2.4.1. Phương pháp phân tích phổ hấp thụ hồng ngoại FT- IR
Nguyên tắc: Phƣơng pháp phổ hồng ngoa ̣i FT-IR dƣ̣a trên sƣ̣ tƣơng tác của các tia điê ̣n tƣ̀ miền hồng ngoa ̣i (400 - 4000 cm-1) với các phân tƣ̉ cần nghiên cƣ́u . Quá trình tƣơng tác đó có thể dẫn đến sự hấp thụ năng lƣợng , có liên quan chặt chẽ đến cấu trúc của các phân tƣ̉ , do đó phổ FT - IR đƣợc dùng để nghiên cƣ́u cấu trúc các chất.
Thƣ̣c nghiê ̣m: Mẫu trong nghiên cƣ́u này đƣợc xác đi ̣nh theo kỹ thuâ ̣t ép viên với KBr theo tỷ lê ̣ 1mg mẫu/100mg KBr trên máy Impact -410(Đức) tại Viện Hóa Học, Viê ̣n Khoa Ho ̣c và Công nghê ̣ Viê ̣t Nam , trong vùng 400 - 4000 cm-1 ở nhiê ̣t đơ ̣ phòng.
2.4.2. Phương pháp phân tích sắc ký khí GC – MS
Nguyên tắc: Phƣơng pháp GC/MS là phƣơng pháp kết hợp giữa phƣơng pháp sắc ký khí và khối phổ. Phƣơng pháp này dùng để phân tích các hợp chất hữu cơ.
GC/MS cho biết đƣợc chính xác cơng thức cấu tạo của hợp chất cần phân tích thơng qua các mảnh ion của khối phổ và các đỉnh peak của phép phân tích sắc ký khí.
Thực nghiệm: Mẫu đƣợc tiến hành đo trên hệ thống sắc ký khí khối phổ Evolution GC/MS (Đức) tại trung tâm Môi trƣờng, trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội. Mẫu đƣợc tiến hành đo tại nhiệt độ 250C, áp suất 100psi, thời gian phân tích 35 phút, tốc độ dịng 0,5 mL/phút, lƣợng mẫu bơm 5µL.
2.4.3. Phương pháp phân tích sắc ký lỏng LC – MS
Nguyên tắc: Phƣơng pháp LC-MS là sự kết hợp của sắc ký lỏng (LC) để tách tinh khiết các chất lỏng khó bay hơi khơng thể tách đƣợc bằng phƣơng pháp sắc ký khí, dùng để phân tích hỗn hợp các chất và tìm ra chất cần phân tích, phần khối phổ (MS) mơ tả các hợp phần riêng lẻ bằng cách mô tả số khối.
Thực nghiệm: Mẫu đƣợc tiến hành đo trên máy LC-MS: Agilent 1260 Series Single Quadrupole LC/MS Systems kèm đầu dò UV ở 280 nm tại phịng Hoạt chất sinh học, Viện hóa sinh biển - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam với chƣơng trình chạy mẫu nhƣ sau:
Pha động sử dụng hệ dung môi: ACN/H2O với gradient đƣợc thiết lập:
Thời gian (min) % H2O % CAN
0 97 3
10 97 3
25 0 100
- Lƣợng mẫu bơm: 5 µL. - Tốc độ dịng: 0,5 mL/phút. - Thời gian phân tích: 25 phút.
- Hệ thống LC/MS đƣợc kết nối với phần mềm Agilent OpenLAB Control Panel. Khí nitơ đƣợc bơm với tốc độ dịng 5,0 L/phút, áp suất đầu phun đạt 60 psi, nhiệt độ làm khô đạt 250oC. Chế độ bắn mảnh phổ khối lựa chọn ESI ở mode postive và ESI mode negative.
