15 kDa. Kích thước của các oligosaccharide sau khi được thủy phân bằng endoxylanase được kiểm tra bằng phương pháp sắc ký lọc gel sử dụng cột Bio-Gel P-2. Các phân đoạn rửa chiết được làm khơ và sau đó được kiểm tra bằng sắc ký giấy. Dervilly và tập thể [43] đã dùng 2 cột sắc ký Shodex OH-pax SB HQ 804 và Shodex OH-pax SB HQ 805, rửa chiết bằng dung dịch NaNO3 50 mM, NaN3 0,02 % [18] hoặc sử dụng các cột OH-pax 806 M, OH-pax SB-6 để xác định khối lượng phân tử của mẫu bằng phương pháp HPSEC.
Luận văn Thạc sĩ Khoa học Ngô Thị Huyền Trang