CHƯƠNG 3 : PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.6 Phương pháp bào chế hệ vi hạt fibroin
3.6.1 Bào chế hệ vi hạt fibroin trống (FMPs-Blank)
Cân bột khô fibroin lần lượt các khối lượng 0,055 g / 0,11 g / 0,165 g hòa tan trong 5 mL nước cất, vortex 2 phút, được các dung dịch fibroin 1%, 2% và 3%. Sau đó ly tâm 4000 vòng/phút trong 5 phút, hút lấy 2 mL dung dịch trong. Nhỏ từ từ 1 mL dung môi (MeOH, EtOH 60%, EtOH 96%) vào 2 mL dịch fibroin trong nước, lắc trong 1 giờ. Bảo quản ở nhiệt độ 4℃ trong thời gian 24 giờ. Sau đó, ly tâm 6 000 vòng/phút trong 40 phút, loại bỏ phần nổi phía trên thu được FMPs-Blank. Phần cắn được đông khô và bảo quản ở nhiệt độ 4℃ cho đến khi thực hiện thí nghiệm tiếp theo.
3.6.2 Bào chết hệ vi hạt fibroin được tải dịch chiết (FMPs-WT)
Việc điều chế hạt FMPs có chứa polyphenol từ chiết xuất hoa WT được thực hiện tương tự như hạt FMPs-Blank. Tuy nhiên, sẽ thay thế 1 mL dung môi bằng
1 mL dung dịch cao chiết. Pha cao chiết khô bằng các dung môi chiết, định lượng lại hàm lượng polyphenol và pha loãng lại để được dung dịch cao chiết có nồng độ polyphenol lần lượt là 7/10/10 mg đối với cao chiết MeOH, EtOH 60%, EtOH 96%. Sau đó nhỏ từ từ vào 2 mL dịch fibroin trong nước, lắc trong 1 giờ. Bảo quản ở nhiệt độ 4℃ trong thời gian 24 giờ. Sau đó, ly tâm 6 000 vịng/phút trong 40 phút, phần dịch trong được sử dụng để xác định lại hàm lượng polyphenol tự do còn lại. Phần cắn được đông khô và bảo quản ở nhiệt độ 4℃ cho đến khi thực hiện thí nghiệm tiếp theo.