2.4.4. Phương pháp phân tích sự phân bố kích thước hạt
Nguyên tắc: Phân tích kích thƣớc ha ̣t dƣ̣a trên nguyên lý tán xa ̣ ánh sáng đô ̣ng học (DLS). Dƣ̣a vào đă ̣c tính vâ ̣t lý của hê ̣ mẫu , dải hạt đo đƣợc tƣ̀ 0.3 nm- 0.8 m Giới ha ̣n dƣới bi ̣ ảnh hƣởng bởi nồng đô ̣, mẫu tán xa ̣ ma ̣nh hay yếu và sƣ̣ có mă ̣t của mô ̣t số ha ̣t kích thƣớc lớn không mong muốn . Giới ha ̣n trên bi ̣ ảnh hƣởng bởi mâ ̣t đô ̣ của ha ̣t vì DLS đƣợc tính tốn dựa trên chuyển động Brown , không phu ̣ thuô ̣c vào tro ̣ng lƣợng ha ̣t , do đó phổ phân bố kích thƣớc ha ̣t dùng để đánh giá kích thƣớc ha ̣t của vâ ̣t liê ̣u.
Thực nghiệm : Phân bố kích thƣớc ha ̣t của mẫu đƣợc xác đi ̣nh trên thiết bi ̣ Zetasizer-Nano ZS của hãng Malvern - UK bằng phƣơng pháp tán xa ̣ laser đô ̣ng . Mẫu đƣợc đo tại Viện Khoa học Vật liệu- Viê ̣n Khoa ho ̣c và Công nghê ̣ Viê ̣t Nam.
2.4.5. Phương pháp sử dụng kính hiển vi điện tử quét (SEM)
Kính hiển vi điện tử quét (SEM) là một loại kính hiển vi điện tử có thể tạo ra ảnh với độ phân giải cao của bề mặt mẫu vật bằng cách sử dụng một chùm điện tử (chùm các electron) hẹp quét trên bề mặt mẫu để xác định hình ảnh bề mặt của mẫu. Địa điểm đo mẫu: phòng A5 nhà A2 Viện khoa học Vật liệu-Viện Hàn lâm Khoa học.
Nguyên lý hoạt động: việc phát các chùm điện tử trong SEM cũng giống nhƣ việc tạo ra chùm điện tử trong kính hiển vi điện tử truyền qua, tức là điện tử đƣợc phát ra từ súng phóng điện tử (có thể là phát xạ nhiệt, hay phát xạ trƣờng,...), sau đó đƣợc tăng tốc. Tuy nhiên, thế tăng tốc của SEM thƣờng chỉ từ 10 kV đến 50 kV vì sự hạn chế của thấu kính từ, việc hội tụ các chùm điện tử có bƣớc sóng quá nhỏ vào một điểm kích thƣớc nhỏ sẽ rất khó khăn. Điện tử đƣợc phát ra, tăng tốc và hội tụ thành một chùm điện tử hẹp (cỡ vài trăm A0 đến vài nm) nhờ hệ thống thấu kính từ, sau đó qt trên bề mặt mẫu nhờ các cuộn quét tĩnh điện. Ngồi ra, độ phân giải của SEM cịn phụ thuộc vào tƣơng tác giữa vật liệu tại bề mặt mẫu vật và điện tử. Khi điện tử tƣơng tác với bề mặt mẫu vật, sẽ có các bức xạ phát ra, tạo ảnh trong SEM và các phép phân tích đƣợc thực hiện thơng qua việc phân tích các bức xạ này.
2.4.6. Phương pháp nghiên cứu độ ổn định nhiệt
Các mẫu vi nhũ tƣơng của tinh dầu Bạch đàn và dịch chiết từ bã hạt Jatropha đƣợc chuẩn bị đựng trong các lọ, bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 2 tháng và ở nhiệt độ 540C trong 2 tuần, theo quy định của Tổ chức Lƣơng thực và Nông nghiệp Liên hiệp Quốc (FAO - the Food and Agricultural Organization), nhƣ một tiêu chuẩn đánh giá cho các sản phẩm hóa chất nơng nghiệp cho thấy sự ổn định trong khí hậu nhiệt đới. Mẫu đƣợc bảo quản trong tủ ổn định nhiệt tại phịng thí nghiệm Địa chất Dầu khí, nhà B1, trƣờng Đại học Mỏ - Địa chất.
