Tiến hành rửa giải bằng hệ dung môi EA /n-Hexane gradient 5%-30%. Hứng dung dịch rửa giải khoảng 50-75 mL vào mỗi lọ hứng. Kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng, tiến hành gộp các lọ có các vệt chất tương đương nhau trên bản mỏng. Dội cột bằng dung môi MeOH thu được 2 phân đoạn kí hiệu F5.1-F5.2.
Từ phân đoạn OELHF5.1 (0,48 gam) sử dụng cột có đường kính 1 cm, chiều dài là 50 cm, được rửa sạch, tráng cột bằng acetone, sấy khô, lót dưới đáy một ít bông. Chuẩn bị cột silica gel theo phương pháp nhồi cột ướt. Cân 15 gam silica gel, ngâm trương nở ngập trong n-hexane khoảng 30 phút, trong quá trình ngâm, dùng đũa thủy tinh khuấy liên tục để đuổi hết bọt khí.Rót từ từ hỗn hợp silica gel đã trương nở vào cột, vừa rót vừa vỗ nhẹ cột để đuổi hết bọt khí, để cột ổn định trong thời gian 3h. Lấy 0,48 gam OELHF5.1 được hòa với hỗn hợp n – hexane vừa đủ cho tan hết, rồi đem trộn với khoảng 0,5 gam silica gel, làm bay hơi hết dung môi trên máy quay cất chân không đến khi thu được hỗn hợp bột tơi màu nâu đen. Cho từ từ silica gel đã đính cặn vào cột, vừa cho vừa gõ nhẹ để phần silica gel phân bố đều vào cột.
Tiến hành rửa giải bằng hệ dung môi EA /n-Hexane gradient 15%-50%. Hứng dung dịch rửa giải khoảng 50-75 mL vào mỗi lọ hứng. Kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng, tiến hành gộp các lọ có các vệt chất tương đương nhau trên bản mỏng. Dột cột bằng dung môi MeOH thu được 4 phân đoạn kí hiệu F5.1.1-F5.1.4
Từ phân đoạn OELHF5.1.3 (22mg) kết tinh trong EA/n-hexane 15% thu
đươ ̣c 15 mg chất OELHF5.1.3C1 dướ i dạng tinh thể hình kim màu trắng. Quá trình phân lập chất OELHF5.1.3C1 được trình bày trên Hình 3.11.
Hình 3.11. Sơ đồ phân lập dịch chiết n – hexane của lá cây Bần giác
Hợp chất OELHF5.1.3C1 không hiện màu dưới đèn tử ngoại ở các bước sóng 254, 366 nm và hiện màu với thuốc thử Ce(SO4)2 (Hình 3.12.)