Việc thu nhận các acid béo tự do trong dầu VCO có thể được thực hiện bằng phương pháp hóa học (sử dụng base hoặc acid) hoặc phương pháp sinh học (sử dụng enzyme lipase). Hiện nay, phương pháp thủy phân bằng enzyme lipase được ưa chuộng hơn bởi tính thân thiện với môi trường. Thủy phân bằng enzyme lipase cần điều kiện nhiệt độ thấp hơn so với thủy phân bằng acid hay base. Ngoài ra, enzyme lipase có tính chọn lọc xúc tác. Tùy vào nguồn gốc của mỗi loại enzyme lipase mà nó có thể xúc tác vị trí sn – 1,3 hoặc sn – 2 hay thủy phân cả ba vị trí của acid béo trên mạch triglyceride. Đối
17
với phương pháp hóa học, thì tính chọn lọc này là không có vì nó sẽ thủy phân ở cả ba vị trí của acid béo trên mạch triglyceride. Do đó thủy phân bằng enzyme lipase có thể kiểm soát được quá trình thủy phân và nhận được sản phẩm thủy phân như mong muốn. Ngoài ra, thủy phân bằng enzyme lipase giúp hạn chế được những phản ứng không mong muốn trong quá trình thủy phân do tác động của nhiệt độ cao và các tác nhân hóa học, nhờđó có thể giảm được sự biến đổi của sản phẩm do sự phân hủy nhiệt và oxi hóa. Hơn thế nữa, phản ứng thủy phân dầu VCO bởi enzyme lipase không cần thêm các hóa chất hỗ trợ như phương pháp hóa học, do đó, có thể thu nhận được sản phẩm thủy phân sạch hơn và enzyme còn có thể tái sử dụng (trong trường hợp enzyme cố định) [24], [25]. Đã có một số tác giả nghiên cứu sử dụng enzyme lipase để thủy phân dầu VCO, như sử dụng enzyme cốđịnh Lypozyme (Sigma – Aldrich) để khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thủy phân dầu VCO của tác giả Chua và cộng sự (2012) [26]. Một nghiên cứu khác của tác giả Shilling và cộng sự (2013) đã sử dụng enzyme lipase porcine pancreas (Sigma – Aldrich) để thủy phân dầu VCO nhằm thu nhận hỗn hợp FFA sau thủy phân và thử khả năng kháng vi khuẩn Clostridium difficile
của chúng, đồng thời có so sánh và đối chiếu với các acid béo tự do dạng tinh khiết của Sigma – Aldrich gồm C8, C10 và C12. Kết quả cho thấy rằng, C12 kháng vi khuẩn
Clostridium difficile tốt nhất, kếđến là C10 và sau cùng là C8 [20].