PHA CHẾ HểA CHẤT VÀ BẢO QUẢN DUNG DỊCH MẸ

PHA CHẾ HểA CHẤT VÀ BẢO QUẢN DUNG DỊCH MẸ I. Mục tiờu của bài:

Sau khi học xong bài này học viờn cú khả năng:

 Trỡnh bày được cỏch pha chế và bảo quản dung dịch mẹ.

 Pha chế và bảo quản được dung dịch mẹ theo đỳng quy trỡnh

A. Nội dung

1. Cỏch pha húa chất và bảo quản húa chất

Mụi trường dinh dưỡng dựng cho nuụi cấy mụ tế bào cú thành phần phức tạp, bao gồm nhiều chất. Để tiết kiệm thời gian và hoỏ chất người ta thường chuẩn bị cỏc dung dịch mẹ cú nồng độ cao (10 → 100 lần).

Ngày nay nhiều hóng hoỏ chất đó pha sẵn dưới dạng dung dịch mẹ, khi mua về chỉ cần pha loóng theo tỷ lệ để dựng. Đối với cỏc muối đa lượng thường pha dung dịch mẹ cú nồng độ gấp 10 lần, giữ ở nhiệt độ bỡnh thường và cú thể sử dụng trong vũng 1 → 2 thỏng. Cỏc vi lượng, vitamin và cỏc chất điều hũa sinh trưởng dung dịch mẹ cú thể pha ở nồng độ gấp 100 lần và bảo quản ở 5 → 100C.

1.1. Cỏch pha hoỏ chất

1.1.1. Cỏch pha cỏc hoỏ chất tan trong nƣớc

Dựng nước sạch để pha hoỏ chất, đầu tiờn dựng với một lượng nước nhỏ, khuấy hoỏ chất cho đến khi tan hoàn toàn rồi mới thờm nước dần cho đến khi đạt yờu cầu thỡ thụi

1.1.2. Cỏch pha cỏc hoỏ chất tan trong cồn hoặc dung mụi

Dựng một ớt cồn hoặc dung mụi vừa đủ để pha hoỏ chất, chỳ ý khuấy đều cho đến khi hoỏ chất tan hoàn toàn. Sau đú đổ từ từ hoỏ chất vào nước cất núng vừa đổ vừa khuấy đều.

1.1.3. Cỏch pha hoỏ chất với nồng độ cho trƣớc

1.1.3.1 Pha hoỏ chất tớnh theo nồng độ thƣơng phẩm.

Chỉ ỏp dụng với cỏc chế phẩm đó được nhà sản xuất pha chế theo cụng thức bản quyền, người dựng chỉ cần pha theo chỉ dẫn

1.1.3.2 Pha hoỏ chất tớnh theo nồng độ chất hoạt động

Đa số cỏc loại hoỏ chất được tổng hợp chỉ đạt hàm lượng chất tinh khiết nhất định cũn lại là chất phụ gia hoặc dung mụi. Khi sử dụng hoỏ chất để điều khiển sinh trưởng của thực vật người ta thường tớnh theo nồng độ hoỏ chất tinh

khiết (chất hoạt động), do đú chỳng ta phải tớnh nồng độ quy đổi thụng qua hàm lượng chất tinh khiết cú trong hoỏ chất.

Bài toỏn: Người ta cần dung dịch axit Boric 0,01% để phun nhằm tăng tỷ lệ đậu quả của xoài. Cú 20 gam axit Boric (dạng tinh khiết) thỡ cú thể pha được bao nhiờu lớt dung dịch phun cú nồng độ trờn ?

Giải: Theo bài ra cứ: 1 gam axit Boric thỡ pha được 10 lớt dung dịch phun Vậy: 20 gam axit Boric thỡ pha được X lớt dung dịch phun

20 x 10

X = = 200 lớt dung dịch phun 1

Bài toỏn: Cú 1 gúi hoỏ chất NAA thụ chứa 40% đựng trong tỳi thiếc 5g/tỳi.

Muốn pha dung dịch NAA cú nồng độ 0,1% (tớnh theo % chất hoạt động) thỡ tỳi NAA 40% cú thể pha được bao nhiờu lớt dung dịch ?.

Giải:

- Theo bài ra cứ 1lớt dung dịch NAA 0,1% thỡ cú 1g NAA tinh khiết.

- Mà NAA thụ dựng để pha chỉ cú 40% tinh khiết tức là 1g NAA thụ chỉ

cú 0,4g NAA tinh khiết.