2.4.7. Phương pháp khảo sát trong bảo quản thóc giống của vi nhũ tương tinh dầu Bạch đàn và dịch chiết từ bã hạt Jatropha
Các thí nghiệm khảo sát hiệu quả của vi nhũ tƣơng tinh dầu Bạch đàn và dịch chiết từ bã hạt Jatropha trong bảo quản thóc giống đƣợc thực hiện tại Bộ môn Thuốc, Cỏ dại và Môi trƣờng - Viện Bảo vệ Thực vật trong thời gian từ tháng 6 – 11/2017. Chế phẩm vi nhũ tƣơng tinh dầu Bạch đàn và dịch chiết từ bã hạt Jatropha đƣợc nghiên cứu là mẫu M1 với thành phần 10% tinh dầu Bạch đàn, 53% nƣớc, 15% Tween 80, 12% PG, 10% dịch chiết từ bã hạt Jatropha.
2.4.7.1. Thí nghiệm đánh giá nhanh hiệu quả xua đuổi mọt thóc
Phƣơng pháp: Thóc đƣợc xử lý kỹ để đảm bảo khơng cịn nguồn cơn trùng gây hại trƣớc khi thí nghiệm. Chế phẩm đƣợc trộn đều ở các công thức với các liều lƣợng sau đó đặt riêng rẽ phần thóc trong chậu nhựa. Cơng thức đối chứng khơng xử lý. Thả mọt thóc ở vị trí trung tâm chậu. Đậy kín nắp chậu để tránh mọt bị ra bên ngồi.
Theo dõi: số mọt xâm nhập vào các công thức sau xử lý 1, 3, 5, 7, 10, 14 ngày và đánh giá khả năng xua đuổi của chế phẩm bằng cách so sánh mọt xâm nhập vào thóc đối chứng và xử lý.
2.4.7.2.Thí nghiệm đánh giá nhanh hiệu quả phịng chống mọt thóc
* Đã nhiễm mọt
Phƣơng pháp: Thóc đƣợc cho vào các hộp nhựa nắp kín với các cơng thức khác nhau. Thả mọt đục hạt nhỏ vào các công thức. Sau 3 ngày, quan sát thấy sự
gây hại của mọt thì tiến hành xử lý thuốc theo các liều lƣợng cho các công thức. Đối chứng không xử lý.
Theo dõi: số mọt sống ở các công thức sau xử lý 1, 3, 5, 7, 10, 14 ngày. * Tiếp xúc với mọt
Phƣơng pháp: Trộn đều chế phẩm với thóc theo các liều lƣợng khác nhau sau đó đƣợc cho vào các hộp nhựa có nắp kín. Thả mọt vào các công thức. Đối chứng không xử lý.
Theo dõi: số mọt sống ở các công thức sau xử lý 1, 3, 5, 7, 10, 14 ngày.
2.4.7.3.Thí nghiệm phun qt lên vỏ bao bì chứa nơng sản thóc
Phƣơng pháp: Thóc ở mỗi công thức và đƣợc bảo quản riêng trong các bao. Bên ngoài bao đƣợc quét chế phẩm với các liều lƣợng khác nhau. Đối chứng không xử lý. Nguồn gốc giống lúa: Tẻ thơm TH6.
Theo dõi: số mọt sống sau xử lý 1, 2, 3, 4, 5, 6 tháng. Các bao đổ ra trộn đều và lấy 5 điểm. Đếm số mọt sống, chết ở các công thức. Sau đó trả lại thóc và mọt vào bao.
2.4.7.4. Thí nghiệm đánh giá độ nảy mầm của hạt giống sau khi bảo quản thóc
Phƣơng pháp: Chế phẩm đƣợc trộn đều với thóc với liều lƣợng khác nhau sau đó đƣợc cho vào các hộp nhựa có nắp kín. Công thức đối chứng không xử lý.
Theo dõi: sau 1, 2, 3, 4, 5, 6 tháng. Ở các công thức lấy 100 hạt ngẫu nhiên để thử độ nảy mầm của hạt giống. Ngâm ủ hạt giống theo phƣơng pháp thông thƣờng. Sau 08 ngày đếm số hạt mọc thành cây mầm bình thƣờng để xác định khả năng nảy mầm của hạt.
2.4.7.5. Xử lý số liệu .
Khả năng phòng trừ mọt đục hạt nhỏ của chế phẩm đƣợc tính theo cơng thức Abbott (1925): K (%) = {[(Ca-Ta)/Ca] ×100}.
Trong đó: K: khả năng phòng trừ
Ca: là số mọt sống ở cơng thức đối chứng sau thí nghiệm Ta: là số mọt sống ở cơng thức xử lý thuốc sau thí nghiệm
Chƣơng 3- KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN