simiarum)
3.2.1. Xử lý mẫu thực vật và chiết tách
Mẫu vỏ cây Quần đầu khỉ tươi được thái nhỏ, phơi khô, sấy ở 50-55oC trong 2-3h, sau đó xay thành bột thu được 1,8 kg. Nguyên liệu dưới dạng bột (1,8 kg) được ngâm chiết với MeOH bốn lần (5 lít/lần, 24h/lần). Gộp các dịch chiết lại và cất loại bớt dung mơi dưới áp suất giảm đến cịn khoảng 1/15 thể tích ban đầu. Pha lỗng dịch chiết metanol đã cơ đặc bằng nước cất theo tỉ lệ 1/1. Sau đó tiến hành chiết phân bố lần lượt với các dung môi n-hexan, etyl axetat, mỗi dung môi chiết 3 lần (500ml/lần). Gộp dịch chiết của 3 lần và làm khô bằng Na2SO4 khan. Cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được các cặn chiết tương ứng là n-hexan (7,5 g), etyl axetat (13,6 g), metanol (16,5 g).
Sơ đồ 3.5. Quá trình chiết xuất vỏ cây Quần đầu khỉ (Polyalthia simiarum)
Bột vỏ cây khô (1,8 kg)
Ngâm chiết với MeOH (4 lần, 24h/lần)
Dịch Metanol
1. Cất loại MeOH xuống còn 1/15V 2. Pha loãng bằng nước cất
3.
Dịch MeOH - H2O
1. Chiết phân bố với n-hexan 2. Chiết phân bố với EtOAc
3. Làm khô dịch chiết, cất loại dung môi 4. Cặn n-hexan (PVH; 7,5 g) Cặn EtOAc (PVE; 13,6 g) Cặn MeOH (PVM; 16,5 g)
Hàm lượng cặn n-hexan, etyl axetat và metanol tương ứng là: 0,42%,
0,75% và 0,92%.
Cặn n-hexan (PVH; 7,5 g) được phân tách sơ bộ bằng phương pháp sắc ký
cột trên chất hấp phụ silicagel thường với hệ dung môi rửa giải gradient
n-hexan/axeton (0→100%) thu được các phân đoạn từ VH1-VH5.
Phân đoạn VH1 được tinh chế qua cột silicagel pha thường với hệ dung môi rửa giải là n-hexan/axeton (100:0, 99:1) thu 3 phân đoạn VH1.1-VH1.3. Rửa phân
đoạn VH1.2 bằng axeton và kết tinh lại trong hỗn hợp dung môi
n-hexan/axeton (7:3) thu được chất SP1 (0,35 g).
Phân đoạn VH3 được kết tinh trong CH2Cl2/MeOH (9/1) thu được chất có Rf trùng với POS5 (50 mg).
Cặn n-Hexan ( PVH; 7,5 g)
CC, silica gel, n-hexan/Axeton (0→100% A)
VH1 0,32 g VH2 1,96 g VH3 1,02 g VH4 2,54 g VH5 1,2 g CC, silica gel, 100 % n-hexan, n-hexan/axeton (99:1) VH1.1 50 mg VH1.2 0,2 g VH1.3 50 mg SP1 35 mg POS5 50 mg Kết tinh trong CH2Cl2/MeOH POS6 10 mg Rửa bằng MeOH
Sơ đồ 3.6. Quá trình phân lập các chất từ cặn n-hexan 3.2.2. Dữ kiện phổ và hằng số vật lý của các hợp chất đã phân lập
Ent-halima-1(10),13E-dien-15-oic acid (SP1): tinh thể hình kim, khơng
màu. Nhiệt độ nóng chảy 112-113oC. [α]D25 +67.5 (MeOH, c 0,62). 1H-NMR và 13C-NMR (xem Bảng 4.5). ESI-MS m/z: 305 [M+H]+
β-sitosterol (POS5): Tinh thể dạng phiến, màu trắng. Nhiệt độ nóng chảy 135-136oC. 1H-NMR và 13C-NMR (xem Bảng 4.6).
Sitosterol-3-O-β-glucopyranoside (POS6): Chất rắn dạng vơ định hình,
màu trắng. Nhiệt độ nóng chảy 273-274oC.