Theo bài ra cứ: 1g NAA thụ thỡ cú 0,4g NAA tinh khiết Cần 1g NAA tinh khiết thỡ phải cú X gam NAA thụ

1 x 1 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

X = = 2,5 g NAA thụ 0,4

Do đú để cú 1g NAA tinh khiết phải cần 2,5g NAA thụ.

Vậy 1 tỳi NAA thụ chứa 5g cú 2g NAA tinh khiết, do vậy

chỳng ta sẽ pha được 2 lớt dung dịch NAA 0,1% tinh khiết.

1.2. Cỏch pha và bảo quản từng loại húa chất cụ thể. 1.2.1. Cỏch pha và bảo quản cỏc chất đa lƣợng: 1.2.1. Cỏch pha và bảo quản cỏc chất đa lƣợng:

Chuẩn bị nước cất đủ, đũa thủy tinh, ống đong định mức, ca hoặc cốc ... Cõn húa chất cho vào ca rồi đổ 10-15% lượng nước cất vào khuẩy cho tan hết.

Chỳ ý: Khụng dựng chung đũa khuấy, để trỏnh hiện tượng kết tủa. Sau đú thờm

nước vào cho đến khi đủ lượng cần pha, dựng bỡnh thủy tinh cú nỳt nhỏm (nỳt mài), ghi nhón, để ở nhiệt độ bỡnh trường trong phũng hoặc bảo quản trong tủ lạnh.

Vớ dụ: pha KNO3 nồng độ 0,2% (2g/l). Ta cõn 2g KNO3 cho vào ca đong, sau đú cho khoảng 100ml nước cất vào khuấy đều cho tan hết sau đú

thờm dần nước cho đến khi đủ 1lit thỡ đổ vào bỡnh thủy tinh hỡnh trụ cú nỳt đậy. Bảo quản ở nhiệt độ thường hoặc trong tủ lạnh.

1.2.2. Cỏch pha cỏc nguyờn tố vi lƣợng:

Cỏch pha cỏc chất vi lượng tương tự như pha cỏc chất đa lượng. Nhưng cỏc chất vi lượng được sử dụng với nồng độ nhỏ, vỡ vậy khi cõn húa chất cần sử dụng cõn phõn tớch để cõn.

Cần chỳ ý khi pha muối sắt: Sau khi cõn 2 hợp chất EDTA.Na2 và FeSO4.H2O với khối lượng EDTA.Na2 là 37,3 mg FeSO4.H2O 27,8 mg. Cho riờng ra từng cốc, hũa tan bằng nước cất. Đổ từ từ dung dịch EDTA.Na2 vào dung dịch FeSO4.H2O. Đun dung dịch trờn bếp điện, vừa đun và vừa khuấy đều cho đến khi sụi, nhắc ra để nguội và cho thờm nước cất để cú thể tớch là 1 lớt. Đựng trong chai nõu và bảo quản trong tủ lạnh.

1.2.3. Cỏch pha cỏc chất vitamin

Chuẩn bị nước cất đủ, đũa thủy tinh, ống đong định mức, ca hoặc cốc ... Cõn Vi ta min cho vào ca rồi đổ 10 - 15% lượng nước cất vào khuẩy cho tan hết. Chỳ ý là khụng dựng chung đũa khuấy, để trỏnh hiện tượng kết tủa. Sau đú thờm nước vào cho đến khi đủ lượng cần pha, dựng bỡnh thủy tinh cú nỳt nhỏm (nỳt mài), ghi nhón, để ở nhiệt độ bỡnh trường trong phũng hoặc bảo quản trong tủ lạnh.

1.2.4. Cỏch pha cỏc chất điều hũa sinh trƣởng

Trong nuụi cấy mụ cỏc chất điều hoà sinh trưởng thường được sử dụng ở nồng độ thấp, thường cú nồng độ mg/l (ppm). Hơn nữa cú một số chất khụng hoặc ớt tan trong nước nờn cần pha trong dung mụi:

Đối với 2,4D, NAA, IAA, IBA, GA…Pha nồng độ dung dịch mg/l. Cõn cỏc chất điều hũa sinh trưởng trờn cho vào bỡnh định mức thủy tinh cú nỳt đậy, hoặc ca đong thủy tinh, nhỏ từ từ vào đú 3 - 5 ml dung mụi thớch hợp (cồn 950 hoặc NaOH. 1N hay HCl. 1N) lắc cho tan rồi thờm nước cất núng cho đến vạch định mức cần lấy.

