- Tiến hành c y mẫu
Chuẩn bị môi trường VRBL để chuẩn bị đổ đĩa.
Chuyển 1ml dung dịch mẫu ở các nồng đ pha loãng trên vào đĩa petri vô trùng. Mỗi nồng đ pha loãng thực hiện trên 3 đĩa Petri.
Đổ kho ng 10ml môi trường VRBL vào đĩa petri.
Lắc tròn đĩa petri xuôi và ngược chiều kim đồng hồ, mỗi chiều 3-5 lần để tr n đều dung dịch mẫu với môi trường.
Để ở nhiệt đ phòng trong 1-2 giờ để hồi phục các tế bào bị tổn thương.
Sau đ cho môi trường đông hoàn toàn, đổ thêm 10mlVRBL.
Để đông hoàn toàn, lật ngược đĩa và nuôi ủ ở 37 ± 1oC trong 24 ± 3h. Ghi vào đáy đĩa petri các thông tin: nồng đ pha loãng, ngày c y…
Đếm các đĩa c số khuẩn lạc dưới 100 sau 24h nuôi c y.
Khuẩn lạc Coliform c màu đỏ tía, đường kính 0,5mm, đôi khi được bao quanh bởi 1 vùng hơi đỏ do tủa.
Tính giá trị trung bình từ các đĩa c cùng nồng đ pha loãng để tính số Coliform trong 1 gam mẫu.
- Công thức tính mật đ Coliform
Mật đ tế bào vi sinh vật trong mẫu ban đầu tính từ số liệu của đ pha loãng Di được tính theo công thức (2-2).
X = Aix Di/V (CFU/g) (2-2)
Trong đ : X là Mật đ Coliform nghi ngờ (CFU/g); Ai là số khuẩn lạc trung bình/đĩa; Dilà đ pha loãng; V là dung dịch huyền phù tếbào cho vào mỗi đĩa (ml).
2.2.3.2Phương pháp thử nghiệm khẳng định Coliforms
-Địa điểm phân tích mẫu tại Trung tâm Khoa học và Công nghệ Sinh học – Trường Đại học Khoa học tự nhiên Tp.HCM -Thiết bị, dụng cụ: Ống nghiệm Ống Durham Đèn cồn Tủ c y vô trùng Tủ m
-Môi trường và hóa ch t
Môi trường BGBL: Cân 40g b t môi trường BGBL + 1000 ml nước c t, khu y đều, phân phối vào các ống nghiệm, h p khử trùng ở 1210C, trong 15-21 phút.
Cồn 96%
-Tiến hành c y chuyền
Dùng que c y vòng c y chuyền sang các ống nghiệm chứa môi trường BGBL (trường hợp khẳng định Coliforms tổng số) và ống Durham úp ngược.
Ủ các ống BGBL ở 37±1oC trong 24 – 48 giờ. -Đọc kết qu
Kết qu khẳng định là (+) khi vi khuẩn tăng trưởng làm đục môi trường và sinh hơi trong ống Durham.
Tính tỉ lệ khẳng định là tỉ số giữa số khuẩn lạc cho kết qu (+) với số khuẩn lạc được dùng trong thử nghiệm khẳng định.
- Công thức khẳng định lại mật đ Coliform:
Coliform tổng = X xn (CFU/g) (2-3)
Trong đ : X là lượng Coliform nghi ngờ(CFU/g); n là tỷ lệ khẳng định ( bằng số ống nghiệm cho kết qu (+) so với khuẩn lạc được dùng trong thí nghiệm )
2.2.4 Phương pháp dùng sóng Viba xử lý Coliform trong bùn thải
-Địa điểm phân tích mẫu: Trung tâm Khoa học và Công nghệ Sinh học – Trường Đại
học Khoa học tự nhiên Tp.HCM. -Thiết bị, dụng cụ:
Phễu thủy tinh Lọ thủy tinh Cân phân tích Lò Viba
Đồng hồ b m giờ
Nguyên tắc:Với tần số thường là 2,45GHZ, s ng vi ba dễ bị h p thụ bởi nước. Các s ng bên trong lò sẽ được phát ở đúng tần số để c thể đi sâu vào trong mẫu và truyền hầu hết năng lượng cho lượng nước bên trong mẫu. Các loại ch t rắn ít nước hầu như không h p thụ s ng vi ba. S ng vi ba làm n ng mẫu bằng cách xoay các phân tử nước qua lại 2,5 tỷ lần trong m t giây. Và trong quá trình xoay qua xoay lại, các phân tử nước sẽ cọ xát vào
nhau. Điều này tạo ra ma sát, là nguồn s n sinh nhiệt năng. Kh năng diệt khuẩn của vi s ng chính là nhờ vào lượng nhiệt năng này. Vi s ng làm n ng c bên trong và bên ngoài mẫu cùng m t lúc nên đ m b o rằng vi khuẩn bị diệt hoàn toàn với 1 kho ng thời gian tiếp xúc đủ lớn.
Hình 2.4 Lò Viba SHARP R-21A1(S)VNThông sốkỹthuật: