Chƣơng 2 : ÐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Nội dung nghiên cứu
2.3.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ của bệnh do Demodex canis gây ra trên chó
2.3.1.1. Tình hình số lượng chó huấn luyện tại trường Trung cấp 24 Biên phòng;
2.3.1.2. Tỷ lệ mắc bệnh ngoài da ở chó nuôi tại trường Trung cấp 24 Biên Phòng Vật Lại - Ba Vì - Hà Nội;
2.3.1.3. Xác định thành phần loài Demodex gây bệnh trên chó nuôi ở Trường Trung cấp 24 Biên Phòng Vật Lại - Ba Vì - Hà Nội; Trung cấp 24 Biên Phòng Vật Lại - Ba Vì - Hà Nội;
2.3.1.4. Tỷ lệ mắc bệnh do D. canis gây ra ở chó theo mùa; 2.3.1.5. Tỷ lệ mắc bệnh do D. canis gây ra ở chó theo tuổi;
2.3.1.6. Tỷ lệ mắc bệnh do D. canis gây ra ở chó theo độ dài lông; 2.3.1.7. Tỷ lệ mắc bệnh do D. canis gây ra ở chó theo tính biệt.
2.3.2. Nghiên cứu đặc điểm triệu chứng lâm sàng, bệnh lý của bệnh do Demodex canis gây ra trên chó Demodex canis gây ra trên chó
2.3.2.1. Biểu hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh do D.canis gây ra 2.3.2.2. Sự thay đổi một số chỉ số máu của chó bị bệnh do D.canis gây ra 2.3.2.3. Bệnh tích đại thể và vi thể của chó bị bệnh
2.3.3. Nghiên cứu biện pháp phòng trị bệnh do Demodex canis gây ra trên chó
2.3.3.1. Đề xuất biện pháp phòng bệnh 2.3.3.2. Nghiên cứu thuốc điều trị bệnh 2.3.3.2. Nghiên cứu thuốc điều trị bệnh
2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.4.1. Phương pháp xác định đặc điểm dịch tễ
Sử dụng phương pháp nghiên cứu dịch tễ học mô tả (Descriptive study), dịch tế học phân tích (Analytic study) và dịch tễ học thực nghiệm của Nguyễn Như Thanh 2011.
Sử dụng phương pháp nghiên cứu cắt ngang tìm căn nguyên của bệnh, so sánh tần suất bệnh giữa các nhóm khác nhau. Các cá thể trong cùng
nhóm cũng như các yếu tố nguy cơ và các thông tin khác đều được tiến hành trong cùng một thời gian, thời điểm nghiên cứu.
2.4.1.1. Phương pháp lấy mẫu
- Ghi tên, dán nhãn từng chó và vị trí lấy bệnh phẩm lên lam kính; - Nhỏ giọt dầu lên lam kính;
- Dùng dao để cạo lấy chất bã, dùng lực ngón tay cái và ngón thứ hai bóp với một lực đủ mạnh để nặn chất bã tiết ra ngoài;
- Cho chất bã vừa lấy được vào giọt dầu và trộn đều để chất bã hòa tan trong dầu và phóng thích Demodex vào trong giọt dầu nếu chúng có trong bệnh phẩm. Làm tương tự như vậy đối với các vị trí tiếp theo. Mỗi lần lấy mẫu phải làm sạch và tẩy uế dụng cụ trước khi dùng nó cho vị trí lấy bệnh phẩm tiếp theo;
Demodex phát triển qua 5 giai đoạn: Trứng, ấu trùng, tiền nhộng, nhộng và phát triển thành con trưởng thành. Từ giai đoạn trứng tới tiền nhộng là 3-4 ngày và từ nhộng phát triển thành Demodex trưởng thành là 7 ngày. Chúng thường sống thành từng đôi, ký sinh trên vật chủ với vòng đời từ 18-24 ngày trên vật chủ. Sau khi giao phối, chúng lẩn sâu và trong da và đẻ trứng tại nang lông và tuyến bã và chết ở trong da ngay sau đẻ trứng. Sau khi chết, xác của chúng hóa lỏng, phân hủy trong da từ đó gây phản ứng dị ứng trên da.