Vớ dụ: Pha NAA (0,5mg/l). Cõn vừa đủ 0,5 mg NAA, cho vào ca đong thủy tinh hoặc lọ thuỷ tinh, hoà tan NAA bằng 3 - 5ml cồn 950

. Hũa tan dung dịch này, nhỏ giọt dung dịch vừa pha vào nước cất núng (80oC) khuấy đều, đổ thờm nước cất cho đủ thể tớch cần lấy.

1.2.5. Cỏch pha chế cỏc chất khử trựng, chất chỉ thị * Cồn:

Cồn được sử dụng trong nuụi cấy mụ tế bào bao gồm cú cồn 750 và cồn 950 . Vỡ vậy khi muốn pha cồn từ 950

thành cồn 750 ta làm như sau: Cồn 950

cú nghĩa là trong 1000ml dung dịch cú chứa 950 ml cồn Cồn 750

Vậy muốn pha 1lớt cồn Cồn 950

xuống cồn 750 ta làm như sau: Theo bài ra cứ 1000ml cồn 950 thỡ cú 950 ml cồn 950

X ml cồn 950 cần 750 ml cồn 750 750 x 1000

X = = 790ml cồn 950

950

Nghĩa là muốn pha cồn 950 xuống cồn 750 ta chỉ cần lấy 790 ml cồn 950 rồi thờm 210 ml nước cất là ta cú được 1000 ml (1 lớt) cồn 750 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

2. Cỏch pha chế dung dịch mẹ và cỏch bảo quản dung dịch mẹ 2.1. Cỏch pha dung dịch mẹ 2.1. Cỏch pha dung dịch mẹ

Với cỏc loại hoỏ chất cú nồng độ sử dụng nhỏ (phần triệu, viết tắt là ppm), để thuận tiện cho sử dụng người ta pha qua một nồng độ trung gian (một phần nghỡn) gọi là dung dịch mẹ. Khi sử dụng cần ở nồng độ bao nhiờu ppm người ta chỉ cần lấy bấy nhiờu ml dung dịch mẹ thờm nước vào cho đến khi đủ 1 lớt là được. Trường hợp dung dịch mẹ sử dụng khụng hết cú thể bảo quản trong chai bọc giấy đen, để ở nơi thoỏng mỏt. Dung dịch mẹ cú thể lưu giữ được trong thời gian từ 1 - 3 thỏng tuỳ từng loại hoỏ chất.

Vớ dụ 1: Pha 1gam NAA 99% tinh khiết với 990ml nước ta được dung dịch mẹ 0,1%.

1 gam x 99/100

C = = 0,1% 990 ml nước

Cỏch pha như sau: Pha 1g NAA 99% tinh khiết với 50 ml cồn 90% (vỡ hoỏ chất này khụng tan trong nước) khuấy đều cho đến khi hoỏ chất tan hết, sau đú đong 940 ml nước cất núng rồi đổ từ từ dung dịch NAA tan trong cồn vào cốc nước vừa đổ vừa khuấy đều chỳng ta sẽ được dung dịch mẹ cú nồng độ 0,1% NAA. Khi sử dụng dung dịch NAA 20 ppm chỳng ta chỉ cần lấy 20 ml dung dịch mẹ pha vào 980 ml nước là được dung dịch phun theo ý muốn.

Vớ dụ 2: Pha 1gam NAA 40% tinh khiết với 400ml nước ta được

dung dịch mẹ 0,1%.

0,4gam

C = = 0,1% 400 ml nước

Cỏch pha như sau: Pha 1g NAA 40% tinh khiết với 20 ml cồn 90%

sau đú đong 380 ml nước cất núng, rồi đổ từ từ dung dịch NAA tan trong cồn

vào cốc nước núng, vừa đổ vừa khuấy đều chỳng ta sẽ được dung dịch mẹ cú nồng độ 0,1% NAA.

2.2. Cỏch pha chế và bảo quản chất điều hoà sinh trƣởng

Trong nuụi cấy mụ cỏc chất điều hoà sinh trưởng thường được sử dụng ở nồng độ thấp, để tiện lợi cho việc sử dụng cần pha dung dịch mẹ cú nồng độ cao gấp 100 → 1000 lần dung dịch làm việc (mg/ml). Hơn nữa cú một số chất khụng hoặc ớt tan trong nước nờn cần pha như sau:

* Đối với 2,4D, NAA, IAA, IBA, GA...

+ Pha nồng độ dung dịch mẹ: 0,1% (mg/ml) + Dung mụi để pha 3-5ml cồn 950

+ Cỏch pha: Cõn 100 mg cỏc chất điều hũa sinh trưởng (2,4D, NAA, IAA, IBA, GA...) cho vào bỡnh định mức cú thể tớch 100ml khụ và sạch, nhỏ từ từ dung mụi cồn 950 (khoảng 3-5 ml) vào húa chất vừa cõn, vừa nhỏ vừa khuấy cho tan hết. Sau đú thờm vào nước cất núng 80o cho đủ thể tớch là 100ml.

Chỳ ý: Khi pha cỏc chất điều hũa sinh trưởng chỳng ta chỉ lấy ra một lượng nhỏ

vừa đủ, khụng được đổ lại. Dung mụi pha đạt tiờu chuẩn tức là dung dịch cú mầu trong suốt khụng cú vẩn lăn tăn.

+ Cỏch bảo quản:

Cỏc loại dung dịch mẹ này cần được bảo quản trong lọ nỳt mài màu nõu. Thời gian bảo quản từ 2-3 thỏng với 2,4D và NAA tương đối bền nờn cú thể bảo quản thời gian lõu hơn (khoảng một năm). Riờng IAA phải bảo quản trong tủ lạnh mới đảm bảo giữ được hoạt tớnh.

+ Cỏch sử dụng: Phải đảm bảo đỳng nồng độ.

Vớ dụ: khi sử dụng IBA với nồng độ 30mg/l (30 ppm) để cho cõy mụ ra rễ, thỡ ta chỉ cần lấy 30 ml dung dịch mẹ (IBA 0,1%) pha vào 1 lớt mụi trường là được.

Chỳ ý: Khi lấy dung dịch mẹ để pha chế mụi trường làm việc cần sử dụng micropipet và riờng cho mỗi chất. Sau khi dựng xong cần phải rửa thật sạch cỏc dụng cụ đó dựng, đó đựng loại hoỏ chất này.

* Đối với dung dịch 6 BA Pha nồng độ dung dịch mẹ (mg/ml)

- Dung mụi để pha 3-5 ml HCl. 1N

+ Cỏch pha: Cõn bằng hộp thuỷ tinh cú nắp một lượng vừa đủ 100 mg 6BA cho vào bỡnh định mức cú thể tớch 100ml khụ và sạch, nhỏ từ từ dung mụi HCl 1N (3 - 5 ml) vào lượng húa chất vừa cõn. Đun nước cất với lượng nước cất vừa đủ dựng, cho lờn trờn bếp điện đun đến 800C sau đú nhắc ra và nhỏ

từng giọt 6BA vào (vừa nhỏ vừa khuấy đều), sau đú cho hỗn hợp vào bỡnh thủy tinh mầu nõu cú thể tớch là 100ml.

+ Cỏch bảo quản: với dung dịch 6 BA cần được bảo quản trong lọ nỳt mài màu nõu. Thời gian bảo quản từ 2-3 thỏng ở nhiệt độ 5 -10 0C. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Chỳ ý: Khi sử dụng phải đảm bảo đỳng nồng độ. khi lấy dung dịch mẹ để pha chế mụi trường làm việc cần sử dụng micropipet và riờng cho mỗi chất. Sau khi dựng xong cần phải rửa thật sạch cỏc dụng cụ đó dựng, đó đựng loại hoỏ chất này.

* Đối với Kinetin

+ Pha nồng độ dung dịch mẹ (mg/ml) + Dung mụi để pha 5 - 10 ml HCl. 1N

+ Cỏch pha: Cõn bằng hộp thuỷ tinh cú nắp một lượng vừa đủ 40mg kinetin cho vào bỡnh định mức cú thể tớch 100ml khụ và sạch, hũa tan lượng kinetin vừa cõn bằng dung mụi HCl 1N (5 - 10 ml), vừa nhỏ vừa khuấy cho tan hết. Sau đú thờm vào nước cho đủ thể tớch là 40ml.

+ Cỏch bảo quản: với dung dịch kinetin cần được bảo quản trong lọ nỳt mài màu nõu. Thời gian bảo quản từ 2-3 thỏng ở nhiệt độ 5 - 10 0

C.

