- Xỏc định thời gian khử trựng mụi trường phự hợp cho bỡnh trụ 250ml với thể tớch mụi trường 50ml/ bỡnh
1) Nghiờn cứu ảnh hưởng của nguyờn vật liệu đầu vào: Agar.
Trong nghiờn cứu nhõn giống in vitro, chất làm đụng cứng thường được dựng là agar, cú vai trũ làm giỏ thể để mụ hoặc tế bào phỏt triển. Agar là một loại polysaccarit của tảo biển. Ở 800Cagar ngậm nước chuyển trạng thỏi lỏng (sol), cũn ở 400 C thỡ nú trở về trạng thỏi rắn (gel). Hàm lượng agar trong mụi trường nuụi cấy giao động từ 5-7 g/l.
Ở thớ nghiệm này, chỳng tụi tiến hành sử dụng lượng agar ở cỏc nồng độ khỏc nhau ( 3g/l, 5g/l, 7g/l) do Việt Nam, Trung Quốc và Đức sản xuất nhằm tỡm ra nồng độ tốt nhất, qua 20 ngày theo dừi kết quả thu được như sau:
Bảng 24.1: Ảnh hưởng của agar đến sinh trưởng của chồi U29E1.
CT Xuất xứ Nồng độ
(g/l) Hỡnh thỏi chồi Ghi chỳ
3 +++++ Mụi trường dẻo, cõy sinh trưởng tốt. 5 +++ Mụi trường cứng, cõy sinh trưởng chậm 1
Việt Nam (Cụng ty
đồ hộp
Hạ long) 7 + Mụi trường cứng cõy sinh trưởng kộm, chết 3 + Mụi trường nhóo , cõy sinh trưởng kộm, cú
hiện tượng bị chết.
5 ++++ Mụi trường rất mềm, cõy sinh trưởng trung bỡnh
2 Trung Quốc
7 + Mụi trường cứng, cõy sinh trưởng kộm 3 +++++ Mụi trường dẻo, cõy sinh trưởng tốt. 5 +++ Mụi trường cứng, cõy sinh trưởng kộm,
3 Đức
7 + Mụi trường cứng, cõy sinh trưởng chậm, cú hiện tượng bị chết
Ghi chỳ: +++++ : tốt ++++: Khỏ +++: trung bỡnh + : kộm
Căn cứ vào kết quả nghiờn cứu ở bảng 24.1 cho thấy:
Với một lượng agar như nhau khi sử dụng cú xuất xứ khỏc nhau cũng cho những kết quả khỏc nhau. Dựng agar do Việt nam sản xuất ở 3g/l đó cho mụi trường cấy thớch hợp, mụi trường dẻo giỳp cỏc thao tỏc khi cấy chuyển dễ dàng, cõy sinh trưởng tốt. Nhưng cũng nồng độ 3g/l agar do Trung Quốc sản xuất lẫn nhiều tạp chất, mụi trường nhóo khi cấy cõy cú hiện tượng bị chỡm dưới thạch, cõy sinh trưởng chậm và bị chết cõy do khụng ngoi lờn khỏi thạch. Agar do Đức sản xuất nền mụi trường dẻo, cõy sinh trưởng tốt. Tuy nhiờn, giỏ cao hơn rất nhiều so với agar do Việt nam sản xuất, việc mua hàng cũng khú khăn, khụng chủ động khi cần.
Từ kết quả nghiờn cứu trờn, chỳng tụi chọn agar do Việt Nam sản xuất với nồng độ 3g/l.