Demodex canisdài khoảng 100 đến 300 microns; - Gồm đầu, thân, đuôi;
- 4 cặp chân gần phần đầu.
2.4.1.2. Phương pháp xác định tỷ lệ chó mắc bệnh ghẻ do Demodex gây ra theo mùa vụ, lứa tuổi, tính biệt và độ dài lông chó
- Căn cứ đặc điểm sinh lý vàcác giai đoạn sinh trưởng và phát triển của chó, để theo dõi tỷ lệ chó mắc bệnh Demodex, chúng tôi chia chó ra 3 lứa tuổi như sau:
+ 1 đến 2 tuổi; + > 2 tuổi.
- Ở miền bắc nước ta có 4 mùa: Xuân, Hạ, Thu, Đông và được chia theo các tháng như sau:
+ Mùa Xuân từ tháng 3 - tháng 5; + Mùa Hè từ tháng 6 - tháng 8; + Mùa Thu từ tháng 9 - tháng 11; + Mùa Đông từ tháng 12 - tháng 2.
- Độ dài lông chó:Dựa vào đặc điểm lôngdài, ngắn, chúng tôi chia chó thành 2 nhóm:
+ Chó lông ngắn: là những giống chó có độ dài của lông ngắn hơn 2cm, lông mượt, áp sát vào da;
+ Chó lông dài: là những giống chó có độ dài của lông dài hơn 2cm thường xù, quăn và phải chăm sóc tắm chải thường xuyên.
2.4.1.3. Phương pháp sinh thiết da tiêu chuẩn
Phương pháp này sử dụng keo cyanoacrylate để lấy một lớp mỏng sừng, nang lông và bã nhờn ở trên da. Cyanocrylate là một loại keo có tính chất quang học rất giống thủy tinh nên ta có thể kiểm tra mẫu dưới kính hiển vi quang học khi dùng loại keo này. Đây là một kỹ thuật có độ nhạy và độ đặc hiệu cao. Kỹ thuật làm: áp một mặt lam kính có gắn keo cyanoacrylate lên vùng da tổn thương trong 1 phút, sau đó gỡ ra. Quá trình này lấy đi phần đầu của nang lông tuyến bã, lớp sừng trên bề mặt chứa Demodex. Kiểm tra dưới kính hiển vi quang học với độ phóng đại x40 thấy Demodex trưởng thành dài 0,3-04 mm, có 4 đôi chân ngắn và dài ở phần trước cơ thể.
- Đánh giá kết quả + Nếu 5 con/cm2
: Demodexcanis là căn nguyên gây bệnh; + Nếu < 5 con/cm2
2.4.1.4. Phương pháp cạo vẩy da
Lấy chất tiết từ tuyến bã bằng cách bóp chặt da vùng tổn thương muốn lấy bệnh phẩm bằng ngón cái và ngón trỏ (trong phương pháp lấy mẫu), các bệnh phẩm lấy được chuyển qua lam kính, trộn với 1 giọt glycerin và phủ 1 lá men, kiểm tra dưới kính hiển vi với độ phóng đại 40.
- Đánh giá kết quả + Nếu 5 con/cm2
: Demodexcanis là căn nguyên gây bệnh; + Nếu < 5 con/cm2
: Demodexcanis không phải căn nguyên gây bệnh.
2.4.1.5. Phương pháp quan sát, đánh giá vùng da bị tổn thương
Chó khảo sát được lập phiếu theo dõi và bảng điều tra thông tin liên quan đến bệnh sử, cách chăm sóc nuôi dưỡng, môi trường sống, cũng như các vấn đề liên quan khác. Các bước khám lâm sàng chung được thực hiện trước khi tiến hành kiểm tra chi tiết liên quan đến bệnh da như lông (khô, xơ, dễ gãy, dễ rụng, mọc không đều…), da (giảm tính đàn hồi, thay đổi sắc tố da, tăng sừng hóa, nứt nẻ, nổi mẩn đỏ, lở loét, nổi mụn mủ, có mùi hôi, vàng da), và hành vi (gãi, thú bồn chồn, giảm ăn, giảm ngủ, thay đổi tính tình).