2.3. Cỏch pha chế và bảo quản cỏc chất vi lượng, đa lượng của dung dịch mẹ

Cỏc muối khoỏng (chất đa lượng, vi lượng) cú thể được chuẩn bị thành dạng dung dịch mẹ cú nồng độ gấp từ 10→100 lần nồng độ dựng trong mụi trường. Cỏc nguyờn tố muối khoỏng thường được chia thành 2 nhúm dung dịch mẹ là nguyờn tố đa lượng, nguyờn tố vi lượng, tuy nhiờn trừ khi chỳng được pha loóng tối đa nếu khụng sẽ sẩy ra hiện tượng kết tủa. Để pha được dung dịch mẹ cú nồng độ đậm đặc hơn, phương phỏp thường sử dụng là thường chia theo nhúm cỏc ion. Pha dung dịch chất khoỏng đậm đặc thành 5 nhúm (dung dịch mẹ ký hiệu là A, B, C, D, E)

+ Pha nồng độ dung dịch mẹ: 0,1% (gam/lớt) + Dung mụi để pha là nước cất

+ Cỏch pha:

* Pha dung dịch mẹ A: (EDTA.Na2 và Fe2(SO4)3

Sau khi cõn 2 hợp chất EDTA.Na2 cú khối lượng 0,8 gam/lớt và FeSO4.H2O cú khối lượng là 0,38gam/l. Cho riờng ra từng cốc, hũa tan bằng nước cất.

Đổ từ từ dung dịch EDTA.Na2 vào dung dịch FeSO4.H2O.

Đun dung dịch trờn bếp điện, vừa đun và vừa khuấy đều cho đến khi sụi, nhắc ra để nguội và cho thờm nước cất để cú thể tớch là 1 lớt, dón nhón ghi ký hiệu húa chất A(x 200) Dung dịch hỗn hợp này đựng trong bỡnh nỳt mài cú màu nõu bảo quản lạnh.

* Pha dung dịch mẹ B: (NH4NO3, KNO3 )

Sử dụng 2 cốc 1 lớt, mỗi cốc cú đựng 100ml nước cất.

Cõn và hũa tan hũa tan từng chất trong nhúm B(NH4NO3 cú khối lượng 82,5gam, KNO3 cú khối lượng 95gam) cho vào từng cốc khuấy đều cho tan, sau đú đổ dung dịch vào cốc 1(NH4NO3) vào cốc 2(KNO3).

Đổ hỗn hợp trờn vào cỏc bỡnh trụ cú để sắn định mức 1 lớt, cho thờm nước cất vào cho đủ 1 lớt, sau đú đậy nỳt dón nhón gi ký hiệu húa chất B(x 50) rồi bảo quản trong tủ lạnh.

*Pha dung dịch mẹ C: (H3BO3, KH2PO4 , KI, Na2MoO4.2H2O, CoCL2.6H2O)

Sử dụng 5 cốc 1 lớt, mỗi cốc cú đựng 400ml nước cất

Cõn từng húa chất để pha (Cốc 1: H3BO3 cú khối lượng 1,24 gam; Cốc 2: KH2PO4 cú khối lượng là 34 gam; Cốc 3: KI cú khối lượng là 0,166gam; Cốc 4: Na2MoO4.2H2O cú khối lượng là 0,05gam, Cốc 5: CoCL2.6H2O cú khối lượng là 0,005 gam, hũa tan từng loại húa chất riờng.

Sau đú đổ dung dịch vào theo thứ tự từ cốc 1, đến cốc 2 cho đến cốc cuối cựng. Rút vào bỡnh trụ cú cú vạnh định mức 1 lớt cho thờm nước để đủ 1 lớt.

Ghi nhón là dung dịch C(x 200) bảo quản trong tủ

*Pha dung dịch mẹ D: (MgSO4.7H2O, MnSO4.4H2O, ZnSO4.7H2O, CuSO4.5H2O)

Sử dụng 4 cốc 1 lớt, mỗi cốc cú đựng 100ml nước cất.

Cõn từng loại húa chất trong nhúm (cốc 1: MgSO4.7H2O là 74gam; Cốc 2: MnSO4.4H2O 4,46 gam; Cốc 3: ZnSO4.7H2O 1,72 gam; Cốc 4: CuSO4.5H2O 0,005g) cho cỏc húa chất vào từng cốc khuấy đều đến khi tan hết.

Sau đú đổ dung dịch theo thứ tự từ cốc 1 đến cốc 4 vào bỡnh trụ cú nắp và định mức 1lit, sau đú cho thờm nước cất để cú thể tớch cho đủ 1 lớt.

Ghi nhón là dung dịch D(x 50) bảo quản trong tủ lạnh

* Pha dung dịch mẹ E: CaCl2.2H2O