CHƢƠNG 2 : NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất dùng trong nghiên cứu
2.3.1 Thiết bị và dụng cụ
Thiết bị
- Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ khối phổ LC/MS/MS bao gồm: HPLC 20 AXL của Shimadzu và khối phổ ABI 5500 QQQ của Aplied Biosystem: bộ phận bơm dung mơi, bộ loại khí, bộ phận điều nhiệt và detector MS.
- Cột sc ký Agilent C18 (150mm ì 2,1mm ì 3,5àm) - Máy lắc ngang
- Máy lắc vortex VELP. - Máy đồng nhất mẫu. - Máy ly tâm MIKRO 22R.
- Cân phân tích (có độ đọc 0,1mg và 0,01mg). - Cân kĩ thuật (có độ đọc 0,01g).
Dụng cụ
- Cốc có mỏ dung tích 50, 100, 200ml. - Ống đong dung tích 10, 100, 200ml.
- Pipetman, pipet nhựa, pipet pasteur 200µl; 1000µl; 5ml…đầu cơn. - Ống ly tâm 50ml, màng lọc 0,2µm.
- Vial loại 1,8ml.
- Ống nghiệm thủy tinh… - Lọ dSPE dung tích 2ml
2.3.2 Hóa chất, chất chuẩn
Chất chuẩn
- Các chất chuẩn đƣợc cung cấp bởi hãng Sigma – Aldrich với độ tinh khiết lần lƣợt: SIM (99,6%), SD (99,7%), STZ (99,9%), SP (99,7%), SM (99,9%), SMM (99,8%), SCP (99,4%), SMX (%), SSA (99,9%), SDM (99,8%) SDM- d4 (1mg/lọ)
- Dung dịch chuẩn gốc 100 µg/ml: cân chính xác 0,01g từng chất chuẩn trên cân phân tích có độ đọc 0,0001g, hịa tan và định mức 100ml bằng metanol. Bảo quản trong tủ lạnh 40C, sử dụng trong 1 năm.
- Dung dịch chuẩn đơn trung gian (10 µg/ml): hút 1ml dung dịch chuẩn gốc vào bình định mức 10ml, pha loãng và định mức đến vạch bằng metanol. - Dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian (1000 ng/ml): hút 1ml mỗi chuẩn đơn
trung gian (10 µg/ml) vào bình định mức 10ml, pha lỗng và định mức đến vạch bằng metanol.
- Pha loãng dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian 1000 ng/ml trong metanol để thu đƣợc các dung dịch chuẩn làm việc nồng độ 0,5; 1; 2; 5; 10; 25; 50; 100; 200; 500 ng/ml.
- Dung dịch nội chuẩn (IS) gốc nồng độ 1000 µg/ml đƣợc chuẩn bị bằng cách hút chính xác 1ml metanol cho vào lọ chứa 1mg IS
- Dung dịch nội chuẩn làm việc 1000 ng/ml: hút 100µl IS gốc 1000 µg/ml vào bình định mức 100ml và định mức bằng metanol. Bảo quản trong tủ lạnh 40C.
Các loại hóa chất, dung mơi khác
- Metanol (Merck 99,9%), Acetonitril (Merck 99,9%), acid formic (Merck 98%), acid acetic băng (Merck)…
- Chuẩn bị pha động để khảo sát là acid formic trong nƣớc các nồng độ 0%; 0,05%; 0,1%; 0,15%; 0,2% (v/v).