Chó nuôi dương tính với Demodex được chia làm 3 thể bệnh:
Thể nhẹ: Diện tích vùng da nhiễm Demodex dưới 20% so với bề mặt da của cơ thể, chó không ngứa hoặc ít ngứa; da tăng sinh, nhăn nheo và có vảy.
Thể trung bình: Diện tích vùng da nhiễm Demodex từ 20% - 50% so với bề mặt da của cơ thể, chó ngứa, da tăng sinh, da dày, nhăn nheo, có vảy bong tróc ra.
Thể nặng: Diện tích vùng da nhiễm Demodex trên 50% so với bề mặt da của cơ thể, da dày cộm lên, có nhiều mảng vảy bong tróc ra, chó rất ngứa gãi liên tục. Một số con da đỏ ửng, lở loét và có dịch rỉ viêm chảy ra, có nhiều mụn mủ, chó lờ đờ, bỏ ăn, mệt mỏi...
Sự phân bố Demodex trên cơ thể chó được phân chia vùng da bị nhiễm bệnh theo 3 vùng chính: đầu và chân trước; lưng và bụng; mông và chân sau.
2.4.2. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm triệu chứng lâm sàng, bệnh lý của bệnh do Demodex canis gây ra trên chó của bệnh do Demodex canis gây ra trên chó
2.4.2.1. Phương pháp đánh giá biểu hiện lâm sàng của chó nhiễm bệnh do Demodex canis gây ra
Thể nhẹ: Chó có biểu hiện rụng lông dưới 20% so với bề mặt da của cơ thể; chó không ngứa hoặc ít ngứa; da tăng sinh, nhăn nheo và có vảy.
Thể trung bình: Chó có biểu hiện rụng lông 20% - 50% so với bề mặt da của cơ thể, chó ngứa, da tăng sinh, da dày, nhăn nheo, có vảy bong tróc ra.
Thể nặng: Chó rụng lông trên 50% so với bề mặt da của cơ thể, da dày cộm lên, có nhiều mảng vảy bong tróc ra, chó rất ngứa gãi liên tục. Một số con da đỏ ửng, lở loét và có dịch rỉ viêm chảy ra, có nhiều mụn mủ, chó lờ đờ, bỏ ăn, mệt mỏi...
2.4.2.2. Phương pháp xét nghiệm máu để xác định một số chỉ số huyết học của chó mắc bệnh do Demodex và chó khỏe
Phương pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu
Tiến hành lấy mẫu của chó mắc bệnh và chó khỏe để so sánh và đối chứng. Mỗi mẫu máu được đưa vào một ống nghiệm (1ml/ống) có chất chống đông máu. Trên mỗi ống ghi đầy đủ thời gian lấy mẫu, số ký hiệu mẫu. Mẫu máu được bảo quản trong hộp bảo ôn và được xét nghiệm ngay trong ngày.
Phương pháp xét nghiệm
Số lượng hồng cầu, bạch cầu, hàm lượng huyết sắc tố, tỷ khối hồng cầu, thể tích huyết cầu được xác định tại Bệnh xá Thú y, trường Trung cấp 24 Biên Phòng Vật Lại - Ba Vì - Hà Nội.
Công thức bạch cầu được xác định bằng phương pháp Tristova: Làm tiêu bản máu, nhuộm giemsa, đếm số lượng từng loại bạch cầu và tính tỷ lệ phần trăm từng loại.
2.4.2.3. Phương pháp xác định bệnh tích đại thể
Quan sát bằng mắt thường và kính lúp các vùng da bị bệnh. Chụp ảnh vùng da có bệnh tích điển hình.
Chó mắc bệnh biểu hiện 2 thể bệnh:
- Dạng khô: Chó rụng lông trên da trần, mi mắt, 4 chân, da dầy cộm thành màu đỏ xẫm, chó bệnh thường hay đưa chân lên gãi;
- Dạng mủ: Có mụn mủ sưng mọng, đặc quánh màu vàng xám do các vi trùng xâm nhập; da nhăn nheo, rụng lông, các tổ chức chết cùng với dịch thể lâm ba tiết ra tạo thành các vẩy khổ cứng dày cộm. Những con bệnh nặng toàn thân chó trụi hết lông, ở những vùng da mỏng bụng, nách, háng có những ổ mủ áp xe, mùi tanh hôi, khó chịu.
2.4.2.4. Phương pháp xác định những biến đổi bệnh lý vi thể ở vùng da bị tổn thương
Dùng dao để cạo lấy chất bã, dùng lực ngón tay cái và ngón thứ hai bóp với một lực đủ mạnh để nặn chất bã tiết ra ngoài; tiêu bản vi thể được làm theo quy trình tẩm đúc Parafin - nhuộm Hematoxillin - Eosin (H.E) tại bệnh viện đa khoa Ba Vì - Hà Nội. Đọc kết quả dưới kính hiển vi quang học độ phóng đại tối đa 600 lần.
2.4.3. Phương pháp nghiên cứu biện pháp phòng và trị bệnh do Demodex gây ra trên chó gây ra trên chó
2.4.3.1. Biện pháp phòng bệnh
- Định kỳ tiêu độc chuồng nuôi bằng một trong các dung dịch sau đây: chloramin B 0,5%, nước vôi 10%, ND-Iodine phun tiêu độc.
- Thường xuyên vệ sinh thân thể cho chó. Tắm cho chó bằng nước bồ kết, lá ổi, lá xoan, hạt mùi, lá kinh giới, mướp đắng hay dung dịch tắm cho chó, lấy khăn kỳ cọ hay bàn chải chà xát để bong hết các vảy đọng trên da chó, sau đó lấy khăn lau khô. Dụng cụ chăm sóc, nuôi dưỡng chó như chậu, khăn, bàn chải, bát đĩa đựng thức ăn, nước uống... phải được sát trùng bằng nước sôi, hoặc ngâm trong dung dịch thuốc tím loãng 0,1%, nước vôi trong. Sau đó rửa sạch, phơi khô dưới ánh nắng mặt trời. Phân chó và các chất thải phải quét dọn sạch hàng ngày đổ vào hố xử lý tiêu độc.
- Chuồng nuôi, đệm nằm dụng cụ khác phải được tiêu độc, sát trùng bằng thuốc tím 0,1%, chloramin B 0,5% hay ND-Iodine. Các loại thuốc sát trùng này dùng để phun định kỳ.
- Cách ly chó bệnh và chó lành: Chó bệnh nên ở một khu riêng biệt, có chế độ chăm sóc, nuôi dưỡng riêng, cần điều trị tổng hợp như thuốc trị ghẻ, thuốc kháng sinh chữa triệu chứng và thuốc bổ trợ tăng sức bảo vệ của cơ thể.
Lưu ý: Không nên tắm bằng xà phòng vì chất kiềm sẽ gây ngứa kích ứng da.
2.4.3.2. Biện pháp điều trị
Hiện nay trên thị trường có nhiều loại thuốc dùng trị Demodex cho chó, tuy nhiên quá trình điều trị chúng tôi thấy đa số các loại thuốc đều cho hiệu quả không cao, chó rất dễ nhiễm bệnh lại. Theo nghiên cứu của các tác giả trên thế giới như Djuric và cs. (2019), Josephus và cs. (2015) thì tỷ lệ chó khỏi bệnh khi sử dụng của thuốc Bravector trong điều trị Demodex đạt cao từ 96- 100%. Thuốc Bravertor có hoạt chất chính Fluralaner, là một chất ức chế hiệu nghiệm đối với hệ thống thần kinh của động vật chân khớp bằng cách tác động ngược trên kênh clo phối hợp (thụ thể GABA và thụ thể glutamate). Sau khi uống, Fluralaner được hấp thụ và đạt ngưỡng tối đa trong huyết thanh trong vòng 1 ngày. Fluralaner được phân bố hệ thống và đạt nồng độ cao nhất trong mỡ, sau đó là gan, thận và cơ. Sự kéo dài bền bỉ và loại thải chậm khỏi huyết thanh (thời gian bán thải = 12 ngày) và thiếu sự chuyển hóa một cách bao quát cung cấp một nồng độ fluralaner hiệu quả cho một khoảng thời gian. Có sự dao động trong nồng độ tối đa và thời gian bán thải trong huyết thanh đối với từng cá thể. Fluralaner được bài thải 90% qua phân. Thận bài thải một lượng nhỏ.
Bước đầu đã thử nghiệm điều trị bằng thuốc Bravector cho chó mắc bệnh và cho kết quả tốttại Trường Trung cấp 24 Biên phòng. Trường với đặc thù là nơi nuôi dưỡng và chăm sóc chó nghiệp vụ, nên trong quá trình điều trị bệnh cho
chó phải lựa chọn thuốc có hiệu quả điều trị cao và hạn chế tái nhiễm. Chính vì vậy, chúng tôi đã tiến hành quá trình điều trị chó mắc Demodex canis bằng thuốc Bravector trên số lượng chó lớn hơn để đánh giá hiệu quả điều trị. Từ đó biết được chính xác hiệu lực điều trị của thuốc Bravector và làm cơ sở khoa học cho Trường Trung cấp 24 Biên phòng cũng như đơn vị huấn luyện chó khác điều trị bệnh kịp thời và hiệu quả cho chó mắc bệnh.
Từ kết quả xét nghiệm, chọn ra những chó mắc bệnh và tiến hành điều trị bệnh bằngphác đồ điều trị sau:
+ Bravector (hoạt chất Fluralaner): Liều dùng 30mg/kg thể trọng. Thuốc dạng viên nhai, sử dụng 1 lần duy nhất.
+ Thuốc bổ trợ tăng cường sức đề kháng cho chó: Vitamin C (Franvit C: ½ viên, 1 lần/ngày).
Trong quá trình điều trị theo dõi các biểu hiện bệnh trên chó như: tình trạng ngứa, da phục hồi hết tróc vẩy, hết sần sùi, lông mọc lại bình thường...
2.5. Phƣơng pháp xử lý số liệu
Số liệu thu thập được được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học của Nguyễn Xuân Trạch và Đỗ Đức Lực (2016), phần mềm Excel 2010.
Chƣơng 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học của bệnh do Demodex canis gây ra trên chó trên chó
3.1.1. Số lượng chó huấn luyện tại trường Trung cấp 24 Biên phòng
Trường trung cấp 24 Biên phòngđóng trên địa bàn xã Vật Lại, huyện Ba Vì, thành phố Hà Nội. Một trong những nhiệm vụ của nhà trường là đào tạo huấn luyện chó nghiệp vụ. Các “khuyển binh” khi vào đây được huấn luyện kỹ hai chuyên ngành chính là “khuyển binh” chiến đấu và “khuyển binh” giám biệt nguồn hơi. Nhiệm vụ của những huấn luyện viên và “khuyển binh” nghiệp vụ này khá đa dạng, từ lùng sục, truy vết, đánh bắt các đối tượng tội phạm, nhất là tội phạm ma túy, phòng chống vượt biên, tuần tra, chốt chặn, bảo vệ rừng, đến việc hỗ trợ công tác hình sự và tìm kiếm cứu nạn... Để thấy được tình hình nuôi, chăm sóc và quản lý chó nghiệp vụ tại trường Trung cấp 24 Biên phòng, chúng tôi đã tiến hành thống kê số lượng chó huấn luyện tại trường. Kết quả được trình bày qua bảng 3.1.
Bảng 3.1. Số lƣợng chó huấn luyện tại trƣờng Trung cấp 24 Biên phòng STT Loại chó Số lƣợng chó huấn luyện (con) Tổng chung
(con)
Khu A Khu B
1 Chó lai 105 107 212
2 Chó ngoại 120 176 296
Tổng 225 283 508
Bảng 3.1 cho thấy, số lượng chó huấn luyện tại trường Trung cấp 24 Biên phòng tại thời gian nghiên cứu là 508 con, gồm các giống chó nghiệp vụ